猪肠道寡肽转运载体1(PepT1)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

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猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化

酸的浓度和氨基酸的需要水平及相关激素水平有关。
关键词：猪；碱性氨基酸转运载体；实时荧光定量RT-PCR；发育规律
中图分类号：S852.2
文献标识码：A
文章编号：0366-6964（2008）02-0170-06
Segm ental Distribution and Ontogenetic Regulation of Cationic Am ino Acid Transporter mRN A Expression in the Sm all Intestine of Pigs
猪肠道碱性氨基酸转运载体（CAT1）mRNA 表达的组织特异性和发育性变化
周响艳1，2，左建军1，职爱民1，张常明1，黄志毅1，张艳1，王修启1，冯定远1*
（1.华南农业大学动物科学学院，广州 510642;2.山东亚太中惠集团，潍坊 261061）
摘要：本研究旨在探讨不同品种猪肠道碱性氨基酸转运载体（CAT1）mRNA 表达的组织特异性和发育规律。试
收稿日期：2007-03-05 基金项目：国家重点基础研究发展计划项目（2004CB117501）作者简介：周响艳（1974-），女，博士，主要从事动物分子营养研究 * 通讯作者：冯定远，教授，博导，E-mail:fengdy@
the highest CAT1 mRNA abundance and the colon had the lowest.During the sucking period (day 1 to 26)，the CAT1 mRNA abundances in duodenum and jejunum were increased and dropped with age after weaning.The CAT1 mRNA abundances of Lantang pigs at day 150 were significant lower than that at other ages（P＜0.05）and the CAT1 mRNA abundances of Landrace pigs at day 90 and 150 were significant lower than that at other ages（P＜0.05）.However, there is no difference between day 26 and 150 in the jejunum CAT1 mRNA abundance.And the pigs at day 26 have a higher CAT1 mRNA abundance than that at day 1 and 7（P＜0.05）.For ileum,CAT1 mRNA in the Landrace and Lantang pigs increased during day 1 to 60,and then dropped（P＜0.05）.There is no significant difference（P＞0.05）between the CAT1 mRNA abundance of Landrace and Lantang pigs in duodenum and j ej unum.For ileum,the CAT1 mRNA abundance of Landrace at day 26 was significant higher than that of Lantang pigs（P＜0.05）, however,at day 90 and 150 were both lower than that of Lantang pigs（P＜0.05）.In conclusion, the mRNA expression of CAT1 was not only differentially regulated by age but also differentially distributed along the small intestine of piglets at early stages and growing stages of life,which may be related to luminal substrate concentration as well as amino acid requirement and hormone. Keywords:pig;cationic amino acid transporter;real-time RT-PCR;ontogenetic regulation

药物与肠道肽转运蛋白PEPT1的相互作用及影响因素

药物与肠道肽转运蛋白PEPT1的相互作用及影响因素张庆颢;刘克辛【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2007(12)3【摘要】H+协同转运载体PEPT1主要存在于小肠上皮细胞的刷状缘膜上,肠道PEPT1对于消化道中蛋白质的降解产物二肽、三肽具有转运吸收的功能,另外肽类似药物如β-内酰胺类抗生素、血管紧张素转化酶抑制剂、非肽药物伐昔洛韦等也经此载体转运吸收。

肠道PEPT1对于维持机体的内环境稳定以及药物的胃肠道吸收发挥重要作用。

随着对PEPT1基因序列、蛋白结构、功能活性等方面研究的逐渐深入,对于调控PEPT1在膜上表达、影响其功能活性以及与底物亲和力的因素及相关的作用机制有了一定的了解,加之PEPT1广泛的底物专属性,使其成为新药开发中重要的药物传递的靶蛋白。

了解药物与肠道肽转运蛋白PEPT1的相互作用及其影响因素,对于了解药物-药物相互作用,提高药物口服吸收的生物利用度,研究抗肿瘤药物的靶向治疗以及个体化给药等方面具有十分重要的意义。

【总页数】8页(P250-257)【关键词】肽转运载体;PEPT1;药物相互作用【作者】张庆颢;刘克辛【作者单位】大连医科大学药学院临床药理教研室【正文语种】中文【中图分类】R966【相关文献】1.北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达 [J], 江勇;蔡辉益;刘国华;李勇;张姝;常文环;郑爱娟2.小肽转运蛋白PepT1的研究进展 [J], 甘潇;张华;王雄清3.鱼类肠道小肽转运载体PepT1的研究进展 [J], 叶万里;李英文4.鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析 [J], 闫潇;杨丽萍;郑文佳;孙君君;卢荣华;聂国兴5.小肽转运蛋白(PepT1)的活性调节 [J], 李霞;王康宁;贾刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪干扰素_基因在大肠杆菌中的克隆表达及其活性测定

２．郑州大学第一附属医院肛肠外科，河南郑州４５００５２）
摘要：目的在大肠杆菌中高效表达重组猪干扰素 γ（ｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａ，ｐｏＩＦＮ－ γ），并对其抗
病毒活性进行初步研究。方法选择大肠杆菌偏爱密码子人工合成了猪干扰素－ γ 成熟蛋白编码基因，克隆
自１９９０年ＤＩＪＩＫＭＡＮＳ等首先对ＰｏＩＦＮ－ γ 基因进行研究以来，猪干扰素－ γ 基因已在大肠杆菌、昆虫细胞、兔肾细胞、酵母和仓鼠卵细胞中获得了不同程度的表达［２～４］。大肠杆菌较其他表达细胞具有生长快，培养基价廉等优势，目前仍然在基因工程表达外源蛋白中发挥重要作用。为了研究和开发新
达，表达产物具有抗病毒活性。
关键词：猪ＩＦＮ－ γ 基因；原核表达；抗病毒活性
中图分类号：Ｑ７８６
文献标识码：Ａ
Ｃｌｏｎｅ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａｉｎＥ．ｃｏｌｉ
ＷＡＮＧＬｉ１，ＬＩＵＪｉｎ－ｂｏ２，ＨＥＴａｏ１，ＺＨＥＮＧＸｉａｏ－ｌｉ１，ＭＥＩＺｈｉ－ｑｉａｎｇ１，ＬＩＨｏｎｇ１（１．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＬｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｕｚｈｏｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ６４６０００，
扩增条件为：９４℃预变性２ｍｉｎ，然后进行９４℃ ３０ｓ，５２℃ ３０ｓ，７２℃ １ｍｉｎ，共３０个循环，最后７２℃延伸５ｍｉｎ。

哺乳藏猪肠道CAT1、EAAC1和Pept1 mRNA的发育性表达分析

Ｍｆ．２０ｉｒ０１
２１００年３月
哺乳藏猪肠道ＣＡＴ１ＥＡＡＣ１和ＰｐｌｍＲＮＡ的、ｅｔ发育性表达分析
陈敦学石常友宾石玉褚武英。唐万林。林，，，，，谦
（．西师范大学生命科学学院，西桂林５１０；．沙大学生物工程与环境科学系，南长沙４００｝１广广４０４２长湖１０３３桂林市水产畜牧兽医局。西桂林５１０）．广４０４
（～２１８日龄）碱性氨基酸转运系统Ｙ的ＣＡＴ１酸性氨基酸转运系统Ｘ的Ｅ、ＡＡＣ１以及小肽转运载体ＰｐｌｍＲｅｔＮＡ表达的发育性变化，进一步深入研究小肽和氨基酸在肠道的吸收机理及其转运载体的表为达分布情况提供基础。
１３Ｄ．ＮＡ酶的消化和ｃＡ的合成ＤＮ
・
分别准确量取各组织总ＲＮＡ各３，Ｄｇ用ＮＡ酶（ｅｍｅｔｓ公司）除基因组痕量ＤＮＡ，Ｆｒｎａ去然后采用上海生物工程有限公司反转录试剂盒（ｅｅｓｒｎｃｉｔｎｓｓｅｋｔ对上述Ｄｒｖｒｅｔａｓｒｉｙｔｍｉ）ｐｏＮＡ消化产物进行反转
第２８卷
第１期
广西师范大学学报：自然科学版
ＪｕｎｌｆｕｎｘＮｒｌｎｖｒｉ：ｔｒｌｃｎｅＥｉｏｏｒａａｇｉｏｍａｉｅｓｙＮａｕａｉｃｄｔｎｏＧＵｔＳｅｉ

