豆粕功能肽制备及其降血脂作用
大豆肽降血脂功能实验观察
大豆肽降血脂功能实验观察中国疾病预防控制中心营养与食品安全所临床上有一种对人体危害极为严重的疾病叫高脂血症，就是血液中脂肪含量过高导致的。
所谓高脂血症是指血液中的总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）和甘油三酯（TG）等水平增高。
这些都是血液中的脂肪，高血脂是导致动脉粥样硬化和冠心病以及II型糖尿病、肾功能障碍等许多疾病的重要危险因素。
美国食品和药物管理局（FDA）在90年代就把大豆列为真正降低罹患心脏病危险的少数食品之一，并且建议每天饮食中至少含有25g大豆蛋白质以降低胆固醇。
大豆肽不仅具有这样的功能，而且效果更佳。
2000年日本已批准大豆多功能肽作为降低胆固醇的特定保健食品。
科学研究表明：大豆多肽能阻碍肠道内胆固醇的再吸收，并能促使其排出体外。
此外，大豆肽降低血清胆固醇还有以下特殊的优点：（l）对于胆固醇值正常的人，没有降低胆固醇作用；（2）对于胆固醇值高的人具有降低总胆固醇值的功效；（3）胆固醇值正常的人，在食用高胆固醇含量的蛋、肉、动物内脏等食品时，也有防止血清胆固醇值升向的作用；（4）使胆固醇中有害的低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）值降低，但不会使有益的高密度脂蛋白（HDL）值降低。
受中食都庆（菏泽）生物技术有限公司委托，对其生产的康而肽血康片进行检验，检测其调节血脂的功能。
实验动物是50只二级Wistar雄性大鼠，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，体重范围在180～200克。
高脂饲料由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供的基础饲料加胆固醇、猪油、胆盐配制而成。
其中基础饲料93.3％，胆固醇1.5％，猪油5％，胆盐0.2％。
剂量组选择与受试物给予方式：人体每日推荐摄入量为每日3次，每次5片，0.50 g/片，即0.125 g/KgBW(公斤体重)，以此为5、10、20倍设低、中、高三个剂量，以灌胃方式给予受试物。
观察周期30天。
实验用的主要仪器包括体重秤、自动生化测试仪（Vital Scientific N.V. SELECTRA-E）。
混合菌固态发酵豆粕制备大豆活性肽
混合菌固态发酵豆粕制备大豆活性肽李慧娟;孙云鹏;丁鹏程;丁瑞;吴光坤;李泉【摘要】以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis J3)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum JNX)为发酵菌株,以发酵产物中小肽含量和挥发性盐基氮含量为检测参数,优化了混合菌固态发酵豆粕以制备大豆肽的生产工艺参数,并对发酵产生的大豆肽的性质进行了初步研究.确定的固体发酵工艺为:植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌菌种比例为2∶1、料水比1∶0.6、接种量6％、30℃发酵24 h,该条件下发酵产物中小肽含量最高为10.64％,挥发性盐基氮含量最低为50.70 mg/100 g.SDS-PAGE电泳结果表明,发酵后豆粕提取液中的蛋白类产物的分子质量均为10kDa以下,其抗氧化活性最高可达65.76％.氨基酸组成成分分析表明,混合菌固态发酵豆粕后的提取液中甲硫氨酸、亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸和异亮氨酸等必需氨基酸的含量提高了5倍以上.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)011【总页数】6页(P121-126)【关键词】枯草芽孢杆菌;植物乳杆菌;固态发酵;大豆活性肽;抗氧化【作者】李慧娟;孙云鹏;丁鹏程;丁瑞;吴光坤;李泉【作者单位】山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590;山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590;山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590;山东大学生命科学学院,山东济南,250100;山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590;山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590;山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛,266590【正文语种】中文豆粕是大豆榨油后的副产物，其蛋白质含量高达40%～50%，是目前畜牧养殖业中常用的饲料。
