叶酸受体介导米托蒽醌白蛋白纳米粒的体内分布及药效学研究

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叶酸受体介导的纳米递药系统

叶酸受体介导的纳米递药系统摘要】：叶酸靶向纳米递药系统既具有叶酸-叶酸受体的主动靶向又具有纳米递药系统的被动靶向的优势，可实现化疗药物对肿瘤组织的靶向递送，有效地提高药物疗效，减少毒副作用。

本文就近年来研究较多的叶酸脂质体、叶酸树突状纳米粒子、叶酸纳米胶束、叶酸纳米球等靶向递药系统进行综述。

【关键词】：叶酸；叶酸受体；恶性肿瘤；纳米递药系统；靶向治疗【Abstract】 Folate receptor mediated active-targeting and passive-targeting make nano-drug delivery system(DDS) to increase therapeutic index of drug and cut down its side effect. Moreover, DDS is more stable, controlled release of drug and so on. In this article, we review folate-liposome, Folate-dendrimer, Folate-micelle, Folate-nanoshere. Compared to traditional chemotherapy drugs, Folate-DDS is a promising stable drug carrier.【Keyword】：folate; folate receptor; malignant tumor; nano -drug delivery system; targeting therapy化疗是临床治疗肿瘤的主要手段。

目前化疗药物存在的问题就是传统的普通剂型缺乏靶向性，在杀伤肿瘤细胞的同时也对正常细胞产生毒性，使得患者不能耐受化疗[1]。

靶向递药系统将化疗药物直接靶向于肿瘤组织，在降低治疗剂量的同时提高抗肿瘤药物的疗效，避免其在非靶向部位的聚集。

叶酸靶向的人参皂苷Rg5牛血清白蛋白纳米颗粒的制备及生物学研究

叶酸靶向的人参皂苷Rg5牛血清白蛋白纳米颗粒的制备及生物学研究人参皂苷Rg5(Rg5)是从天然草本植物人参中提取的三萜类皂苷,对一些癌细胞具有不同程度的抑制作用,是最有效的抗癌药物之一。

然而,Rg5的治疗潜力受其低的生物利用度,短的生物半衰期和差的靶向性等因素的限制。

在纳米技术大背景下,研究工作者热衷于将纳米医药和肿瘤学相结合。

纳米药物传送系统具有靶向性,可降解性和生物相容性,有望克服Rg5的缺点。

因此,我们制备了叶酸(FA)靶向的Rg5负载的牛血清白蛋白(BSA)纳米颗粒,即FA-Rg5-BSA NPs。

旨在增强Rg5药效同时,提高药物的靶向递送能力。

基于此,本文主要的实验研究结果如下:(1)通过采用去溶剂化法制备Rg5-BSA NPs,利用酰胺化反应在Rg5-BSA NPs表面的活性氨基上修饰叶酸分子,制备新型的Rg5靶向药FA-Rg5-BSA NPs。

采用单因素实验优化Rg5-BSA NPs和FA-Rg5-BSA NPs的制备工艺。

最终优化的结果为:BSA浓度为15 mg/mL、BSA溶液pH值为9,水无水乙醇体积比1:3,Rg5与BSA摩尔比20:1,滴加乙醇速率为1.5-2.0 mL/min,搅拌转速600 r/min,搅拌时间24 h,叶酸与BSA反应的摩尔比为15:1,加入叶酸后反应时间6 h,离心转速10000 r/min。

(2)制备出的FA-Rg5-BSA NPs水合直径为201.4 nm,PDI 为0.081,且zeta电位是负值。

呈小圆球形、外表光滑。

载药量为12.64±4.02%,包封率为73.59±5.50%,叶酸偶联量为94.6μg/mg BSA NPs。

FA-Rg5-BSA NPs水溶液在4℃下能维持8周左右的稳定性。

在酸性(pH 5)条件,Rg5从颗粒中释放速度要快于在中性环境。

(3)体外细胞MTT毒性实验证明,与Rg5-BSA NPs和Rg5相比,FA-Rg5-BSA NPs 在MCF-7细胞中具有更高的抑制癌细胞增殖的能力,而在正常L929细胞中具通过有较高的细胞存活率。

叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的体外生物活性的研究△

叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的体外生物活性的研究△王莺【期刊名称】《数理医药学杂志》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】Objective:T he investigation about in vitro biological activites of folate receptor‐mediated de‐livery of paclitaxel nanoparticlesystem .Methods :To evaluate the targeted effect of heparin‐folate‐paclitaxel nanoparticles ,KB cells and A549 cells were employed as folate receptor overexpressing cancer cells and folate receptor deficiency cancer cells treated with nanoparticles .The anticancer inhibition activity of heparin‐folate‐p aclitaxel nanoparticles was measured by MTT assay and cell cycle profile of KB cell treated with heparin‐fo‐late‐paclitaxel nanoparticles was assayed by flow cytometry .Results:The cellular uptake experiment sugges‐ted folate receptor‐mediated endocytosis was considered to affect the cellular uptake eficiency of heparin‐fo late‐paclitaxel nanoparticles . The heparin‐folate‐paclitaxel nanoparticles exhibited increased cytotoxicity (IC50 0 .06 g/mL) as compared to free drug .Flow cytometry analysis showed tha t KB cells treated with hepa‐rin‐folate‐paclitaxel nanoparticles were arrested in the G2/M phase of the cell cycle .The results of MTT as‐say was in accordance with that of cellular uptake experiment .Conclusions :Heparin‐folate‐paclitaxel nanop‐articlesd isplayed folate receptor‐mediated endocyctosis effect .The nanoparticle system could be used as a promising cancer cell specific delivery system for further investigation .% 目的：叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的的体外生物活性研究。

叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究

叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究胡丹丹; 李磊; 宁偎峰; 赵莹; 张琳琳; 胡栎芳; 孟艳秋【期刊名称】《《沈阳化工大学学报》》【年(卷),期】2019(033)003【总页数】6页(P218-223)【关键词】叶酸; 盐酸阿霉素; 白蛋白; 纳米粒; 体外药效【作者】胡丹丹; 李磊; 宁偎峰; 赵莹; 张琳琳; 胡栎芳; 孟艳秋【作者单位】沈阳化工大学制药与生物工程学院辽宁沈阳110142【正文语种】中文【中图分类】R914.2阿霉素(Doxorubicin,DOX)，属于蒽环类广谱抗肿瘤抗生素，临床常用其盐酸盐，也称多柔比星，可对机体产生广泛的生物学效应.阿霉素细胞毒性作用强烈，对肝癌、甲状腺癌、淋巴癌、肺癌的疗效好，对膀胱癌、支气管癌也有一定的作用.但是，如果静脉注射高剂量的DOX将会引起强烈的心脏及脊髓毒副作用，这些缺点成为限制DOX临床应用的主要因素[1].为了提高DOX在体内的生物利用度，减少其毒副作用，增加药物的稳定性，国内外的许多学者将其载于纳米微粒、脂质体等药物载体系统中，将小分子药物与高分子载体采用纳米技术相结合，利用配体与受体间的特异性亲和作用，制成具有靶向性和缓释性等优点的纳米药物，从而降低药物的毒性与不良反应[2-3].Luten等[4]利用叶酸、聚乙二醇和聚环邻腈制备了一种叶酸靶向载体，报告基因pCMVLacZ被包裹进入该叶酸靶向载体；对其进行的人卵巢癌OVCAR3细胞体外转染实验结果显示，该叶酸复合物的转染效率是无叶酸复合物的3倍，说明这是一种具有潜在开发价值的靶向性基因载体.Liang等[5]为了减小基因载体的毒性并优化其功能，利用聚乙二醇和聚乙烯亚胺既克服了转染效率低，又高效地将质粒DNA(pDNA)浓聚到纳米粒内部，制成了叶酸-聚乙二醇-聚乙烯亚胺/pDNA复合物，将异硫腈酸荧光素结合到这种复合物的氨基上，与叶酸受体阳性的人胚肾上皮细胞HEK293和人脑胶质瘤C6细胞共孵育，结果显示肿瘤细胞显著吞噬荧光物质.细胞实验显示该叶酸复合物毒性较低，叶酸复合物组转染效率是无叶酸组的15倍，故叶酸是较为理想的靶向治疗载药系统.本文以一种无免疫原性、生物可降解材料牛血清白蛋白为载体，将叶酸偶联在其表面，制备载阿霉素的白蛋白纳米粒.利用配体与受体间特异性亲和作用制备高载药量和高包封率的纳米粒，并对其粒径、释放速率等性质进行考察；以阿霉素粉剂为对照，考察其体外抗肿瘤活性，为叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒的进一步开发研制奠定基础[6].1 仪器和试剂仪器：FA1204B电子分析天平，沈阳龙杰仪器有限公司；马尔文激光粒度测试仪，马尔文帕纳科有限公司；MR700型酶联免疫检测仪，费尔伯恩精密仪器(上海)有限公司；TU-1901双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；高效液相色谱仪，安捷伦有限公司；DF-J01离心机、ZF7-荧光分光光度计，巩义市英裕裕华仪器厂；透射电子显微镜，赛默飞世尔科技电子有限公司； JK-CI-50CH-CO2恒温培养箱，上海精学科学仪器有限公司；KDQX-100超声波清洗机，科电超声有限公司；DF101S集热式恒温加热磁力搅拌器，郑州科丰仪器有限公司；LIOO S600T-电子显微镜，费尔伯恩精密仪器有限公司.试剂：牛血清白蛋白，上海金穗生物科技有限公司；叶酸Sigma，湖北鑫润德化工有限公司；二环己基碳二亚胺( Acros)、N-羟基琥珀酰亚胺Sigma、胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)、三乙胺、二甲基亚砜(DMSO)，天津博迪化工股份有限公司；人肝癌细胞(HEPG2)、人胃癌细胞(SGC7901)，沈阳药科大学；磷酸盐缓冲液(PBS)，自制.2 方法2.1 阿霉素白蛋白纳米粒(BSANPs-DOX)的制备称量白蛋白100 mg和阿霉素1 mg加入1 mL水溶解，放入25 ℃的恒温磁力搅拌器中搅拌2 h，用NaHCO3碱溶液调节溶液的pH为8～9，使用恒流泵将4 mL体积分数为95 %的乙醇在8 min内缓慢加入溶液中，加入体积分数8 %的戊二醛溶液20 μL，在室温下进行交联固化反应，固化完毕后，继续搅拌12 h，调节离心机的转速为15 000 r/min，高速离心10 min,倾去上清液，得到白蛋白纳米粒悬液，超声匀化10 min，过0.22 μm的滤膜，即可得到纳米粒子[7].2.2 叶酸活性酯的制备准备0.5 mL的三乙胺，将其缓慢加入20 mL的二甲亚砜溶液中，静置一会使其冷却，在冷却好的二甲亚砜溶液中加入1 mg的叶酸粉末，用玻璃棒缓慢搅拌使其溶解，加入适量的二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，在室温下使其充分反应12 h.过滤后减压浓缩成为干燥粉末状物质，用2倍体积的乙醚将剩余杂质析出，得到淡黄色粉末，该淡黄色粉末即为叶酸活性酯.2.3 叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/DOX)的制备叶酸活性酯上的羧基可以与牛血清白蛋白表面的氨基酸残基上的氨基发生偶联反应.取适量阿霉素白蛋白纳米粒，用缓冲溶液调节pH至9，将之前制备好的黄色叶酸活性脂粉末溶解适量，加入混悬液中，搅拌均匀.用葡萄糖凝胶柱进行上柱分离，收集先流下来的白色光亮部分液体，即可得到叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/DOX)混悬液[6].2.4 叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/DOX)的性质2.4.1 叶酸偶联量的测定①叶酸活性酯标准曲线测定：精密称取定量的叶酸活性酯，用容量瓶定量配置成40 mg/L的溶液，并用容量瓶定量稀释质量浓度分别为40、20、10、8、2 mg/L.全波长分光光度计检测，绘制叶酸活性酯标准曲线.将FA-BSANPs/DOX用胰蛋白酶在37 ℃恒温磁力搅拌器内水解4 h，参照叶酸活性酯标准曲线计算不同牛血清白蛋白上偶联叶酸的量.②设置对照组，即未加胰蛋白酶水解的FA-BSANPs/DOX，其他条件均相同.用全波长分光光度计检测样品内叶酸的含量[8].2.4.2 形态观察取FA-BSANPs/DOX适量，用蒸馏水稀释后，滴于铜网上制样，用滤纸吸去多余的液体，自然晾干，于透射电镜下观察其形态.2.4.3 粒径测定取FA-BSANPs/DOX适量，用蒸馏水稀释成适宜的浓度，采用马尔文激光粒度仪测定粒径及粒径分布.2.4.4 包封率和载药量的测定采用超滤法对游离DOX和FA-BSANPs/DOX进行分离.精密吸取FA-BSANPs/DOX样品溶液0.15 mL于10 mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度.取稀释后的样品溶液于超滤装置中进行超滤，收集续滤液.精密吸取稀释后的样品溶液和续滤液0.2 mL，利用柱前衍生化-高效液相色谱法分别测定游离药物质量(m游)和纳米粒总药物质量(m总).按照中国药典(2015版)固体脂质纳米粒包封率的计算公式计算包封率包封率ER=(m总-m游)/m总×100 %.载药量DL=(m总-m游)/mc×100 %.式中：m总表示总药物质量；m游表示游离药物质量；mc为混合脂质质量.2.5 体外释放取20 mg游离DOX和FA-BSANPs/DOX置于经过预处理的透析袋中，加入5 mL PBS缓冲液(pH=7.4),用透析夹夹紧，置于盛有300 mL PBS的大烧杯中，模拟体内环境在水浴箱中恒速震动(37 ℃,20 r/min).分别于0.5、1、3、5、8、12、24 h吸去1 mL释放液，并及时补充等量恒温的PBS释放介质.用ELISA(酶联免疫吸附测定)法测定不同时刻样品上清液的光密度值，并根据前述标准曲线转换成DOX含量，计算每次取样时释放的DOX总量.上述步骤重复6次，取其平均值，制作DOX纳米粒体外释放曲线[8-9].2.6 体外药效学研究2.6.1 测试药品的样品配制白蛋白纳米粒溶液(BSANPs)：制备白蛋白纳米粒质量浓度为20 g/mL的空白材料溶液，用细胞培养液稀释至所需浓度，过0.22 μm滤膜.阿霉素水溶液(DOX)：配制盐酸阿霉素质量浓度为1 g/L的盐酸阿霉素溶液，用细胞培养液稀释至所需浓度，过0.22 μm滤膜.叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/DOX)：制备质量浓度为4 g/L的FA-BSANPs/DOX溶液，并用细胞培养液稀释至所需浓度，过0.22 μm滤膜.2.6.2 HEPG2细胞与SGC7901细胞的培养配制含质量分数为10 %的胎牛血清、100 U/mL青霉素、质量分数为1 %非必需氨基酸的无菌DMEM培养基(培养箱：温度37 ℃，CO2体积分数为5 %,饱和湿度，次日更换培养液)，将HEPG2细胞与SGC7901细胞置于其中进行培养.待培养液中的细胞覆盖率达80 %～90 %时，吸去原有培养基，用PBS将细胞表面的培养液洗净.取质量分数0.25 %胰蛋白酶消化单层培养的SGC7901(HepG2) 细胞，用质量分数为10 %的胎牛血清RPMI 1640培养液调整细胞数为2×104～4×104/mL的单细胞悬液，以每孔200 μL接种于96孔培养板中.将培养板放入CO2培养箱,在37 ℃、体积分数为5 % CO2及饱和湿度条件下培养，等待细胞贴壁进行下一步实验.2.6.3 FA-BSANPs/DOX与DOX对HEPG2细胞和SGC7901细胞体外抗肿瘤活性[10-11]根据前期预实验，本次实验所选用药物的质量浓度梯度为33 mg/L、11 mg/L、3.6 mg/L、1.2 mg/L、0.4 mg/L.