病理状态对肠寡肽转运体pept1活性的调节

• 综述 • 病理状态对肠寡肽转运体PEPT1活性的调节王威，刘克辛*大连医科大学药学院临床药理教研室，辽宁大连 116044摘要：PEPT1是位于小肠刷状缘膜的寡肽转运体，介导蛋白消化产物（如二肽和三肽）及类肽药物（如β-内酰胺类抗生素）的摄取和转运。

营养不良及代谢失调（如高蛋白饮食、禁食和糖尿病）均可引起PEPT1基因和蛋白表达发生变化，一些临床常见病（如溃疡性结肠炎、克罗恩病、短肠综合征）也可诱导肠道PEPT1的表达和功能发生改变。

检索PubMed数据库及参考互联网文献，并进行分析综述，探讨不同病理状态对PEPT1活性调节的机制，为患者的营养支持及药物治疗方案提供理论依据。

关键词：PEPT1；寡肽转运体；基因表达；病理状态；营养不良；代谢失调中图分类号：Q591.2 R362 文献标志码：A 文章编号：1674 - 6376 (2011) 01 - 0039 -05Regulation of pathological state on activity of intestinal oligopeptide transporter PEPT1 in diseaseWANG Wei, LIU Ke-xinDepartment of Clinical Pharmacology, College of Pharmacy, Dalian Medical University, Dalian 116044, ChinaAbstract: The oligopeptide transporter 1 (PEPT1) is localized to the brush-border membrane and mediates the absorption and transportation of protein digestion products (i.g. dipeptides and tripeptides) and peptide-like drugs (i.g. β-lactam antibiotics). Malnutrition and metabolic disordor (such as high-protein diet, fasting, and diabetes) could induce the modulation of protein and gene expressions of PEPT1. The intestinal diseases in clinic (such as ulcerative colitis, Cohn’s disease, and short-bowel syndrome) have shown the regulation of the PEPT1 expression and functional changes in their colon. Being analyzed and reviewed by searching PubMed Internet database and reference literature, some associated mechanisms of the regulation on PEPT1 activity by various pathological state have been studied to provide the theoretical basis for the nutritional support and pharmaceutical treatment programs.Key words: PEPT1; oligopeptide transporter; gene expression; pathological state; malnutrition; metabolic disordor小肠是食物进行消化吸收的主要场所，小肠的这种消化吸收作用为机体提供了日常的能量与营养需求。

mTOR通路对猪肠上皮细胞精氨酸代谢及转运的影响

mTOR 通路对猪肠上皮细胞精氨酸代谢及转运的影响肖昊，温晓鹿，蒋宗勇，王丽*（广东省农业科学院动物科学研究所，农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室，畜禽育种国家重点实验室，岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东广州510640）摘要：本试验旨在研究哺乳动物雷帕霉素靶标（mTOR ）通路对猪肠上皮细胞精氨酸（Arg ）代谢及转运通路的影响。

在含100或350μmol/L Arg 的培养基中添加（10nmol/L ）或不添加（0nmol/L ）雷帕霉素（Rapamycin,Rap ），培养猪肠上皮细胞（IPEC⁃J2细胞）2天后，对Arg 代谢通路、Arg⁃一氧化氮（NO ）、增殖转运通路蛋白表达进行检测。

结果表明：1）抑制mTOR 通路能够显著抑制精氨酸酶Ⅰ和精氨酸酶Ⅱ的蛋白表达量（P <0.05），显著抑制了精氨酸酶代谢途径；2）抑制mTOR 通路能显著抑制p⁃eNOS 的蛋白表达量（P <0.05），而增加Arg 浓度，与对照组相比显著提高p⁃eNOS 和eNOS 的蛋白表达量（P <0.05）；3）抑制mTOR 通路24小时后诱导性iNOS 的表达量上升；4）24小时下抑制mTOR 通路激活了磷酸化的cFos 表达量，抑制了PKCα、Erk 、Ric⁃tor 和CAT2的表达（P <0.05）。

综上所述，mTOR 被抑制后，猪肠上皮细胞中精氨酸的代谢和转运均被抑制，因而mTOR 信号通路在调控猪肠上皮细胞Arg 利用过程中发挥重要调控作用。

关键词：mTOR 信号通路；猪肠上皮细胞；精氨酸代谢；精氨酸转运中图分类号：S816.71文献标识码：A文章编码：1005⁃8567（2021）02⁃0001⁃05广东畜牧兽医科技2021年（第46卷）第2期科技前沿收稿日期：2021⁃03⁃30基金项目：国家生猪产业技术体系建设专项（CARS⁃35）；广东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目（2020KJ126）；科技创新战略专项资金（高水平农科院建设）——优秀博士（R2017YJ⁃YB1004）及青年副研究员（R2018PY⁃QF001）作者简介：肖昊(1988⁃），女，博士，副研究员，研究方向：猪营养与饲料科学。

猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化

ＴｒｎｐｒｅＲＮＡｐｅｓｏｎｔｅＳａｌＩｔｓｉｅｏｇａｓｏｔｒｍＥｘｒｓｉｎｉｈｍｌｎｅｔｎｆＰｉｓ
ＺＨＯＵａｇｙｎ～．ＵＯｉｎｊｎ，ＨＩＡｉｎ，Ｘｉｎ — ａＺＪａ —ｕＺ — ＺＨＡＮＧａｇｍｉｇ，ｍｉＣｈｎ — ｎ
中图分类号：８２２￥５．文献标识码：Ａ文章编号：３６６６（０８０ — １０００６ — ９４２０）２０７ — ６
ＳｇｅｔｌＤｉｔｉｕｉｎａｄＯｎｏｅｅｉｇｌｔｏｆＣａｉｎｉｍｉｏＡｃｄｅｍｎａｓｒｂｔｏｎｔｇｎｔｃＲｅｕａｉｎｏｔｏｃＡｎｉ
验选取１７２、Ｏ６、Ｏ和１０日龄长白和蓝塘公猪各５头（、、６３、Ｏ９５同一品种同一日龄且体重接近）共７，Ｏ头，体重后测
屠宰，集十二指肠、肠、采空回肠和结肠组织样品。以１Ｓ基因为内标，实时荧光定量Ｒ — Ｃ法（ＹＢｒｅ８用ＴＰＲＳＲＧｅｎＩ剂盒）测Ｃ试检ＡＴ１ｍＲＮＡ在６日龄长白猪十二指肠、肠、０空回肠和结肠表达的组织特异性，及在长白和蓝塘以猪不同日龄其十二指肠、肠、空回肠表达的发育性变化。结果显示：０日龄长白猪ＣＴ１ｍＲ６ＡＮＡ的表达丰度从十

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2 mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响

糖尿病关系密切。ＳＬ１可以通过激活蛋白激ＧＴ酶Ｃ（ＫＣ）赖性通路调节ＧＵ２对葡萄糖的Ｐ依ＬＴ
转运。因此，ＳＬ１和ＧＵ２ｍＲ对ＧＴＬＴＮＡ表
（ＬＴ完成。ＳＬ１主要分布在小肠黏膜的ＧＵ２）ＧＴ
单胃动物体内葡萄糖的吸收部位是小肠，小
肠黏膜上的葡萄糖转运载体在葡萄糖的吸收过程中起着重要作用，肠葡萄糖的吸收分为主动吸小
收和被动吸收，与主动吸收的葡萄糖转运主要参是钠葡萄糖转运蛋白ｌＳＬ１，（ＧＴ）而被动吸收主要依靠肠腔微绒毛基底部的葡萄糖转运蛋白２
达方面的研究对了解葡萄糖的吸收和糖代谢的调
控具有重要作用。目前对ＳＬ１和ＧＬＴ — ＧＴＵ２ｍＲ
ＮＡ表达规律的研究较少，主要集中在鸡和啮齿且
基金项目：家自然科学基础项目（００５８）国３７０７２
动物营养学报２１，３６：８ — ００１２（）９３９９
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆＡｉａｕｒｉｎｈｓｏｒａｎｍｌｔｔｎｏＮｉｏ
ｄｉ１．９９ｊｉｎ１０－６ｘ２１．６０５ｏ：０３６／．ｓ．０６２７。０Ｏ．１ｓ１

