大鼠寡霉素敏感相关蛋白的克隆与真核表达载体的构建的开题报告

大鼠寡霉素敏感相关蛋白的克隆与真核表达载体的
构建的开题报告
1. 研究背景
寡霉素是一种广谱抗菌素，被广泛应用于动物、植物和人类医学领域。

然而，寡霉素的使用也会导致寡霉素抗性的产生，这对于生物安全
和治疗效果产生了严重的影响。

因此，研究寡霉素敏感相关蛋白的表达
与功能机制，有助于更好地理解寡霉素抗性的产生机制及其预防和治疗。

2. 研究目的
本研究旨在克隆大鼠寡霉素敏感相关蛋白的编码基因，并构建真核
表达载体，以探究该蛋白的表达与功能，为进一步阐明寡霉素抗性产生
机制提供实验依据。

3. 研究方法
（1）大鼠体内组织提取总RNA，逆转录成cDNA。

（2）根据NCBI GenBank数据库中的大鼠寡霉素敏感相关蛋白序列，设计引物，PCR扩增该基因的全长序列。

（3）将扩增产物进行测序，通过NCBI BLAST比对序列一致性，并进行确认。

（4）将确认的编码基因克隆至真核表达载体中，如pcDNA3.1(-)表
达载体。

（5）构建重组真核表达载体并进行鉴定。

（6）载体转染至HEK293T细胞中，观察蛋白表达情况。

（7）检测蛋白的活性和其敏感性。

4. 研究意义
本研究将为寡霉素抗性的产生机制提供实验依据，并为今后寡霉素抗性的预防和治疗提供理论和实践基础。

此外，本研究还可为寡霉素相关其他蛋白的研究提供参考。