待培养细胞贴壁后，在96孔板中分别加质量浓度为33 mg/L、11 mg/L、3.6 mg/L、1.2 mg/L、0.4 mg/L的待测药物DOX、BSANPs、FA-BSANPs/DOX，每浓度6个孔，实验设空白对照组.将96孔板置于CO2培养箱，在37 ℃、体积分数为5 % CO2及饱和湿度条件下培养72 h.培养72 h后，孵育结束后取出96孔板，弃去培养液，每孔加入冷PBS 200 μL清洗，弃去PBS，每孔再加入MTT溶液(5 g/L 20 μL)，37 ℃继续培养4 h，中止培养，离心弃去孔内上清液，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜沉淀，超声振荡10 min 混匀.在MR700型酶联免疫检测仪上测定490 nm处各孔吸收度 (A) 值，计算各组相对细胞活度.按公式:抑制率=[1-(A实验组-A空白组)/(A对照组-A空白组)]×100 %.计算化合物抑制50 %细胞生成时的药物浓度，即IC50值，重复测试3次，取平均值为最终结果.3 结果3.1 叶酸偶联量的测定叶酸活性酯在281 nm处有最大吸收峰，如图1所示，其中1、2和3分别为叶酸活性酯标准品、胰蛋白酶水解的FA-BSANPs/DOX样品和未水解的FA-BSANPs/DOX样品.由图1可见：对照组样品3中无游离叶酸存在，从而证明了水解组样品中检测出的叶酸是已被白蛋白偶联的部分.1 叶酸活性酯2 胰酶水解的载阿霉素的叶酸-白蛋白纳米粒3 胰酶未水解的叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒图1 叶酸活性酯紫外光谱Fig.1 Ultraviolet spectrogramof floate active ester3.2 叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/DOX)形态观察FA-BSANPs/DOX电镜图如图2所示.图2 叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒的透射电镜图Fig.2 TEM image of FA-BSANPs/DOX由图2可见：FA-BSANPs/DOX呈球形，粒度较为均匀，分散性好.3.3 FA-BSANPs/DOX粒径分布、包封率及载药量的测定采用马尔文粒度仪测定FA-BSANPs/DOX的粒径大小，平均为(137.43±0.67) nm，90 %的粒径小于139 nm，粒度分布较为均匀.采用柱前衍生化-高效液相色谱法测定其包封率为(89.43±0.67) %，载药量高达(19.03±0.32)%.3.4 体外释放FA-BSANPs/DOX累积释放曲线如图3所示.结果表明：0.5 h累积释放百分率仅为(10.10±2.98) %，3 h内累积释放(22.45±2.72) %，24 h 累积释放(26.71±1.38) %，说明与DOX粉剂相比，FA-BSANPs/DOX释放缓慢，并无明显突释现象.图3 阿霉素粉剂和叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒的体外释放曲线Fig.3 In vitro release of DOX and FA-BSANPs/ DOX microspheres白蛋白纳米粒(BSANPS)、阿霉素(DOX)和叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/BOX)对人肝癌细胞HEPG2、胃癌细胞SGC7901的相对活度如图4、图5所示.结果表明：白蛋白纳米粒(BSANPs)对HEPG2和SGC7901基本无影响，叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒的相对活度低于阿霉素粉剂，FA-BSANPs/DOX 和DOX对高表达的人肝癌细胞HEPG2细胞的IC50值分别为4.98 μmol/L和5.13 μmol/L，对人胃癌细胞SGC7901的IC50值分别为4.85 μmol/L和5.02 μmol/L，说明与粉剂相比FA-BSANPs/DOX的抗肿瘤活性略强[12-13].图4 白蛋白纳米粒(BSANPs)、阿霉素(DOX)和叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒FA-BSANPs/ DOX对人肝癌细胞HEPG2的相对活度Fig.4 The cell viability of BSANPs、 DOX and FA-BSANPs/DOX in HEPG2图5 白蛋白纳米粒(BSANPs)、阿霉素(DOX)和叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒(FA-BSANPs/ DOX)对人胃癌细胞SGC7901的相对活度Fig.5 The cell viability of BSANPs、 DOX and FA-BSANPs/DOX in SGC79014 结论与展望以白蛋白为载体，利用叶酸酯结构中的羧基与白蛋白表面的活性氨基形成配位结合物的原理，简单、方便地制备出高载药量、高包封率的叶酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒，载药量高达19.03且药物包封率较好.体外释放研究表明所制备的FA-BSANPs/DOX显著降低了DOX的释放速度，具有缓释性.体外药效学实验结果表明：与DOX粉剂相比，FA-BSANPs/DOX对HEPG2细胞和SGC7901细胞的抗肿瘤活性较强，其原因可能是通过配位作用将阿霉素与白蛋白螯合形成纳米粒后，可以促进FA-BSANPs/DOX的细胞摄取；偶联叶酸后，叶酸与肿瘤细胞表面叶酸受体有特异性亲和，从而增加了其对肿瘤细胞的靶向性，抑制了HEPG2细胞和SGC7901细胞的生长，有助于抗肿瘤效果的提高.由此可见，叶酸偶联载阿霉素白蛋白纳米粒具有较高的应用价值,对FA-BSANPs/DOX的体内抗肿瘤效果以及毒性的研究是后期研究的重点内容.【相关文献】[1] ASHKENAZI A,DIXIT V M.Death Receptors:Signaling and Modulation[J].Science,1998,281(5381):1305-1308.[2] XIONG Y,JIANG W,SHEN Y,et al.A Poly (γ,L-glutamic acid)-citric Acid BasedNanoconjugate for Cisplatin Delivery [J].Biomaterials,2012,37(29):360.[3] 唐晓星.靶向顺铂胶束药物的制备及其在癌症治疗中的应用[D].上海：华东师范大学,2011:79-88.[4] LUTEN J,STEENBERGEN M J V,LOK M C,et al.Degradable PEG-Folate Coated Poly (DMAEA-co-BA) Phosphazene-based Polyplexes Exhibit Receptor-Specific Gene Expression[J].European Journal of Pharmaceutical Sciences,2008,33(3):241-251.[5] LIANG B,HE M L,XIAO Z P,et al.Synthesis and Characterization of Folate-PEG-grafted-hyperbranched-PEI for Tumor-Targeted Gene Delivery [J].Biochemical & Biophysical Research Communications,2008,367(4):874.[6] 赵洁,夏亚丹,刘艳艳.叶酸偶联白蛋白纳米粒的应用研究进展[J].山东医药,2015(22):97-100.[7] 魏雪.阿霉素白蛋白纳米粒的研制及性质的初步考察[D].石家庄：河北医科大学,2008：45-48.[8] LI L,ZHAO X L,YANG C,et al.Preparation and Optimization of Doxorubicin-Loaded Albumin Nanoparticles Using Response Surface Methodology [J].Drug Development & Industrial Pharmacy,2011,37(10):1170-1180.[9] SUDIMACK J,LEE R J.Targeted Drug Delivery via the Folate Receptor [J].Advanced Drug Delivery Reviews,2000,41(2):147.[10]任伟芳,宋娟,朱珊珊,等.新型棕榈酰谷氨酸-顺铂纳米粒的制备及其体外药效研究[J].沈阳药科大学学报,2016,33(12):927-931.[11]LEE R J,LOW P S.Delivery of Liposomes into Cultured KB Cells via Folate Receptor-Mediated Endocytosis [J].The Journal of Biological Chemistry,1994,269(5):3198.[12]邢志华.载阿霉素的叶酸-壳聚糖微球的制备及其体外缓释性研究 [J].黑龙江大学自然科学学报,2012,29(4):511-514.[13]汤佳明,赵修华,祖元刚.盐酸表阿霉素纳米靶向制剂的缓释效应[J].中国组织工程研究,2013,17 (21):3846-3853.。