断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA表达发育性变化及谷氨酰胺对其的影响

动物营养学报2012，24（4)：704-711Chinese Journal of Animal Nutritiondoi ：10.3969/j.issn.1006-267x.2012.04.015断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA 表达发育性变化及谷氨酰胺对其的影响周琳曹广添张帅杨彩梅∗ 陈安国洪奇华（浙江大学动物科学学院，杭州310058)摘要：本试验旨在研究断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白（I-FABP ）和二肽转运载体1（PEPT1）mRNA 表达的发育性变化及谷氨酰胺对其的影响㊂以69头（21ʃ3）日龄断奶杜ˑ长ˑ大仔猪为试验动物，断奶当天选取3头猪进行屠宰，剩余66头随机分为2组，每组3个重复，每个重复11头㊂对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂基础饲粮+1%谷氨酰胺㊂断奶后第3㊁5㊁7㊁14天试验组和对照组分别选取3头猪进行屠宰（共计27头），取十二指肠㊁空肠和回肠黏膜组织样品，通过实时定量PCR 法测定I-FABP 和PEPT1mRNA 的表达量㊂结果表明：1）I-FABP 和PEPT1mRNA 的表达量各肠段间无显著差异（P ＞0.05）；2）I-FABP 和PEPT1mRNA 在十二指肠㊁空肠和回肠的表达量均在断奶后急剧下降，断奶第3天的表达量最低，显著低于断奶当天（P ＜0.05），而后逐渐升高，第14天达到峰值；3）试验组I-FABP 和PEPT1mRNA 表达量与对照组无显著差异（P ＞0.05），但试验组表现出促使十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的I-FABP 和十二指肠PEPT1mRNA 表达提前恢复至断奶前水平的趋势㊂结果提示，断奶仔猪I-FABP 和PEPT1mRNA 表达量随时间而变化，谷氨酰胺对断奶后I-FABP 和PEPT1mRNA 表达量的恢复有一定的促进作用㊂关键词：断奶仔猪；小肠黏膜；吸收；小肠脂肪酸结合蛋白；二肽转运蛋白1；谷氨酰胺中图分类号：S828 文献标识码：A 文章编号：1006-267X （2012)04-0704-08收稿日期：2011-10-17基金项目：国家自然科学基金（30700578)作者简介：周琳（1988-)，女，四川广元人，硕士研究生，研究方向为动物营养与饲料科学㊂E-mail ：yucengkiki@ ∗通讯作者：杨彩梅，副教授，硕士生导师，E-mail ：yangcm@小肠脂肪酸结合蛋白（intestinal fatty acid binding protein ，I-FABP )在哺乳动物小肠脂肪酸的转运中起着关键作用，它特异性地表达于小肠近端上皮吸收细胞㊂Zimmerman 等[1]研究发现，I-FABP 与长链脂肪酸的结合力高于肝脏脂肪酸结合蛋白，高亲和力的I-FABP 提高了脂肪酸的水溶性，有利于其吸收和运输㊂研究发现将I-FABP cDNA 持续转染Caco-2细胞，可减少脂类输出㊁载脂蛋白合成及乳糜微粒的分泌，证实I-FABP 具有促进脂类吸收和转运的功能[2]㊂此外，I-FABP 与脂肪代谢及相关酶类的活化有关[3]㊂人㊁猕猴和大鼠的I-FABP 均分布于小肠[4-5]，其表达具有高度的组织特异性，且不同的物种具有较高的同源性㊂虽然I-FABP 对动物的脂肪酸吸收和调控具有重要作用，但目前对于猪的I-FABP mRNA 表达方面的研究较少㊂蛋白质在体内主要是以二肽形式被吸收[6]，在肠道中二肽的转运和摄取过程依赖肠上皮细胞刷状缘的二肽转运载体1（dipeptide transporter 1，PEPT1)㊂PEPT1是一种氢离子（H +)依赖的㊁低亲和力/高容量的寡肽转运体，主要表达在小肠上皮细胞刷状缘膜上，在近端肾小管上皮细胞㊁胆管上皮细胞㊁免疫细胞亦有表达[7]，一些类似于肽的药物如β-内酞胺类抗生素也主要是通过二肽转运载体的转运而吸收㊂因此，肠上皮细胞膜的众多载体中，二肽转运载体备受瞩目㊂4期周琳等：断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA表达发育性变化及谷氨酰胺（glutamine，Gln)是母猪乳中含量最丰富的游离氨基酸，在维持早期断奶仔猪肠道结构和功能方面起着重要作用[8]，并对提高断奶仔猪养分消化和吸收能力有一定作用㊂研究表明，无论何种形式的添加，肠道供给或静脉供给，外源性谷氨酰胺均可以加速动物肠道对谷氨酰胺和其他氨基酸的吸收[9]㊂小肠移植病人给予谷氨酰胺补充后，会增加小肠对蛋白质和葡萄糖的吸收㊂刘涛等[10]研究表明在断奶仔猪饲粮中添加谷氨酰胺和葡萄糖后，小肠吸收功能得到了明显的改善㊂虽然研究表明断奶仔猪饲粮中添加谷氨酰胺可提高肠道的吸收能力，但谷氨酰胺提高吸收功能的机理目前还不是十分清楚，由于吸收转运载体在营养物质吸收过程中起着重要作用，因此推测谷氨酰胺可能是通过提高吸收转运载体的基因表达而提高吸收功能㊂本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜I-FABP和PEPT1mRNA表达的发育性变化及谷氨酰胺对其mRNA表达的影响，为进一步研究I-FABP和PEPT1的功能和谷氨酰胺的作用机理提供一定的理论依据㊂1 材料与方法1.1 试验材料谷氨酰胺：纯度ȡ99.9%，购自浙江省东阳化学制药厂㊂1.2 试验设计及屠宰取样选取（21ʃ3)日龄断奶的杜ˑ长ˑ大仔猪69头，于断奶当天屠宰3头，剩余66头按饲养试验要求随机分为2组，每组3个重复，每个重复11头仔猪㊂对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂基础饲粮+1%谷氨酰胺㊂试验基础饲粮按照NRC （1998)标准配制成粉状全价料，试验组以1%谷氨酰胺替代等量的玉米，基础饲粮组成及营养水平见表1㊂断奶当天随机选取3头猪屠宰，并于断奶后第3㊁5㊁7和14天从对照组和试验组分别选取3头健康仔猪进行屠宰（即屠宰5次，共计27头)㊂屠宰前禁食2h，屠宰后迅速剖开腹腔，并立即结扎贲门瓣㊁幽门瓣㊁直肠远段，将消化道取出并小心剥离开，在十二指肠近端5cm处㊁空肠近端1/4处㊁回肠中段分别取10 15cm的肠管剪开并用少量预冷生理盐水冲洗，再用载玻片刮取肠黏膜放入1.5mL离心管中，-80ħ保存㊂1.3 总RNA的提取及反转录总RNA抽提试剂Trizol购自美国Invitrogen 公司；总RNA利用超微量分光光度计检测260和280nm下的吸光度；使用反转录试剂盒（RT rea-gents，TaKaRa公司，日本)进行反转录㊂表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）Table1 Composition and nutrient levels ofthe basal diet（air-dry basis)%项目Items含量Content原料Ingredients小麦Wheat15.00玉米Corn42.57豆粕Soybean meal23.00膨化大豆Extruded soybean8.00豆油Soybean oil 1.30乳清粉Whey power 3.00鱼粉Fish meal 3.00赖氨酸盐酸盐Lys㊃HCl0.35DL-蛋氨酸DL-Met0.08食盐NaCl0.30石粉Limestone 1.30磷酸氢钙CaHPO4 1.10预混料Premix1) 1.00合计Total100.00营养水平Nutrient levels2)粗蛋白质CP21.38消化能DE/（MJ/kg)14.19钙Ca0.99总磷TP0.65有效磷AP0.46钠Na0.25蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys0.75赖氨酸Lys 1.35苏氨酸Thr0.821)预混料为每千克饲粮提供The premix provides thefollowing per kilogram of diet：Cu200mg，Mn50mg，Zn 140mg，I0.60mg，Se0.30mg，Fe140mg，VD3400IU，VE 20IU，VK30.50mg，VB11.50mg，VB23.60mg，泛酸pan-tothenic acid10.0mg，吡哆醇pyridoxine3.00mg，烟酸nia-cin27.00mg，VB120.009mg，生物素biotin0.15mg，叶酸folic acid0.55mg㊂2)营养水平为计算均值㊂Nutrient levels are calculatedvalues.1.4 引物设计实时定量PCR（real-time PCR，RT-PCR)引物设计采用Primer5.0软件，由上海英骏生物技术有限公司合成，引物序列及参数见表2㊂507动物营养学报24卷表2 实时定量PCR特异性引物序列及参数Table2 Sequences and parameters of specific primers for real-time PCR项目Items登录号Accession No.