但因豆粕中含有胰蛋白酶抑制剂、大豆凝集素、大豆抗原蛋白(致敏因子)等多种抗营养因子，对动物的生长发育和健康造成不良影响［1］。
大豆肽的制备实验报告doc
大豆肽的制备实验报告篇一：高中生物常规实验的总结篇二：大豆豆粕及其多肽制备工艺大豆豆粕及其多肽制备工艺摘要阐述了大豆多肽的应用、发酵法制备大豆豆粕的特性，介绍豆粕蛋白直接发酵制备大豆多肽的方法，以供参考。
关键词大豆；豆粕；多肽；发酵法大豆在提取豆油后可得到豆粕，豆粕是生产牲畜和家禽饲料的主要原料，或用于制作食品、化妆品、抗菌素。
豆粕的价格变化很大，相关的产业链长，影响的范围也很广。
美国和日本都在大豆豆粕的理论研究上有所突破。
美国为了研究水解蛋白，成立了专门的研究机构和使用蛋白肽的工厂；日本在水解产物的去苦和水解工艺上有所进展。
20世纪60年代，我国对大豆豆粕进行了研究，大豆豆粕作为新兴产业具有非常大的市场潜力。
大豆豆粕很有可能成为我国绿色饲料的添加剂，从而代替饲料中的抗生素药物[1]。
从大豆豆粕中提取的大豆多肽具有广泛的用途。
1大豆多肽的应用1.1营养疗效食品大豆多肽在食用时易于吸收，适合于病人(转自：小草范文网:大豆肽的制备实验报告)在大病初愈之后服用，有利于吸收和增强体质。
为了符合老人的饮食习惯和心理，用大豆多肽作基础再加上全脂奶粉和蜂蜜，就能做出适合老年人饮食用的奶粉[2-3]。
1.2普通食品大豆多肽具有良好的吸湿和保湿功能，水溶性高，可改善豆类制品口感和风味，用延长糕点保质期，在酸性环境中具有发泡效果，可生产酸性饮料等[4-5]。
1.3运动员食品恰当的活动影响和充沛的卵白质增补可增加运动员的肌肉量，从而可以提高运动员体内的能量。
在此阶段里，供应消化吸收性优越的多肽作肌肉卵白质的原料会对运动员有一定的帮助。
大豆多肽易于在活动中被吸收，延缓心理的压力，增强活力，有利于运动员补充体力[6]。
2发酵法制备大豆豆粕的特性2.1理化特性，具有良好的溶解性，它篇三：大豆肽制备及其营养功能研究进展大豆肽的制备及其营养功能研究进展Advancement of preparation of soybean peptide and its nutritional function摘要：大豆肽是大豆蛋白水解后，由3～6个氨基酸残基组成的低肽混合物，分子量在1000 U以下。
豆粕中的抗营养因子和作用机制及加工处理方法
糖 苷 。致 甲状 腺肿物 主要影 响动物 甲状 腺形态 ， 是导
致 甲状腺肿大 的主要 物质 。 大豆 中同时存在硫代 葡萄
当大 豆经粉碎 浸泡等方式 处 罗敏 ， 重庆市畜牧科 学院， 畜牧 师 ，０ ４ ０ 重庆 市荣昌县 糖苷 和硫代葡 萄糖苷 酶 ， ４２６ ，
昌州中段 ７ ０号重庆 市畜牧科学院孵化楼 ５ 一 。 ７ Ｆ ３
括胰蛋 白酶抑制剂 以及大豆抗 原蛋 白等 ） 限制 了其在 的研究 表 明 ， 该抑 制 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ子也 耐 酸和碱 ， 关 于其对 热 而
幼龄动物 （ 断奶仔猪 、 犊牛 ） 和水生动物 上 的应 用 。随 的敏感 性研究存 在差异 。可 以肯定 的是相对于 Ｋ ｎ ｚ ｕ ｉ ｔ 着科学技术 和加工工 艺 的发展 ， 近年新 出现一种 去皮 抑制剂 ， 耐热性 能更 强 。Ｋ ｏｄ ｈ（ ８）指 出 ， 人 ｒｇａｌ ９ １２ １ ［ １ 人食
维生 素 因子 （ 脂肪 氧化 酶 ）非淀 粉多糖 （ Ｓ ）皂 甙 、 最 初 是 由 Ｌｅ ｅ 和 Ｐｌ ｎｃ 离 的 ，后 来 Ｃ ｔｍ 、 ＮＰ、 ｉ ｒ ｎ ａ ａ ｓｈ分 ｌ ａｓ — ｉ 低聚糖 、 酸等 。最主要 的是胰 蛋 白酶抑制 剂 （ Ｉ和 ｐ ｏ ｓ Ｍｅｅ 等用 等 电点 聚焦 法明确 ，大豆血球 凝 植 Ｔ） ｏｌ 和 ａ ｙｒ
膨 化 的豆粕 ， 豆粕进行 去 皮膨化 加 工 ， 对 降低 和减 少 大 豆后 ， 胃液 中 Ｋ Ｉ 在 Ｔ 即被 失活 ， Ｂ Ｉ 能保 持 其 而 Ｂ却 抗 营养 因子 的水平 ， 高其营 养价值 ， 膨化 、 提 如 去皮 等 活力 。 于 Ｋ Ｉ Ｂ Ｉ 热敏感性 的不 同以及对 胃蛋 关 Ｔ 和 Ｂ对
罗敏 等 ： 豆粕中的抗营养 因子和作 用机制及加工处理方 法
豆粕发酵制备大豆肽的研究