受体介导的叶酸-牛血清白蛋白肿瘤细胞靶向给药系统的研究的开题报告

受体介导的叶酸-牛血清白蛋白肿瘤细胞靶向给药系统的研
究的开题报告
研究背景
肿瘤是人类健康的重要威胁之一，治疗效果存在一定限制，因此开发新型肿瘤治疗方法势在必行。

目前，一些纳米给药系统已被用于肿瘤治疗。

其中牛血清白蛋白（BSA）纳米粒子具有较好的生物相容性和生物降解性，在肿瘤治疗中被广泛研究。

然而，现有的BSA纳米粒子给药系统存在药物转运效率低、药物稳定性差、靶向性不够
等问题。

研究内容
本研究将开发一种新型BSA纳米粒子给药系统，该系统将聚焦于以叶酸为引物
的受体介导的肿瘤细胞靶向性。

具体而言，将选择叶酸作为靶向分子，通过BSA纳米
粒子表面的化学修饰，使其与叶酸有效结合，从而实现肿瘤细胞的靶向输运。

研究方法
本研究将采用化学合成的方法制备BSA纳米粒子，并通过化学修饰方法，在
BSA纳米粒子表面引入叶酸，从而构建具有靶向性的给药系统。

通过扫描电镜、荧光
显微镜、动态光散射仪等实验手段，对制备的靶向性BSA纳米粒子进行形态、大小、
粒散分布等表征分析；再进行体外细胞实验，探究该靶向性给药系统在细胞内的吸收、转运和毒性；最后进行动物体内实验，检测其肿瘤靶向性和治疗效果。

预期结果
本研究将探究一种新型叶酸-BSA纳米粒子给药系统，在肿瘤治疗中的应用前景。

预计，该给药系统将具有较高的靶向性和药物转运效率，能够有效地减轻肿瘤患者的
副作用，并提高治疗效果。

针对骨肿瘤的二级靶向盐酸米托蒽醌纳米粒的制备及体内外性质评价

针对骨肿瘤的二级靶向盐酸米托蒽醌纳米粒的制备及体内外性质评价石勇平;苏志桂;肖衍宇;孙敏捷;平其能;宗莉【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2013(44)4【摘要】薄膜分散法制备了阿伦磷酸(ALN)配基和叶酸(FOL)配基共同修饰的二级靶向盐酸米托蒽醌(MTO)纳米粒(ALN-FOL-MTO-NLCs)。

ALN-FOL-MTO-NLCs 经原子力显微镜观察呈较规则类球体,平均粒径为(45.9±2.7)nm,Zeta电位为-(16.78±2.17)mV,包封率为(99.7±0.1)%。

体外研究中ALN-FOL-MTO-NLCs显示出良好的骨盐吸附能力和K562细胞主动靶向能力,1 h内72.4%的纳米粒能吸附于羟基磷灰石,其K562细胞摄取量是普通纳米粒(MTO-NLCs)的3.19倍。

高效液相色谱法研究了ALN-FOL-MTO-NLCs大鼠体内药代动力学及小鼠体内组织分布行为,其大鼠血浆AUC分别为MTO-NLCs和药物水溶液(MTO-INJ)的5.0和63.1倍,小鼠股骨AUC是叶酸单靶向制剂(FOL-MTO-NLCs)和药物水溶液(MTO-INJ)的3.7和5.0倍,且与FOL-MTO-NLCs相比,有效降低了药物在肝、脾、心、肾的分布,进一步降低了药物毒性。

因此,与MTO-INJ和MTO-NLCs相比,ALN-FOL-MTO-NLCs具备良好的长循环效果,靶向骨组织的能力增加,且具备良好的肿瘤细胞靶向能力。

【总页数】7页(P321-327)【关键词】骨肿瘤;二级靶向;盐酸米托蒽醌;纳米粒;制备;药代动力学;组织分布【作者】石勇平;苏志桂;肖衍宇;孙敏捷;平其能;宗莉【作者单位】中国药科大学药剂学教研室【正文语种】中文【中图分类】R944【相关文献】1.胰岛素/维生素B12-透明质酸纳米粒的制备及口服给药体内外性质的评价 [J], 韩丽娜;尹丽芳;赵月芳;梁扬;黄欢;冯敏2.复方盐酸表阿霉素纳米粒的制备及体内外性质的观察 [J], 纪建松;滕皋军;杨宏远;宋晶晶;卢陈英;傅红兴3.新型两亲性糖聚肽肝癌靶向诊疗一体化纳米粒子的制备及体内外实验研究 [J], 赖胜圣; 刘虔铖; 金浩宇; 刘文平; 朱慧儿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