引物序列Primer sequences（5ᶄ-3ᶄ)位置Localization产物大小Product size/bp小肠脂肪酸结合蛋白I-FABP NM 001031780上游：AACTACAGCCTCGCAGACGGAAC下游：CCTCTTGGCTTCTACTCCTTCA208 381174二肽转运蛋白1PEPT1EU400159上游：GGTTTAGGCATCGGAGTAAGAAGT下游：GGTCAAACAAAGCCCAGAACAT740 89515618S rRNA AY265350上游：TGCTGCCTTCCTTGGATGTG下游：CGGCGGCTTTGGTGACTCTA1499 16971991.5 反应体系及条件以18S rRNA管家基因作为内标，对I-FABP 和PEPT1进行相对定量分析㊂RT-PCR试剂SYBR Premix Ex Taq购自日本Takaka公司，反应在PCR仪（ABI7500real-time PCR System，美国ABI公司)上进行㊂扩增体系：反转录产物2μL，Premix Ex Taq TM （2ˑ)10.0μL，适量10μmol/L上㊁下游引物（I-FABP上㊁下游引物各0.4μL，PEPT1上㊁下游引物各2.0μL，18S rRNA上㊁下游引物各0.2μL)，ROX Reference DyeⅡ（50ˑ)0.4μL，灭菌蒸馏水加至总体积25μL㊂反应条件：95ħ30s预变性；95ħ5s，60ħ34s进行40个循环㊂每循环第2步结束时进行荧光信号收集㊂每个待测样品设置3个重复，对得到的3个Ct值取算术平均值，以备带入公式进行计算㊂1.6 标准曲线的建立分别将I-FABP㊁PEPT1和18S rRNA的总RNA反转录产物用双蒸水依次梯度稀释成1 1ˑ10-7，选择1 1ˑ10-4共5个浓度为标准品，标准品反应条件同上，设置3个重复㊂基线由PCR仪自动设置，标准曲线由软件自动分析，得到斜率和扩增效率㊂1.7 产物测序PCR产物送杭州博尚生物技术有限公司测序，采用Blast软件将所得到的基因序列与Gene-bank中登录的猪I-FABP㊁PEPT1和18S rRNA基因序列进行序列同源性比较，测得同源性均是100%㊂1.8 数据处理根据系统自动分析的I-FABP㊁PEPT1以及18S rRNA标准曲线可得：E-10-1/slope㊂式中：E为PCR扩增效率，slope为斜率㊂I-FABP㊁PEPT1和18S rRNA的扩增效率都接近100%且相互间效率偏差在5%以内，以目的基因mRNA的拷贝数与对应样品内参基因mRNA 的拷贝数的比值表示mRNA的相对表达量，运用SPSS16.0软件进行单因素方差分析和相关分析㊂数据采用柱状表来表示，图中的误差线表示标准差㊂2 结果2.1 总RNA抽提对所抽提样品进行吸光度检测结果为OD260nm:OD280nm为1.82 2.05，说明总RNA样品完整㊁降解较少㊁质量良好，可用于进一步试验操作㊂2.2 实时定量PCR标准曲线的建立采用模板为1 1ˑ10-4共5个浓度梯度的标准cDNA分别进行I-FABP㊁PEPT1和18S rRNA 定量PCR反应，得到实时定量PCR标准曲线，曲线拟合度（R2)为0.9992 0.9999，扩增效率为99.6% 105.8%，效率及拟合度均良好，可用于表达量定量分析㊂2.3 不同肠段I-FABP和PEPT1mRNA表达的空间特异性将对照组仔猪相同肠段5个不同时间点的mRNA样品混合后进行PCR反应，得出I-FABP mRNA在空肠表达量最高，回肠其次，十二指肠较低，各肠段之间差异不显著（P＞0.05)（图1-A)；PEPT1mRNA在十二指肠的表达量较高，空肠其次，回肠较低，各肠段间差异也不显著（P＞0.05)（图1-B)㊂6074期周琳等：断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA 表达发育性变化及图1 断奶仔猪不同肠段I-FABP 和PEPT1mRNA 相对表达量Fig.1 Relative expression levels of I-FABP and PEPT1mRNA in different intestinal sigments of weaner piglets2.4 断奶仔猪I-FABP 和PEPT1mRNA 表达的发育性变化及谷氨酰胺对其的影响采用相对定量方案，引入内参基因18S rRNA 矫正初始细胞数㊁RNA 抽提效率等不可控制因素，归一化起始组织量㊂将27头断奶仔猪十二指肠㊁空肠㊁回肠相对定量数据带入公式计算得到I-FABP （图2-A ㊁B ㊁C )和PEPT1（图2-D ㊁E ㊁F )在不同时间点各肠段表达量变化规律㊂I-FABP mRNA 的表达量在十二指肠㊁空肠和回肠的表达量变化趋势基本一致，均在断奶后急剧下降，断奶后第3天的表达量最低，显著低于断奶当天（P ＜0.05)，之后表达量逐渐升高，至断奶后第14天达到最高值，但仍低于断奶前水平㊂试验组不同时间点十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的I-FABP mRNA 的表达量均高于对照组，但差异不显著（P ＞0.05)㊂断奶第14天，对照组十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的I-FABP mRNA 表达量均显著低于断奶当天（P ＜0.05)，而试验组各肠段I-FABP mRNA 表达量均与断奶当天相比不显著（P ＞0.05)，表明饲粮中添加谷氨酰胺可促使断奶仔猪十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的I-FABP mRNA 表达提前恢复至断奶前水平㊂PEPT1mRNA 在十二指肠㊁空肠和回肠的表达量变化趋势也基本一致，在断奶后急剧下降，断奶第3天的表达量最低且显著低于断奶当天（P ＜0.05)，之后表达量逐渐升高，至断奶后第14天达到最高值㊂PEPT1mRNA 在十二指肠的表达量从断奶第5天开始超过断奶当天水平，在空肠和回肠的表达量在断奶后第14天仍低于断奶当天㊂试验组不同时间点十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的PEPT1mRNA 的表达量均高于对照组，但差异不显著（P ＞0.05)㊂断奶第5天，对照组PEPT1mR-NA 在十二指肠的表达量与断奶当天无显著差异（P ＞0.05)，但试验组表达量显著高于断奶当天（P ＜0.05)㊂以上结果表明谷氨酰胺可促进断奶仔猪十二指肠PEPT1mRNA 的表达提前恢复至断奶前水平㊂3 讨论3.1 断奶仔猪肠道I-FABP mRNA 表达的发育性变化在小肠内，哺乳动物I-FABP 与食物中长链脂肪酸的吸收㊁运输以及脂类合成㊁分解代谢有着密切关系[11-12]㊂I-FABP 首先从肠道黏膜细胞质分离得来，在哺乳动物其表达被认为仅在肠道和胃部[13]㊂姜延志等[14]首次克隆并研究了猪的I-FABP 表达的组织特异性，研究表明猪体内I-FABP 基因在多器官组织中都有表达并且肠道中表达量最为丰富㊂I-FABP 基因的表达与组织和个体发育差异有关[13]㊂本试验的结果表明，断奶仔猪I-FABP mRNA 的表达量在十二指肠㊁空肠和回肠无显著差异㊂有研究报道在肠道，从十二指肠到结肠，从绒毛顶端到肠隐窝，随着上皮细胞摄取配基长链脂肪酸（LCFA )能力的降低，I-FABP 基因表达呈明显递减的阶梯状分布[15-16]㊂本研究结果与相关报道略有不同，这可能是由于检测方法和选用的动物有一定的差异，也可能是因为断奶仔猪的肠道基因表达规律与成年哺乳动物略有不同㊂707动物营养学报24卷同组㊁不同时间点数据柱形标注不同字母表示差异显著（P＜0.05)，相同字母表示差异不显著（P＞0.05)；不同组㊁相同时间点数据柱形无字母标注表示差异不显著（P＞0.05)㊂Data columns of the same group at different time point with different letters mean significant difference（P＜0.05)，while with the same letter mean no significant difference；data columns of different groups at the same time point without letter mean no significant difference（P＞0.05)㊂图2 谷氨酰胺对断奶仔猪十二指肠㊁空肠㊁回肠的I-FABP和PEPT1mRNA相对表达量的影响Fig.2 Effects of glutamine on relative expression levels of I-FABP andPEPT1mRNA in the duodenum，jejunum and ileum of weaner piglets通过采用免疫印迹（Northern blot)方法检测I-FABP基因在2㊁6㊁12周龄的肉鸡高脂系公鸡和白耳公鸡小肠中组织中的表达的研究表明，该基因在不同时期㊁不同品种间的表达谱不一致；同时，分别采用Northern blot和RT-PCR2种方法检测I-FABP基因的表达特性，表明不同方法检测出该基因表达的组织特异性也不一样，并进一步验证了RT-PCR具有更高的灵敏性[13]㊂目前还有没有关8074期周琳等：断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA表达发育性变化及于断奶仔猪I-FABP基因发育性变化的相关报道，本试验采用RT-PCR方法检测的结果表明，I-FABP mRNA在十二指肠㊁空肠和回肠的表达量均是从断奶后第3天开始呈现递增的趋势，至断奶后第14天达到最高值，但仍低于断奶前水平㊂3.2 断奶仔猪肠道PEPT1mRNA表达的发育性变化PEPT1作为肽转运体主要在小肠中表达，对小肽的吸收起到关键性作用㊂PEPT1蛋白和mR-NA在几种动物的十二指肠和空肠都已检测到，在回肠低量表达，结肠在正常情况下不表达[17]，不同种属动物体内㊁同一个体内不同器官PEPT1mR-NA分布不一致㊂不同动物PEPT1在小肠内的分布有2种模式：1)沿肠管垂直轴方向，PEPT1mR-NA的表达由绒毛顶部向隐窝部位逐渐下降；2)沿肠管纵轴方向，由十二指肠至回肠PEPT1分布密度逐渐降低[18-19]㊂Chen等[20]用Northern blot的方法研究表明，空肠PEPT1mRNA表达量最高，其次为十二指肠，回肠最低，结肠不表达㊂哺乳藏猪空肠PEPT1mRNA表达量高于十二指肠及回肠，表明空肠仍可能是小肽吸收的主要场所[21-22]㊂鸡以十二指肠中的表达量最高，其次为空肠和回肠；兔的PEPT1mRNA表达量在十二指肠和空肠最多，回肠次之，结肠最少[23]㊂邹仕庚等[24]研究发现，60日龄长白猪肠道对寡肽的吸收转运主要发生于十二指肠㊁空肠和回肠，尽管十二指肠PEPT1mRNA的表达量较高，但由于十二指肠的肠段较短，寡肽的主要吸收转运部位还是位于空肠和回肠㊂由此说明研究结果的不相同可能由于检测方法的差异㊁动物种属㊁年龄㊁肠段样品大小以及小肠采样位置的影响㊂Miyamoto等[25]用Northern blot分析表明大鼠4日龄小肠中PEPT1表达量最高，而后至28日龄PEPT1表达量呈下降趋势㊂陈敦学等[22]研究表明在藏猪哺乳阶段，不同肠段PEPT1mRNA的发育性表达变化并不一致，肠段的不同部位在小肽的吸收上可能存在差异㊂本试验研究表明，PEPT1 mRNA在十二指肠㊁空肠㊁回肠的表达量均在断奶后急剧下降，从断奶后第3天逐渐升高，至断奶第14天达到最高值㊂3.3 谷氨酰胺对断奶仔猪肠道I-FABP㊁PEPT1 