秋水仙素诱导兰属'素心黄'多倍体的方法研究

秋水仙素诱导兰属'素心黄'多倍体的方法研究
邓樱;周晔;陈继敏
【摘要】采用继代培养法和侧芽萌动培养法比较秋水仙素诱导'素心黄'多倍体的效果.结果表明,继代培养法加倍效果较好,其诱导率为16.7%;细胞学鉴定表明,该方法诱导培育的植株具有多倍体表型特征,其体细胞染色体数2n=80,未见嵌合现象,而对照2n=40.
【期刊名称】《亚热带植物科学》
【年(卷),期】2008(037)002
【总页数】3页(P38-40)
【关键词】兰属'素心黄';原球茎;根尖;秋水仙素;多倍体诱导
【作者】邓樱;周晔;陈继敏
【作者单位】珠海市农业科学研究中心,广东,珠海,519070;珠海市农业科学研究中心,广东,珠海,519070;珠海市农业科学研究中心,广东,珠海,519070
【正文语种】中文
【中图分类】Q943;S682.31
‘素心黄’是兰属的一个栽培品种，起源于天然变异植株，在兰花中小有名气，唯一令人遗憾的是花朵较小。

前人利用秋水仙碱已在许多园艺作物上诱导出有价值的多倍体[1]，如百合(Liliumd avidii)[2]、芦荟[3,4]；在兰科倍性育种方面也有不少报道，如齿斑石斛兰[5]、沉香虎头兰[6]等。

本文以秋水仙素为诱导剂，探讨继代培养法和侧芽萌动培养法对‘素心黄’多倍体的诱导效果，以期为改进该品种花较
小之缺陷提供新的途径。

1.1 材料
旺盛分化或增殖的无菌原球茎(PLB)、无菌小植株。

1.2 培养条件
光照强度1 500～2 000 lx，光照12～14h/d。

1.3 多倍体诱导方法
1.3.1 秋水仙素浓度梯度 0.1%、0.05%、0.01%、0.005%、0.001%、CK。

1.3.2 处理时间 1d、3d、5d。

以上每处理重复4次。

1.3.3 处理方法采用两种方法。

(1) 继代培养法：将旺盛分化的原球茎去顶后，接种于含有秋水仙素液体的继代培养基(花宝一号 + 6-BA 1.5mg/L)振荡培养1～5d，处理后用无菌水清洗，接种于不含秋水仙素的继代培养基中继续培养30d，然后进行分化培养，形成再生植株。

对具有多倍体表型特征的植株取其根尖进行细胞学鉴定。

(2) 侧芽萌动培养法：将旺盛生长的小苗截顶后，接种于含秋水仙素的侧芽萌动增殖培养基(花宝一号 + NAA 0.5mg/L + 6-BA 1.5mg/L)中，处理后再将小苗转入
不含秋水仙素的相同培养基中培养30d，最后壮苗、生根，进行细胞学观察。

以上分别设对照，即不加秋水仙素进行相应培养。

1.4 多倍体鉴定方法
上午9:30～10:30取幼嫩的原球茎、再生植株生长旺盛的根尖，苏木精－铁矾压
片法镜检。

2.1 倍性鉴定
以旺盛生长的未经秋水仙素处理的组培苗根尖、原球茎为材料，用苏木精－铁矾压片法观察，通过大量具有清晰的分裂中期相的细胞统计表明，这些成苗和原球茎体细胞染色体数目是稳定的(2n=2x=40)(图1)。

这一结果表明，供试的‘素心黄’
为正常的二倍体品种，可为后期的多倍体植株诱导提供可靠的倍性证据。

2.2 多倍体诱导方法研究
2.2.1 继代培养法研究结果（表1）表明，秋水仙素0.05%至0.001%及对照等各种处理都获得了再生植株，但只有0.01%和0.005%浓度获得2n=80较纯合的多
倍体植株（图2），其多倍体得率为4.1%～16.7%。

其中以0.005%处理3d的效果最好，多倍体得率高达16.7%。

2.2.2 侧芽萌动培养法从表2可见，侧芽萌动法诱导多倍体的获得率较低，而获得加倍效果的秋水仙素浓度也较前法高一个浓度梯度，即当浓度为0.05%～0.01%
时处理有效；当浓度小于或等于0.005%时，不能诱发芽体的侧芽或休眠芽体细胞大部分或完全加倍，因而无多倍体植株产生。

细胞学检查表明，该法获得了较多嵌合体，但嵌合体在试管苗形态与二倍体并无明显区别，只是在芽体的初期，基叶稍宽，其生长后期所形成的根比正常的短且粗；苗期嵌合体生长发育稍落后于正常的二倍体植株。

本实验通过继代(振荡)培养法和侧芽萌动培养法，应用不同浓度的秋水仙素对‘素心黄’进行同源多倍体诱导，结果表明，两种方法均能获得不同数量的纯合四倍体，其优劣程度为继代(振荡)培养法优于侧芽萌动培养法。

对‘素心黄’而言，较好的多倍体诱导处理组合是：液体振荡培养，以0.005%秋水仙素溶液处理旺盛增殖的原球茎3d，诱导率可达16.7%。

同源多倍体的鉴定方法是多倍体诱导研究的重要问题。

本研究采用形态初选及根尖体细胞进行倍性鉴定。

【相关文献】
[1] 张全美,等. 园艺植物多倍体诱导研究进展[J]. 细胞生物学杂志, 2003,25(4): 223-227.
[2] 张兴翠,等. 药用百合的多倍体诱导及快速繁殖[J]. 西南农业大学学报, 2003,25(1): 14-17.
[3] 张兴翠,等. 芦荟的快速繁殖与多倍体诱导[J]. 中国中药杂志, 2001,26(8): 538-540.
[4] 王俐,等. 库拉索芦荟的多倍体诱导及其变异初报[J]. 云南植物研究, 2001,23(4): 493-496.
[5] 李涵,等. 齿瓣石斛多倍体的诱导初报[J]. 云南植物研究, 2005,27(5): 552-556.
[6] 李涵,等. 沉香虎头兰多倍体诱导及其鉴定[J]. 园艺学报, 2005,32(5): 853.。