叶酸偶联白蛋白纳米粒的应用研究进展

的ＰＢＳ，加入ＥＤＣ活化，加人含人血清白蛋白纳米
注射混悬液上市以后，白蛋白纳米粒作为靶向药物
载体引起临床关注。白蛋白纳米粒载药系统具有靶
向、缓释，生物利用度高，减少用药过程中的不良反应等优点，其在体内主要输送到单核巨噬系统（ＲＥＳ
１叶酸偶联白蛋白纳米粒的制备方法
酸偶联率为２７．２６％。
２叶酸偶联白蛋白纳米粒载体的靶向性
白蛋白表面活性氨基（暴露于白蛋白纳米粒表
叶酸偶联白蛋白纳米粒具有白蛋白纳米粒的被
面的赖氨酸一氨基及末端氨基）是进行化学修饰的有效连接部位，可与叶酸发生偶联反应。文献报道的叶酸偶联白蛋白纳米粒的制备方法主要是首先制备出白蛋白纳米粒（采用去溶剂化等方法制备）和
中图分类号：Ｒ７３０．５３
文献标志码：Ａ
文章编号：１００２ — ２６６Ｘ（２０１５）２２ — ００９７－０４
传统的抗肿瘤药物缺乏靶向性，不良反应多 … 。近年来肿瘤的靶向给药体系为研究热点。
酸偶联白蛋白纳米粒的相关国内外文献，现对其作为靶向药物载体的制备方法、靶向性、载药方式及其应用作一综
述。
关键词：叶酸；白蛋白纳米粒；叶酸受体；药物载体；肿瘤；主动靶向性

白蛋白在靶向给药以及长效给药系统的研究进展

白蛋白在靶向给药以及长效给药系统的研究进展摘要：由于白蛋白材料具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等特点，使其在药物输送方面具有许多优越性，同时白蛋白含有许多表面活性氨基可供结构修饰，大大有利于载药白蛋白微粒在体内实现主动靶向性，近年来白蛋白在靶向给药系统中的应用得到了很大的发展；另外白蛋白的半衰期长、稳定性高等特征能有效延长蛋白类药物半衰期，与PEG修饰这种常用的延长药物半衰期的方法相比，更加有效，且通过白蛋白融合技术构建的蛋白有较高的表达水平，从而引起国内外研究者的重视。

关键词：白蛋白，载体，靶向，半衰期白蛋白为含585个氨基酸残基的单链多肽，是分子量为6.65×104的血浆蛋白，分子中含1 7个二硫键和1个游离的巯基，不含糖组分。

肝脏的合成速率约为0.7 mg/( h·克肝脏) -3(即10～15 g/d) ，平均半衰期为1 9d。

白蛋白在体内具有重要的生理功能，是血液总渗透压的主要调节物质，分解成氨基酸后能向周缘组织提供养分；可结合多种物质，如代谢物、调节物、维生素、金属离子及药物等，是许多内源性和外源性物质的仓储及转运的工具。

许多难溶性物质进入血管后可通过与白蛋白的结合而被运输。

研究中常用的白蛋白包括人血清白蛋白（human serum albumin，HAS）和牛血清白蛋白( bovine serum albumin，BSA) 。

白蛋白因其自身具有诸多优点，如安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等，使其在药物输送方面具有许多优越性，近年来白蛋白在靶向给药系统中的应用得到了很大的发展。

另外白蛋白半衰期长、稳定性高、表达水平高等特征也使得其大力应用于蛋白融合技术以延长药物半衰期。

近年来国内外研究人员对白蛋白的研究越来越重视，研究成果也层出不穷，本文将对其在提高药物靶向性和延长药物半衰期方面的应用加以综述。

1.白蛋白提高药物靶向性作用的研究进展靶向给药系统（targeting drug delivery system, TDDS），一般是指经某种途径给药后，药物通过特殊载体的作用特异性地浓集于靶部位的给药系统。

叶酸介导靶向砒霜纳米粒的实验研究

ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｔｙｔｅｓｎｈｔｒｃｄｒｏｌｅｏｊｇｔｄｂｖｎｅｌｌｕｎ（ｓｒｃ：ｊｃｉｏｓｄｙｔｅｃｐｏｅｕｅｆｏａ —ｃｎａｏｉｅｓｎｍａｍｉＦ—ＢＡ）ａｄｐｅａａｏｖｕｈｉｆｔｕｅｂＳｎｒｒｔｎｐｉ
ｔｅｏｔｏｏａｅｔｅｉｎＴｅｎｎｐｒｉｌｓｗｒｒｐｅｙｄｓｌａｉｎｍｅｈｄ，ｎｅｐｃｌｒｔｘｃｔｆｈｒｈｇｎｌｓｄｓｇ．ｈａｏａｔｅｅｅｐｅａｄｂｅｏｖｔｔｏａｄｔｅｕｉｉｉｏｔｃｒｏｈａｏｙＦ—ＢＡＮＰｏ５９ＳｎＡ４
叶酸介导靶向砒霜纳米粒的实验研究
（．１南昌大学医学院，江西南昌３００；，朱亮刘海３０６
２广东药学院药科学院，．广东广州５００）１０６
摘要：目的研究叶酸偶联牛血清白蛋白的合成工艺，包裹砒霜的白蛋白纳米粒并检验其对靶细胞的杀伤作用。方制备
ｏｌｕｎｎｎｐｒｉｌｓｅｔａｐｎｒｅｉｒｘｄ，ｎｏｅａｎｅｐｃｌｒｔｘｃｔｆｎｎｐｒｃｅｎｔｒｅｉｇｃｌ．ｅｈｆａｂｍｉａｏａｔｃｅｎｒｐｉｇａｓｎｃｔｉｉｅａｄｔｘｍｉｅｔｅｕｉｏｉｉｏａｏａｔｌｓｏｓｏｉａｉｗｓｃｎｕａｅｏｉｅｓｒｍａｂｍｎｖｏｄｎｉｇａｅｔｗｔｉｅｅｔｙｔｅｃｆｍｌｏＦ—ＢＡｂｄＦｌｃａｏｊｇｔｔｂｖｅｕｉｉｃｎｅｓｇｎ，ｅｓｄｅｔｓｓｎｈｔｒｕａｆｅｄｄｏｎｕｌａｎｕｄｈｂｉｏＳｙ

叶酸受体介导卵巢癌细胞靶向白蛋白纳米粒的体外研究

叶酸受体介导卵巢癌细胞靶向白蛋白纳米粒的体外研究*张良珂1侯世祥1△毛声俊1魏大鹏2宋相容1乔小蓉31. 四川大学华西药学院药剂教研室（成都610041）；2. 四川大学基础医学与法医学院免疫教研室；3. 四川大学分析测试中心【摘要】目的研究能通过叶酸受体介导靶向肿瘤细胞的叶酸偶联白蛋白纳米粒。

方法利用叶酸活性酯在碱性条件下与白蛋白纳米粒表面上的氨基反应，制得叶酸偶联的白蛋白纳米粒。

以荧光定量法确定浓度、时间、游离叶酸对肿瘤细胞摄取叶酸偶联白蛋白纳米粒的影响程度。

结果成功制备了叶酸偶联白蛋白纳米粒。

叶酸偶联白蛋白纳米粒的肿瘤细胞摄取量随纳米粒浓度增大、培养时间延长而增加，肿瘤细胞对叶酸偶联白蛋白纳米粒的摄取可被过量的外源性游离叶酸所抑制。

结论叶酸偶联白蛋白纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入胞，可显著靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。