mRNA表达的影响谷氨酸胺作为一种条件性必需氨基酸，在动物处于特殊生长阶段如断奶期或应激期间可显著提高小肠对营养物质的吸收能力[26]㊂赵玉蓉等[27]研究表明谷氨酰胺能显著促使断奶仔猪骨髓㊁空肠黏膜抗菌肽PR-39mRNA及骨髓的骨髓组织抗菌肽1（PG-1)mRNA表达上调，减缓免疫抑制，表明谷氨酰胺对断奶仔猪基因表达调控有一定的作用㊂本试验结果显示不同肠段㊁不同时间点试验组的I-FABP和PEPT1mRNA表达量始终高于对照组，但无显著影响㊂添加谷氨酰胺可促使断奶仔猪十二指肠㊁空肠㊁回肠黏膜的I-FABP 和十二指肠PEPT1mRNA表达提前恢复至断奶前水平㊂试验结果提示谷氨酰胺对I-FABP和PEPT1mRNA的表达有一定的促进作用㊂4 结论①I-FABP mRNA的表达量在空肠最高，回肠其次，十二指肠较低，但各肠段之间差异不显著；PEPT1mRNA在十二指肠的表达量较高，空肠其次，回肠中的表达量较低，各肠段间无显著差异㊂②I-FABP和PEPT1mRNA在十二指肠㊁空肠和回肠的表达量均在断奶后急剧下降，断奶第3天的表达量最低，显著低于断奶当天，从断奶后第3 14天表达量逐渐升高㊂③添加谷氨酰胺仔猪I-FABP和PEPT1mR-NA表达略提高，添加谷氨酰胺可促使断奶仔猪十二指肠㊁空肠㊁回肠粘膜的I-FABP及十二指肠PEPT1mRNA表达提前恢复至断奶前水平㊂参考文献：[1]ZIMMERMAN A W，VAN MOERKERK H T，VEERKAMP J H.Ligand specificity and conforma-tional stability of human fatty acid-binding proteins[J].The International Journal of Biochemistry&CellBiology，2001，33（9)：865-876.[2]刘忠臣，陈代文，余冰，等.不同脂肪来源对断奶仔猪生长性能和脂类代谢的影响[J].动物营养学报，2011，23（9)：1466-1474.[3]HO S Y，STORCH mon mechanisms of mono-acylglycerol and fatty acid uptake by human intestinalin Caco-2cells[J].American Journal of Physiology-Cell Physiology，2001，281（4)：C1106-C1117. [4]初丽丽，王启贵，关天竹，等.I-FABP基因侧翼区多态性与鸡生长和胴体组成性状的相关研究[J].东北农业大学学报，2008，39（9)：70-74.907动物营养学报24卷[5]SWEETSER D A，BIRKENMEIER E H，KLISAK IJ，et al.The human and rodent intestinal fatty acidbinding protein genes.A comparative analysis of theirstructure，expression，and linkage relation-ships[J].Journal of Biological Chemistry，1987，262（33)：16060-16071.[6]MILOVIC V，TURCHANOWA L，STEIN J，et al.Transepithelial transport of putrescine across monolay-ers of the human intestinal epithelial cell line，Caco-2[J].World Journal of Gastroenterology，2001，7（2)：193-197.[7]CHARRIER L，MERLIN D.The oligopeptide trans-porter hPepT1：gateway to the innate immune response[J].Laboratory Investigation，2006，86（6)：538-546.[8]WU G Y，KNABLE D A.Free and protein bound a-mino acids in sow s colostrums and milk[J].TheJournal of Nutrition，1994，124（3)：415-424. [9]SALLOUM R M，SOUBA W W，KLIMBERG V S，etal.Glutamine is superior to glutamate in supportinggut metabolism，stimulating instestinal glutaminase ac-tivity and preventing bacterial translocation[J].SurgForum，1989，40：6-8.[10]刘涛，彭健，周诗其，等.外源性谷氨酰胺和谷氨酸对早期断奶仔猪肠粘膜形态㊁结构和小肠吸收功能及骨骼肌中DNA㊁RNA浓度的影响[J].中国兽医学报，2003，23（1)：62-65.[11]MONTOUDIS A，DELVIN E，MENARD D，et al.In-testinal-fatty acid binding protein and lipid transport inhuman intestinal epithelial cells[J].Biochemical andBiophysical Research Communications，2006，339（1)：248-254.[12]MONTOUDIS A，SEIDMAN E，BOUDREAU F，etal.Intestinal fatty acid binding protein regulates mito-chondrionβ-oxidation and cholesterol uptake[J].TheJournal of Lipid Research，2008，49：961-972. [13]VEERKAMP J H，MAATMAN R G.Cytoplasmic fat-ty acid-binding proteins：their structure and genes[J].Progress in Lipid Research，1995，34（1)：17-52. [14]姜延志，李学伟.猪I-FABP基因的分子克隆与组织特异性表达分析[J].遗传学报，2006，33（2)：125-132.[15]APONTE G W.PYY-mediated fatty acid induced in-testinal differentiation[J].Peptides，2002，23（2)：367-376.[16]常晓彤，侯丽娟，王振辉，等.IFABP基因单核昔酸多态性与2型糖尿病患者血清脂质水平的关系[J].中国糖尿病杂志，2007，15（5)：285-288. [17]ADIBI S A.Regulation of expression of the intestinaloligopeptide transporter（Pept-1)in health and disease[J].American Journal of Physiology and Gastrointes-tine，2003，285（5)：779-788.[18]OGIHARA H，SUZUKI T，NAGAMACHI Y，et al.Peptide transporter in the rat small intestine：ultrastruc-tural localization and the effect of starvation and ad-ministration of amino acids[J].The HistochemicalJournal，1999，31（3)：169-174.[19]TANAKA H，MIYAMOTO K I，MORITA K，et al.Regulation of the PepT1peptide transporter in the ratsmall intestine in response to5-fluorouracil-inducedinjury[J].Gastroenterology，1998，114（4)：714-723.[20]CHEN H，WONG E A，WEBB K E，Jr.Tissue distri-bution of a peptide transporter mRNA in sheep，dairycows，pigs，and chickens[J].Journal of Animal Sci-ence，1999，77（5)：1277-1283.[21]石常友，宾石玉，褚武英，等.藏猪肠道不同部位CAT1㊁EAAC1和Pept1mRNA的特异性分布[J].广西师范大学学报：自然科学版，2009，27（3)：71-75.[22]陈敦学，石常友，宾石玉，等.哺乳藏猪肠道CAT1㊁EAAC1和Peptl mRNA的发育性表达分析[J].广西师范大学学报：自然科学版，2010，28（1)：63-67.[23]FREEMAN T C，BENTSEN B S，THWESAIT D T，etal.H+/di-tripeptide transporter（PepT1)expressionin the rabbit intestine[J].Pflugers Archiv EuropeanJournal of Physiology，1995，430（3)：390-400. [24]邹仕庚，冯定远，黄志毅，等.猪肠道寡肽转运载体1（PepT1)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化[J].农业生物技术学报，2009，17（2)：229-236.[25]MIYAMOTO K I，SHIRAGA T，MORITA K，et al.Sequence，tissue distribution and developmental chan-ges in rat intestinal oligopeptide transporter[J].Bio-chemica et Biophysica Acta（BBA)-Gene Structureand expression，1996，1305（1/2)：34-38. [26]杨彩梅，徐卫丹，陈安国.甘氨酰-L-谷氨酰胺对断奶仔猪性能和消化道吸收功能的影响[J].中国畜牧杂志，2005，41（8)：6-7.[27]赵玉蓉，王红权，贺建华，等.谷氨酰胺对断奶仔猪抗菌肽PR-39mRNA的表达调控[J].动物营养学报，2009，21（4)：567-572.017。

严重烫伤后大鼠小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体（pept1）的摄取和转运功能的变化

东南大学硕士学位论文严重烫伤后大鼠小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体（PepT1）的摄取和转运功能的变化姓名：***申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：***20050601东南大学硕士学位毕业论文综述肠上皮细胞二肽转运载体的生物学功能及研究进展游离氨基酸和短肽（ｓｈｏｒｔ—ｃｈａｉｎｐｅｐｔｉｄｅ）是蛋白质在小肠的主要消化产物［１，２１，蛋白质的最终吸收主要依靠两种机制：①特异的氨基酸转运系统转运游离氨基酸；②寡肽转运系统转运寡肽（二肽、三肽）。

研究表明，二肽经肠上皮细胞膜二肽载体（ｄｉｐｅｐｔｉｄｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ，ＰｅｐＴ）是蛋白质吸收的主要途径【圳，另外一些类似于肽的药物如Ｂ一内酰胺类抗生素也主要是通过二肽载体的转运而吸收１５，６。

７．”，因此，肠上皮细胞膜的众多载体中，二肽载体备受嘱目１９］。

１二肽载体ＰｅｐＴ的分类和分布。

１．１ＰｅｐＴ的分类。

二肽载体系统（ｄｉｐｅｐｔｉｄｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓｙｓｔｅｍ，ＤＴＳ）有两种类型。

ＰｅｐＴｌ主要表达在小肠粘膜上皮细胞，肾小管上皮细胞膜上也少量存在（图１）：ＰｅｐＴ２仅表达在肾小管上皮细胞膜上㈣“Ｊ（图２）。

图１ＲＴ－ＰＣＲ显示ＰｅｐＴｌ主要表达在小肠粘膜上皮细胞，人肠腺癌细胞系（ＴｈｅＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌＬｉｎｅ，Ｃａｃｏ－－２）也常规表达，肾小管上皮细胞膜上也少量存在。

而ＰｅｐＴ２则主要表达在ｌ肾脏。

小肠粘膜上皮细胞和Ｃａｃｏ－－２细胞不表达。

窭毒《；ＰＥＰＴ１ｐＦＰＴ２图２ＲＴ－ＰＣＲ检测结果，ＰｅｐＴｌ表达在Ｃａｃｏ一２细胞，ＰｅｐＴ２仅表达在肾小管上皮细胞（ＳＫＰＴ）上。

将人肠上皮细胞二肽载体（１ｌＰｅｐＴｌ）的ｃＤＮＡ转染给爪蟾卵母细胞，使之表达ｈＰｅｐＴｌ载体蛋白，这种载体蛋白对二肽具有极高的转运能力，但对底物的亲和力较低：而源于２东南大学硕士学位毕业论文增加了ＰｅｐＴｌ的数量，也就增加了对二肽的转运ｆ４３１。

早期断奶对仔猪空肠和回肠兴奋性氨基酸载体1表达的影响

早期断奶对仔猪空肠和回肠兴奋性氨基酸载体1表达的影响崔一喆;王秋菊;苏景;李悦;周亚强;陈玲【摘要】本试验旨在研究仔猪出生后10～20 d，早期断奶仔猪小肠谷氨酸转运载体基因表达情况与哺乳仔猪的差异。

试验分别从40头不同母猪的仔猪中各选出体重相近，10日龄的“杜×长×大”三元杂交仔猪1头，共40头仔猪，随机不配对分为2组，每组20头仔猪，对照组（哺乳组）为哺乳仔猪，随母猪喂养；试验组（断奶组）为断奶仔猪，隔离断奶饲养；试验期10 d。

饲养结束，每组随机取12只仔猪，宰杀取空肠和回肠，测定谷氨酸转运载体兴奋性氨基酸转运载体1（ EAAC1）蛋白质表达情况和游离氨基酸含量。

结果显示，断奶显著降低了仔猪空肠和回肠EAAC1（57和73 ku）及其相关蛋白谷氨酸转运联合蛋白（ GTRAP3-18）（50 ku）的蛋白质和mRNA表达量（ P＜0．05）。

断奶提高了仔猪空肠游离谷氨酸和总氨基酸含量，却降低了仔猪回肠游离谷氨酸和总氨基酸含量，差异显著（ P＜0．05）。

结果提示，早期断奶降低 EAAC1和GTRAP3-18的蛋白质含量，这可能与早期断奶仔猪遭受营养谷氨酸缺乏导致的肠道氨基酸吸收转运障碍有关。

%This study was conducted to examine the effects of early weaning on adaptive changes in glutamate transporter gene expression in comparison with the suckling counterpart in the pig during the ages of 10 to 20 days.A total of 40 ternary hybrid piglets, with a similar body weight randomly taken from 40 different sows at 10 days of age, were divided into 2 groups.The trial group were 20 suckling piglets randomly obtained from 20 different sow litters, were allowed to continue suckling with their sows as the suckling group for 10 days;the 20 piglets of the weaning group were taken from another 20 different sow litters,moved off-site and weaned on a weaning diet for 10 days according to standard swine industry early weaning practices.At the end of the trial, 12 piglets were randomly taken from each group to remove the jejunum and ileum, and gene ex-pression of excitatory amino acid carrier 1 ( EAAC1) and free amino acids content were determined.The results showed that weaning significantly decreased the abundance of the EAAC1 ( 57 and 73 ku) and glutamate trans-porter associate protein 3-18 ( GTRAP3-18) ( 50 ku) protein and mRNA expression in jejunum and ileum of piglets( P<0.05) .Weaning significantly increased the contents of glutamate and total free amino acids ( P<0.05) , while the contents of glutamate and total free amino acids in ileum were significantly decreased ( P<0.05).In conclusion, early weaning decrease jejunal and ileal EAAC1 and GTRAP3-18 protein expression and this may, in part, is related to early weaned piglets suffered from lack of nutrition leading to intestinal gluta-mate uptake disorder.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】9页(P555-563)【关键词】仔猪;断奶;谷氨酸转运载体;EAAC1;小肠【作者】崔一喆;王秋菊;苏景;李悦;周亚强;陈玲【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319; 东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030;黑龙江省动物疫病预防与控制中心，哈尔滨 150069;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S828谷氨酸(Glu)作为动物黏膜主要的能源物质之一，是仔猪断奶时的条件性必需氨基酸[1]，对仔猪生长发育及肠道黏膜生长和修复起关键作用。