【关键词】白蛋白纳米粒叶酸受体靶向Study on the ovarian tumor cell targetability of folate receptor-mediated albumin nanoparticles 【Abstract】Objective To study folate-conjugated albumin nanoparticles targeting to tumor cells via folate receptor-mediated endocytosis. Methods The activated folic acid (N-hydroxysuccinimide ester of folic acid) were conjuated to the surface of BSANP via the amino groups. The extent that concentration, incubated time and free folate influenced uptake of folate-BSANPs by SKOV3 cell was determined respectively using fluorescence spectrophotometer. Results Folate-conjugated BSANP (Folate-BSANP) was successfully achieved. Uptake of folate-BSANPs by tumor cells was gradually increased while extending incubated time or increasing concentration of folate-BSANPs and could be competitively inhibited by excess free folate. Conclusion Folate-BSANP could be delivered into tumor cells via folate receptor-mediated endocytosis and significantly targeted to tumor cells with rich folate receptors.【Key words】Albumin nanoparticles ; Folate receptor ; Targeting随着对细胞膜表面叶酸受体认识的逐步深入研究发现，在多种肿瘤细胞(如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌和肾细胞癌等)膜表面上的叶酸受体活性和数量显著高于一般正常细胞，为叶酸受体介导药物靶向于肿瘤细胞的研究奠定了基础[1]。

叶酸修饰的白蛋白纳米粒的制备及理化性质的研究

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ；ｆｏｌａｔｅ；ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ；ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
紫杉醇（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ，ＰＴＸ）是从红豆杉科植物的树皮中提取得到的单体成分［１］，其抗肿瘤机制是通过诱导和促使微管蛋白
聚合成微管，同时抑制所形成微管的解聚，从而抑制了肿瘤细胞分裂和增殖［２］。美国国立癌症研究所在体外人癌细胞株筛选
送中，如ＰＴＸ聚合物纳米粒［４］、ＰＴＸ亚微乳［５］、ＰＴＸ微球［６］等，在增加药物靶向性、降低不良反应方面取得了很好的效果［７－８］，唯一欠缺的则是上述载体输送到人体内的生物相容和安全性问题。白蛋白作为血液中自然存在的一种超分子蛋白，
第４６卷第１６期２０１８年８月
广州化工ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ
Ｖｏｌ４６Ｎｏ１６Ａｕｇ２０１８
科学实验
叶酸修饰的白蛋白纳米粒的制备及理化性质的研究
包忠妹１，２，吉晓漫１，２，张玮１，２，孙欣１，２，罗斌１，２，李大学药学院，江苏徐州２２１００４；２江苏省新药研究与临床药学重点实验室，江苏徐州２２１００４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｌｂｕｍｉｎｍｏｄｉｆｉｅｄｂｙｆｏｌａｔｅ（ＦＡ－ＢＳＡ）ｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙｔｈｅａｍｉｄｅｂｏｎｄｗｉｔｈｆｏｌａｔｅａｎｄｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎＯｎｔｈｉｓｂａｓｉｓ，ｔｈｅａｎｔｉ－ｓｏｌｖｅｎｔｍｅｔｈｏｄｗａｓｃｈｏｓｅｎｔｏｆｏｒｍｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｂｙｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇＴｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ，Ｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｒｅｌｅａｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｉｎｐｕｔｒａｔｉｏｏｆｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｔｏｆｏｌａｔｅｗａｓ１５０ａｎｄｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｏｆＦＡ－ＢＳＡｗａｓ（３２７±１８）％ＴｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＦＡ－ＢＳＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｗａｓ（２５５８±２３）ｎｍ，Ｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌｗａｓ（－２９８±２１）ｍＶ，ａｎｄｔｈｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＰＴＸｗａｓ（８３２±１４）％ＴｈｅｉｎｖｉｔｒｏｒｅｌｅａｓｅｏｆＦＡ－ＢＳＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｅｘｈｉｂｉｔｅｄｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓＴｈｅＦＡ－ＢＳＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｎｇＰＴＸ，ｗｈｉｃｈｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｍｅｔｈｏｄ，ｈａｄｇｏｏｄｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄｗｅｒｅｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｂｅｃｏｍｅａｎｏｖｅｌｔａｒｇｅｔｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｆｏｒＰＴＸ

叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究

的戊二醛溶液２０ μＬꎬ在室温下进行交联固化反
是较为理想的靶向治疗载药系统.
血清白蛋白为载体ꎬ将叶酸偶联在其表面ꎬ制备
载阿霉素的白蛋白纳米粒. 利用配体与受体间特
异性亲和作用制备高载药量和高包封率的纳米
粒ꎬ并对其粒径、释放速率等性质进行考察ꎻ以阿
霉素粉剂为对照ꎬ考察其体外抗肿瘤活性ꎬ为叶
酸偶联阿霉素白蛋白纳米粒的进一步开发研制
基金项目: 辽宁省科技厅博士科研启动计划(２０１４１０８３) ꎻ辽宁省教育厅一般项目( Ｌ２０１６０２３)
作者简介: 胡丹丹(１９９１－ ) ꎬ女ꎬ山东泰安人ꎬ硕士研究生在读ꎬ主要从事抗癌药物的研究.
通讯联系人: 孟艳秋( １９６３－ ) ꎬ女ꎬ辽宁义县人ꎬ教授ꎬ博士ꎬ主要从事天然活性物质的结构改造及抗肿瘤活性研究.
ｄｏｉ:１０. ３９６９ / ｊ. ｉｓｓｎ. ２０９５－２１９８. ２０１９. ０３. ００６
中图分类号: Ｒ９１４２文献标识码: Ａ
阿霉素( ＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎꎬＤＯＸ) ꎬ属于蒽环类广
与不良反应 [２－３] . Ｌｕｔｅｎ等 [４] 利用叶酸、聚乙二
叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究
胡丹丹ꎬ 李磊ꎬ 宁偎峰ꎬ 赵莹ꎬ 张琳琳ꎬ 胡栎芳ꎬ 孟艳秋
( 沈阳化工大学蛋白为载体材料ꎬ制备叶酸介导的具有主动抗肿瘤靶向功能的新型高载药
量的阿霉素白蛋白纳米粒ꎬ并对其进行体外抗肿瘤活性研究. 采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒ꎬ
ＤＦ￣Ｊ０１离心机、ＺＦ７￣荧光分光光度计ꎬ巩义市英
裕裕华仪器厂ꎻ透射电子显微镜ꎬ赛默飞世尔科
技电子有限公司ꎻ ＪＫ￣ＣＩ￣５０ＣＨ￣ＣＯ２恒温培养

白蛋白纳米粒给药载体的研究进展

白蛋白纳米粒给药载体的研究进展
寇亮;麻燕琴;罗琨映;李璐
【期刊名称】《西北民族大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2017(038)004
【摘要】白蛋白纳米粒因具有无毒、靶向性、可生物降解等特点而表现出作为新型给药栽体的良好应用前景.文章通过对近期国内白蛋白纳米粒给药栽体研究文献的归纳整理,较为系统地综述了人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)纳米粒给药栽体的制备工艺、质量评价、药代动力学、靶向性等研究进展.
【总页数】5页(P9-13)
【作者】寇亮;麻燕琴;罗琨映;李璐
【作者单位】西北民族大学化工学院,甘肃兰州730030;环境友好复合材料及生物质利用甘肃省高校重点实验室,甘肃兰州730030;西北民族大学化工学院,甘肃兰州730030;西北民族大学化工学院,甘肃兰州730030;西北民族大学化工学院,甘肃兰州730030;环境友好复合材料及生物质利用甘肃省高校重点实验室,甘肃兰州730030
【正文语种】中文
【中图分类】R94
【相关文献】
1.新型眼用纳米粒给药载体研究进展 [J], 李春雨;赵维强;李超英
2.固体脂质纳米粒给药新载体的研究进展 [J], 陈桐楷;李园;林华庆
3.半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒静脉给药的急性毒理实验 [J], 张阳德;席浩;李浩;李玉坤;翟登高;王荣兵;黄秋林;黄林;刘勤
4.纳米粒给药载体的研究进展 [J], 郭会灿;张丽云
5.固体脂质纳米粒给药系统新载体的研究进展 [J], 陈桐楷;李园;林华庆
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叶酸修饰的载药相变纳米粒体内靶向显影肿瘤的实验研究

叶酸修饰的载药相变纳米粒体内靶向显影肿瘤的实验研究叶鸣;翟蓓;刘莹;陈昶宇;李奥;周洋【摘要】Objective To explore the performance of folate receptor-targeted(FR), paclitaxel(PTX) loaded phase transition nanoparticle contrast agent (FR-PTX-PNPCA) in imaging xenograft in nude mice. Methods The FR-PTX-PNPCA emulsions and non-targeted phase change nanoparticle emulsions(PTX-PNPCA) were prepared . Then 30 nude mice with xenograft ovarian cancer were randomly divided into normal saline group,non-targeted group and targeted group according to different injection. The fluorescence imaging of nude mice was performed before and after the injection. The mice were re-injected with drug 48 h after the fluorescence imaging,and 2 h later the tumors were irradiated with therapeutic ultrasound for 10 min,then the ultrasonography of tumor was re-performed. Meanwhile,the ultrasound intensity of all images was measured by software. And the differences in the intensity among groups were compared to summarize the ability of FR-PTX-PNPCA to image the tumor in vivo. Results There was hardly any fluorescence in tumors area in the saline group and non-targeted group after the injection,incontrast,obvious red fluorescence was observed in targeted group. In ultrasound imaging experiment,there was no significant difference in intensity among three group before the irradiation of therapeutic ultrasound. However,after the irradiation,the intensity in targeted group was (383.65±32.05) U,which was significantly higher than that in salinegroup and non-targeted group [(86.78±7.74)U,(81.86±11.98)U] in contrast mode,there were difference(all P<0.01),and there were significant difference in traditional mode(all P<0.05). Conclusion Intravenous injection of FR-PTX-PNPCA can target to the xenograft tumor of nude mice and significantly enhance the ultrasound imaging. It provides a promising and multi-functional molecular probe for the precise medical care of the tumor.%目的研究叶酸受体(FR)靶向的、载紫杉醇(PTX)的相变纳米粒造影剂(FR-PTX-PNPCA)用于显影裸鼠移植瘤的能力.方法制备FR-PTX-PNPCA乳剂和非靶向的相变纳米粒乳剂(PTX-PNPCA)备用;选取载卵巢癌移植瘤的裸鼠30只,根据注射药物不同随机等分为生理盐水组、非靶向组及靶向组,于注射药物前后采用活体荧光仪对裸鼠进行荧光显影,比较各组荧光显影情况.荧光显影后48 h,分别重新注射药物,2 h后采用治疗超声辐照肿瘤10 min,对肿瘤再次超声显影,比较各组显影强度,分析FR-PTX-PNPCA体内靶向显影肿瘤的能力.结果活体荧光显影实验中,注射药物后,生理盐水组、非靶向组肿瘤内几乎未见红色荧光显影,靶向组组肿瘤内可见明显的红色荧光显影.超声显影实验中,治疗超声辐照前,各组肿瘤内显影强度无显著差异;超声辐照后,造影模式下靶向组显影强度为(383.65±32.05)U,明显高于生理盐水组和非靶向组[(86.78±7.74)U、(81.86±11.98)U],差异均有统计学意义(均P<0.01),且较常规模式下这种差异更为显著.结论经静脉注射FR-PTX-PNPCA能靶向裸鼠卵巢癌移植瘤,并显著增强其超声显影,为肿瘤的精准医疗提供了一种有前途的、多功能的分子探针.【期刊名称】《临床超声医学杂志》【年(卷),期】2017(019)009【总页数】4页(P580-583)【关键词】靶向;载药;纳米粒;相变;显影;裸鼠【作者】叶鸣;翟蓓;刘莹;陈昶宇;李奥;周洋【作者单位】610031 成都市第三人民医院超声科;610031 成都市第三人民医院超声科;610031 成都市第三人民医院超声科;610031 成都市第三人民医院超声科;南京医科大学第一附属医院超声科;610031 成都市第三人民医院超声科【正文语种】中文【中图分类】R-332现代医学的发展使人类平均生存年龄不断提高，而同时恶性肿瘤的发病率也急骤增高，人类健康仍受到严重威胁。

叶酸受体介导靶向给药系统研究进展

叶酸受体介导靶向给药系统研究进展作者：高金龙李宛萍吴肖东高丽颖赵东亚张颖王奎涛段志清来源：《河北工业科技》2020年第02期摘要：靶向给药系统是诊断和治疗癌症的一种有效方法，因其副作用小、治疗效果好而受到广泛关注。

叶酸受体在多数癌细胞表面过度表达，但在正常细胞表面低表达或未表达，与配体叶酸具有高度的亲和力。

叶酸连接到药物载体上，可靶向作用于癌细胞。

介绍了叶酸与叶酸受体，简述了叶酸受体介导靶向的作用机制，讨论了叶酸连接脂质体、胶束、纳米粒、聚合物载体、液晶叶酸纳米粒、负载药物通过叶酸受体介导诊治癌症的研究进展，分析了各自的优点和不足，提出了叶酸受体介导靶向给药系统的未来研究方向：一是对叶酸受体介导作用机制进行深入研究;二是对药物释放后载体的体内分布、代谢、排泄等过程做进一步探索;三是研究单一、易合成但高效的诊断或治疗剂，减少材料浪费，简化给药方式。