猪肠道钠氢交换载体(NHE3)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

猪肠道钠氢交换载体(NH E3)mRNA 表达的肠段特异性和发育性变化
邹仕庚1，2，冯定远1* ，黄志毅1，李岩3，吴同山3，
左建军1，职爱民1，董泽敏1，张常明1，刘清神1
(1.华南农业大学动物科学学院，广州 510642； 2.广东科贸职业学院，广州 510430；3.东莞市畜牧科学研究所，东莞 523086)
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中性的N aCl吸收、HCO 3吸收和H +分泌[5]。此外，肠道的N H E 还与腹泻有关[6]。
有关N H E2和N H E3 mRNA 在人、兔和大鼠肠道中的组织特异性表达及发育性变化已有报道[7-9]，但在猪肠道中的表达及发育模式还未见报道。蓝塘猪是我国优良地方品种，其抗逆性强，断奶时腹泻的应激反应小，但生长速度慢；而长白猪是世界著名的瘦肉型猪种，其饲料转化效率和胴体瘦肉率高，但抗逆性差，断奶时较易发生下痢。本研究分别选用遗传背景相同的蓝塘和长白猪，于1、7、26、 30、60、90 和150 日龄采集试猪十二指肠、空肠、回肠和结肠样品；运用荧光相对定量RT-PCR 方法研究猪肠道N H E3 mRNA 表达的肠段特异性，不同品种猪十二指肠、空肠和结肠N H E3 mRNA 表达的发育模式，并进行品种间比较；揭示猪肠道 N H E3 mRNA 的表达规律，为N H E3在养猪生产中的作用提供理论依据。
60d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道表达的发育模式。结果显示：长白猪肠道N H E3 mRNA
的表达丰度为结肠、十二指肠、空肠和回肠依次降低，且结肠显著高于空肠和回肠(P＜0.05)。不同猪种N H E3
mRNA 在十二指肠和空肠的表达模式相似；蓝塘和长白猪N H E3 mRNA 的表达丰度分别在7和30d(十二指肠)、

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响张帅;刘婷婷;周琳;陈安国;洪奇华;杨彩梅【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2011(023)006【摘要】本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜钠葡萄糖转运蛋白1(SGLTl)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)mRNA表达的发育性变化规律及谷氨酰胺是否对SGLTl和GLUT2 mRNA的表达产生影响.选择21日龄断奶的杜×长×大仔猪69头,断奶当天屠宰3头猪,其余66头随机分成2组,每组3个重复,每个重复11头仔猪.对照组饲喂基础饲粮(不添加谷氨酰胺),试验组饲喂基础饲粮+1%谷氨酰胺.断奶后第3、5、7、14天每组分别屠宰3头.取十二指肠、空肠和回肠黏膜样品,通过荧光定量RT-PCR方法测定SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量.结果表明:1)SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量在不同肠段之间无显著差异(P>0.05).2)十二指肠、空肠中SGLT1 mRNA表达量在断奶后先降低,断奶后第3天开始升高,第14天达峰值,回肠SGLT1 mRNA表达量在断奶后先升高,断奶后第7天较低,第14天为峰值;GLUT2 mRNA在十二指肠和空肠中的表达量从断奶后第3～7天呈现持续上升的趋势,第7天达峰值,但在第14天降至断奶当天水平,回肠GLUT2 mRNA表达量在断奶后逐渐升高,第5天达峰值,而后逐渐回落至断奶当天水平.3)饲粮添加1%谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著影响.结果提示:断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著差异,但均随断奶后的时间而变化,谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2在转录水平上无显著影响.%The experiment was conducted to investigate the variation of sodium/glucose cotransporter 1( SGLT1 ) and glucose transporter 2 ( GLUT2 ) mRNA expression levels in small intestinal mucosa of weaning piglets and the influnence of dietary glutamine (GLN) on their expression. Sixty nine piglets weaned at 21-day-old were selected, 3 of them were slaughtered on the day of weaned, and the other 66 piglets were randomly divided into 2 groups with 3 replicates in each group and 11 heads per replicate. Piglets in control group and experimental group were fed basal diet and basal diet + 1％ GLN, respectively. Three piglets from each group were slaughtered on the 3rd, 5th, 7th and 14th day after weaned, respectively. Mucosal tissues were collected from the different segments of small intestine (duodenum, jejunum and ileum) and the mRNA expressions of SGLT1 and GLUT2 were determined by real-time PCR. The results showed as follow: 1 ) There were no significant difference of SGLT1 and GLUT2 mRNA expression levels ameng different sigments of small intestine (P ＞ 0.05). 2 ) The SGLT1 mRNA expression levels in duodenum and jejunum decreased from the day of weaned, then increased from the 3rd day after weaned, reached the peak on the 14th day,while SGLT1 mRNA expression level in ileum showed an increase trend during the 0 to 5th day after weaned,then decreased on the 7th day, reached the peak on the 14th day; the GLUT2 expression levels in duodenum and jejunum showed increase trends during the 3rd to 7th day after weaned and reached the peak on the 7th day, then decreased to the same level as the weaned day on 14th day, while that of ileum reached the peak on the 5th day after weaned, then decreased to the same level as the weaned day. 3 ) Dietary supplemented with 1％ GLN had nosignificant effect on expression levels of SGLT1 and GLUT2 in weaning piglets. The results indicate that the difference of of SGLT1 and GLUT2 mRNA expression levels in different sigments of small intestine are not significant, but the expression levels change with changing of time after weaned. The effects of GLN on SGLT1 and GLUT2 are not on the transcriptional level. [Chinese Journal of Animal Nutrition,2011, 23(6) :983-990]【总页数】8页(P983-990)【作者】张帅;刘婷婷;周琳;陈安国;洪奇华;杨彩梅【作者单位】浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S828【相关文献】1.DON污染饲粮添加竹炭和竹醋液对断奶仔猪抗氧化性能及小肠黏膜形态的影响[J], 蒋竹英;李丽立;唐利华;范觉鑫;王升平;印遇龙;李铁军2.饲粮中添加表皮生长因子对断奶仔猪血清生化指标、血清游离氨基酸和小肠黏膜水解氨基酸含量的影响 [J], 朱繁;王丽霞;贾杏林;尹佳;杨焕胜;印遇龙3.日粮中添加谷氨酰胺对断奶仔猪小肠形态和木糖吸收影响 [J], C．B．Hsu;王（王争）（韦华）;王学文;于学红;王仁华4.在饲粮中添加谷氨酰胺和谷氨酸对断奶仔猪生产性能的影响 [J], 刘涛;彭健5.断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

执业药师药学知识一重点

考点一：剂型分类形态、给药途径、分散系统、制法、作用时间1.按形态学分类：固体(散剂、颗粒剂、片剂等)、半固体(软膏剂、糊剂等)、液体(溶胶剂、芳香水剂等)和气体(气雾剂、局部吸入剂等)2.按给药途径分类①经胃肠道给药剂型：口服给药②非经胃肠道给药剂型：注射给药、皮肤给药、口腔给药、鼻腔给药、肺部给药、眼部给药、直肠、阴道和尿道给药等3.按分散体系分类①真溶液类②胶体溶液类③乳剂类④混悬液类⑤气体分散类：如气雾剂、喷雾剂等。

⑥固体分散类：如散剂、丸剂、胶囊剂、片剂等普通剂型。

⑦微粒类：如微囊、微球等4.按制法分类：浸出制剂、无菌制剂等5.按作用时间分类：速释、普通、缓控释制剂等考点二：药物剂型的重要性①可改变药物的作用性质②可调节药物的作用速度③可降低(或消除)药物的不良反响④可产生靶向作用⑤可提高药物的稳定性⑥可影响疗效(影响不是决定)考点三：药用辅料的作用①赋型②使制备过程顺利进行③提高药物稳定性④提高药物疗效⑤降低药物毒副作用⑥调节药物作用⑦增加病人用药的顺应性考点四：药物化学降解途径水解和氧化是药物降解的两个主要途径。