關键词：肿瘤治疗学;叶酸;叶酸受体;靶向;药物载体中图分类号：TQ31;TB34;R944 文献标识码：AAbstract： Targeted drug delivery system is an effective way to diagnose and treat cancer. Because of its small side effects and good therapeutic effect， it has been widely concerned. Folate receptor is over expressed on the surface of most cancer cells， but it is low or not expressed on the surface of normal cells. Folate has a high affinity with the ligand folate. Connected to the drug carrier， folate can target cancer cells. Folic acid and folic acid receptors were introduced， the mechanism of folate receptor mediated targeting was briefly described. Furthermore， the research progress of diagnosis and treatment of cancer by using folic acid linked liposomes， micelles，nanoparticles， polymer carriers， liquid crystalline folic acid nanoparticles and loaded drugs through folate receptormediated was discussed， and the advantages and disadvantages were analyzed. Finally， the prospect of; folic acid receptormediated targeted drug delivery system was presented.The first is to study the mechanism of folic acid receptor mediated action deeply. The second is to further explore the distribution， metabolism， excretion and other processes of carriers after drug release. The third is to study a single， easily synthesized but highly effective diagnostic or therapeutic agent to reduce material waste and simplify administration methods.Keywords：neoplastic therapy; folic acid; folic acid receptor; target; drug carrier化疗是临床治疗癌症的重要手段，然而大部分癌细胞毒性药物存在选择性差、毒副作用强、易产生耐药性等缺点。

应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量

·１１８生垦生塑型旦芏壁查垫嫂至璺！！鲞蓥２塑鱼垫』ｇｉ世鲥些垫鲎，坠！：１３：№：！应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量李娟张耀庭曾伟罗璇廖长春（长春生物制品研究所，长春１３００６２）【摘要】目的应用考马斯亮蓝法检测总蛋白含量。

方法应用考马斯亮蓝法与凯氏法和ｂｗＩｙ法同时进行不同生物制品的总蛋含量检测。

结果考马斯亮蓝法操作简便，灵敏度高，重复性好．测定蛋白的线性范围为５～２５ｐｇ，ｒ＝０．９９９５，ｎ＝５，平均回收率为ｌ叭．３％。

结论考马斯亮蓝法是检测生物制品总蛋白含量的理想方法。

【关键词】考马斯亮蓝（ｃ耶）总蛋白含量凯氏法Ｌｏｗｒｙ法生物制品总蛋白含量的测定是制品质量控制的重要指标之一，可用以检查有效成分，计算纯度和比活性。

目前常用的方法有凯氏法、酚试剂法（Ｌｏｗｒｙ法）、紫外吸收法等．其中凯氏法繁琐，费时，且不适合微量蛋白含量测定。

Ｌｏｗｒｙ法和紫外吸收法干扰物质较多，不适于硫柳汞做防腐剂的样品和核酸含量较高的样品检测。

为此作者参考有关文献，初步建立了考马斯亮蓝法（简称ＣＢＢ法），并分别与凯氏法、Ｌｏｗｒｙ法测定结果做了比较，现报道如下。

材料与方法１．仪器与试剂１３本岛津ｕｖ一２２０１型分光光度计，瑞士ＦＤｓｓＴＥＣＡＴＯＲ２３００型全自动凯氏定氮仪。

考马斯亮蓝Ｇ２５０（ＣＢＢ）为ＦＬＵＫＡ试剂。

８５％磷酸（ｗ，ｖ）、９５％乙醇为分析纯试剂。

２．考马斯亮蓝染色液的配制准确称取１００ｍｇＣＢＢ，溶于５０ｍｌ９５％乙醇溶液中，与１００ｍｌ８５％磷酸（Ｗ／Ｖ）混合，加水至１０００ｒａｌ。

３．标准蛋白溶液的配制用本所生产的人血白蛋白，采用凯氏定氮法测定蛋白含量，准确稀释成５０ｖｅＣｍｌ的标准蛋白溶液。

４．测定方法取一定体积样品（含蛋白质１５９９左右，蛋白含量较高的样品可适当稀释），补加蒸馏水至０．５ｍｌ，加入３．０ｍｌ染色液，摇匀，于室温放置３—５ｍｉｎ，同时用水做空白试验，于５９５ｎｍ处测定吸收度，分别为Ａｓ和Ａｏ，计算△Ａ＝Ａｓ—Ａ０。

《叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究》

《叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究》一、引言随着纳米医学的飞速发展，纳米药物在癌症治疗领域的应用日益广泛。

其中，以白蛋白为基础的纳米药物因其良好的生物相容性和低免疫原性，成为研究热点。

叶酸作为一种天然的生物分子，具有靶向性高、易于修饰等优点，可广泛应用于药物传递系统。

本篇论文旨在探讨叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒（FA-Dox-Alb NPs）的制备工艺及其在细胞层面的作用机制。

二、材料与方法（一）材料阿霉素（Dox）、白蛋白（Alb）、叶酸（FA）、化学交联剂等实验材料。

（二）叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备采用纳米沉淀法结合化学交联技术，制备叶酸介导的阿霉素白蛋白纳米粒。

具体步骤包括：首先将阿霉素与白蛋白混合，再加入叶酸及化学交联剂，通过调节pH值及温度，使药物、白蛋白及叶酸形成稳定的纳米粒。

（三）细胞学研究方法采用MTT法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜等技术，研究叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒对癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期等影响。

三、实验结果（一）叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备结果通过纳米沉淀法及化学交联技术，成功制备了叶酸介导的阿霉素白蛋白纳米粒。

该纳米粒粒径均一，分散性好，稳定性高，具有较好的包封率和载药量。

（二）细胞学研究结果1. 细胞增殖抑制：FA-Dox-Alb NPs对癌细胞具有显著的增殖抑制作用，且呈剂量依赖性。

2. 细胞凋亡：FA-Dox-Alb NPs能诱导癌细胞发生凋亡，凋亡率随药物浓度和时间增加而提高。

3. 细胞周期：FA-Dox-Alb NPs能将癌细胞阻滞在S期和G2/M期，从而抑制细胞增殖。

4. 细胞内分布：激光共聚焦显微镜结果显示，FA-Dox-Alb NPs能有效地被癌细胞摄取，并在细胞内分布均匀。

四、讨论本实验成功制备了叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒，并对其在细胞层面的作用机制进行了深入研究。

结果表明，FA-Dox-Alb NPs能显著抑制癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，并将细胞阻滞在特定周期阶段。

叶酸偶联白蛋白纳米粒的靶向性及药效评价

叶酸偶联白蛋白纳米粒的靶向性及药效评价
刘海;罗晓琴;朱亮;何练芹;洪华云
【期刊名称】《广东药学院学报》
【年(卷),期】2007(23)1
【摘要】目的考察叶酸偶联白蛋白纳米粒(F-BSANP)的肿瘤靶向性并进行药效评价.方法采用直接注射法建立小鼠肝癌模型,肝癌小鼠分组进行体内分布及药效实验.结果包裹钙黄绿素的F-BSANP在肝癌小鼠肝脏中蓄积程度最高;而药效方面,包裹砒霜的F-BSANP组小鼠生存期最长.结论用叶酸偶联白蛋白纳米粒包裹药物能显著增强药物对肿瘤部位的靶向性,明显提高药效.
【总页数】3页(P50-52)
【作者】刘海;罗晓琴;朱亮;何练芹;洪华云
【作者单位】南昌大学医学院,药学系,江西,南昌,330006;广东药学院,药科学院,广东,广州,510006;广东药学院,药科学院,广东,广州,510006;广东药学院,药科学院,广东,广州,510006;广东药学院,药科学院,广东,广州,510006
【正文语种】中文
【中图分类】R962
【相关文献】
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何练芹;臧林泉;潘雪刁;朱亮
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