①水解：主要有酯类(包括内酯)、酰胺类(包括内酰胺)青霉素类分子中存在不稳定的β-内酰胺环，在H+或OH-影响下，很易裂环失效。

②氧化：酚类、烯醇类、芳胺类、吡唑酮类、噻嗪类药物较易氧化肾上腺素氧化后先生成肾上腺素红，后变成棕红色聚合物或黑色素。

③异构化左旋肾上腺素—外消旋化作用;毛果芸香碱—差向异构作用;维生素A—几何异构化④脱羧：对氨基水杨酸钠在光、热、水分存在的条件下很易脱羧，生成间氨基酚。

⑤聚合：氨苄青霉素浓的水溶液在贮存过程中可发生聚合反响，形成二聚物，此过程可继续下去形成高聚物。

考点五：影响药物制剂稳定性的因素1.处方因素对药物制剂稳定性的影响① pH的影响②广义酸碱催化的影响③溶剂的影响④离子强度的影响⑤外表活性剂的影响⑥处方中基质或赋形剂的影响2.外界因素对药物制剂稳定性的影响①温度的影响②光线的影响③空气(氧)的影响④金属离子的影响：微量金属离子对自氧化反响有明显的催化作用⑤湿度和水分的影响⑥包装材料的影响考点六：药物稳定性试验方法①影响因素试验(高温、高湿、强光试验)②加速试验(化学动力学理论)③长期试验(留样观察法)考点七：药物配伍变化1.物理学的配伍变化①溶解度改变：安定注射液(含40%丙二醇和10%乙醇)与5%葡萄糖注射液配伍析沉淀②吸湿、潮解、液化与结块(散剂、颗粒剂)③粒径或分散状态的改变(乳剂、混悬剂)2.化学的配伍变化(熟悉例子)①浑浊或沉淀pH改变产生沉淀：酸性药物盐酸氯丙嗪注射液同碱性药物异戊巴比妥钠注射液混合;水解产生沉淀：如苯巴比妥钠水溶液;生物碱盐溶液的沉淀：大多数生物碱盐的溶液，当与鞣酸、碘、碘化钾、乌洛托品等相遇时能产生沉淀等;黄连素和黄芩苷在溶液中能产生难溶性沉淀;复分解产生沉淀：如硫酸镁遇可溶性的钙盐产生沉淀。

寡肽转运体PepT1在胃肠道中的功能表达及调控因素

【ｂｔａｔＡｓｃ】ＭａｙｅｔｅｒｓｏｅｓａｅｂｅｅｔｅａｍｓａｏｇｈｃｅＴａｂｅｉｅｒｎｐｉａｐｒｒｈｖｅｎｉｎｉｄｉｍｍａ，ｍｎｉＰｐ１ｈｓｅｎｗｄ－ｐｄｔｎｔｄｆｎｉｗｈ
中华临床营养杂志２１４月第１００年８卷第２期
ＣｉｓＪｕｎｌｆｌｉｌｕｉｏ，ｒ００Ｖ１１，ｏ２ｈｎｅｏｒａｏｉｃｔｔｎＡｐｌ１，ｏ．８Ｎ．ｅＣｎａＮｒｉｉ２
・
综述・
寡肽转运体Ｐｐ１在胃肠道中的功能表达ｅＴ及调控因素
ｃｌ．Ｐｐ１ｐａｓｎｉｐｒｎｒｌｉｔｅｂｏｔｎｏｄｔ —ｅｔｅ（ｅｄｇａａｏｒｕｔｏｐｏｉｉｉｅｓｅＴｌｏａｔｏｓｒｉｆｉｒｐｐｉｔｅｒｄｔｎｐｄｃｆｒｔｎｎｎｌｙａｍｔｅｎｈａｐｏ／ｉｄｈｉｏｓｅ・
Ｓａｇａｉｏ％ＵｉｒｔｈｎｈｉａＪｎｖｓｙ，Ｓａｇａ０２３，Ｃｉａｅｉｈｎｈｉ０３２ｈｎ
ＣｒｓｎｉｕｈｒＱＮＨａ — ｎＥｍｉｕｎｎｑ＠ｍｉｃｒｏｅｏｄｎａｔｏ：｜ｕｎｌｇ — ａ：ｈａｌｇｉｇａｎｒｐｇｏｌｏｎｔｏ
ｔｔａｔｃ）ｅｉｌａｔ．Ｍｅｎｈｅｉｍｄｔｅｔｎｐｒｏｐｐｄ—ｋｍｇｎｅｂｃｒｌｒｕｔｈｒｏｅｓｎｒａｗｉ，ｔｅｉｅｔａｓｏｔｆｅｔｅｉｄｓａｄｔａｔｉｏｃ．Ｔｅｅｒ，ｌａｓｈｒｉｌｅｈｅａｐｄｓｆ

断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA表达发育性变化及谷氨酰胺对其的影响

研究发现， I F A BP
与长链脂肪酸的结合力高于肝脏脂肪酸结合蛋白，高亲和力的 I -F A BP 提高了脂肪酸的水溶性， -F A BP c DN A 有利于其吸收和运输 � 研究发现将 I 2 细胞，持续转染 C a c o可减少脂类输出 � 载脂蛋白 F A BP 具有促进脂合成及乳糜微粒的分泌，证实 I �此外， I F A BP 与脂肪代［3 ］谢及相关酶类的活化有关 �人� 猕猴和大鼠的类吸收和转运的功能 I F A BP 均分布于小肠，其表达具有高度的组织特异性，且不同的物种具有较高的同源性 � 虽
动物营养学报 2 01 2， 2 4( 4) : 7 0 471 1 C J A N : 10. 39 69 /. . 1006- 267 . 2012. 04. 015
断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体
1
mR N A
表达发育性变化及谷氨酰胺对其的影响
收稿日期 : 2011 - 10 - 17 基金项目 : 国家自然科学基金 ( 30700578 ) 作者简介 : 周
［ 4- 5 ］［2 ］
琳 ( 198 8 � ) ，女，四川广元人，硕士研究生，研究方向为动物营养与饲料科学 � E -ma i l : yu ce ngki ki @ 163 .c om
［1 ］
F A BP 对动物的脂肪酸吸收和调控具有重要然I -F A BP m R N A 表达方面的作用，但目前对于猪的 I 研究较少 � 蛋白质在体内主要是以二肽形式被吸收［6］，在肠道中二肽的转运和摄取过程依赖肠上皮细胞刷状缘的二肽转运载体 1( di pe pt i de t ra nsport e r 1， PE PT1) �PE PT 1 是一种氢离子 ( H + ) 依赖的� 低亲和力 / 高容量的寡肽转运体，主要表达在小肠上皮细胞刷状缘膜上，在近端肾小管上皮细胞 � 胆管上皮细胞 � 免疫细胞亦有表达［7］，一些类似于肽的药 - 内酞胺类抗生素也主要是通过二肽转运载体的转运而吸收� 因此，肠上皮细胞膜的众多物如载体中，二肽转运载体备受瞩目 �

【国家自然科学基金】_肽转运载体1_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731

2008年序号 1 2 3 4 5 6 7
科研热词肾小管亚细胞定位连接效率载体蛋白质类胆汁酸类二羧酸转运蛋白三羧酸循环
推荐指数 2 2 1 1 1 1 1
2009年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
科研热词转运载体血清生化指标藏猪肠道实时定量pcr 奶山羊大豆小肽分布乳成分 pept1
推荐指数 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2014年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
2014年科研热词阳离子脂质体酪蛋白端基肽游离氨基酸泌乳奶牛崇仁麻鸡家蚕实时荧光定量pcr 基因载体基因转运基因表达原核表达卵黄原蛋白分离纯化免疫印迹法体外培养乳腺组织 pept1 推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
2011年科研热词肽转运载体1 理中汤环磷酸腺苷转运功能 6-姜酚人参皂苷rg1 脾阳虚证细胞培养大鼠基因表达调控人参皂苷/药理学推荐指数 5 4 4 3 3 2 1 1 1 1 1
2013年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
科研热词转运机制草鱼综述穿膜肽寡肽转运载体吸收功能分子特征 pept2 pept1 mrna表达丰度 laci前头肽突变体葡萄糖转运载体营养素结构研究前景氨基酸转运载体小肽转运载体二聚体 peptl pept1cdna laci dna转运 dna结合活性 cdna