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂｙ Ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ ｗｉｔｈ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｃａｋｅ
ＷＡＮＧ Ｗｅｎ－ ｊｕａｎ１， ＰＡＮ Ｈａｉ－ ｔａｏ２， ＹＵ Ｌｅｉ－ ｊｕａｎ１ （ １．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ， Ｊｉｎａｎ ２５０３５３ ； ２．Ｇｕａｎｌｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｒａｄｅ Ｃｏ． ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｇｒａｉｎ ＆ Ｏｉｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ， Ｊｉｎａｎ ２５００１３） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｏ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ３ ～６ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ．Ｉｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｉｓ ａｂｏｕｔ １ ０００ Ｄａ ．Ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｓｏｙｂｅａｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｃａｎ ｄｅｃｏｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎｅ ｓｏｍｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ ｐｅｐｔｉｄｅｓ， ｓｏ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｃｈａｎｇｅｄ ａｎｄ ｒｅｓｅｔｔｅｄ， ａｎｄ ｗｅ ｃａｎ ｇｅｔ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ． Ｉｔ ｃｏｎｑｕｅｒｓ ｓｏｍｅ ｄｅｆｅｃｔｓ ， ｓｕｃｈ ａｓ ｌａｒｇｅ ｂｉｔｔｅｒｎｅｓｓ ａｎｄ ｂａｄ ｔａｓｔｅ． Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄｓ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ； ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ； ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ
膨化豆粕制备大豆多肽生产工艺的研究_李秀娟
８４ ２００８ 年第 １０ 期
【关键词】棒状薄层色谱扫描仪； 脂类； 应用
中图分类号： ＴＳ ２２１ 文献标识码： Ａ 文章编号： １６７３－ ７１９９ （２００８） １０－ ００８４－ ０３
棒状薄层色谱扫描仪是将薄层色谱分离 （ ＴＬＣ） 技 术与氢火焰离子检测器 （ ＦＩＤ） 技术结合起来的一种组 成分析仪器。ＴＬＣ ／ＦＩＤ 技术源于 １９７６ 年英国的 Ｐａｄｌｅｙ 发明的棒状薄层色谱氢火焰扫描法， 随后日本的雅特 隆公司生产了 ＴＨ－ １０ 型棒状薄层色谱扫描仪。它 取代 了传统的吸附柱色谱法， 使组成分析实现了微量化、 快速化、仪器化。它用表面涂有硅胶的石英棒代替了 长的玻璃吸附柱进行分离， 用氢火焰离子化检测器代 替了高效液相色谱 （ ＨＰＬＣ） 的紫外、示差折光检测器 进行检测， 既克 服了气相色谱 （ ＧＣ） 不能分离 难 挥 发 组分的缺点， 又解决了高效液相色谱 （ ＨＰＬＣ） 定量困
难的问题。 棒状薄层色谱扫描仪是分析食物中脂类成分的有
力工具， 是一种快速、准确、简便、试样用量少的好 方法。脂类分析常采用薄层色谱法 （ ＴＬＣ） 或高效液相 色谱 （ ＨＰＬＣ） 法， 前者无法定量， 后者费时 ， 试验过 程复杂。
棒状薄层色谱扫描仪 （ Ｉａｔｒｏｓｃａｎ ＴＬＣ ／ＦＩＤ） 是一种 自动检测器， 可对已在薄层色谱 （ ＴＬＣ） 上分离并由氢 火焰离子系统 （ ＦＩＤ） 检测到的各种已知化合物进行定 量分析。在国外它已被广泛用于食品科学和营养学中 脂类成分的分离、定性和定量。ＩＡＴＲＯＳＣＡＮ 分析食物
大豆豆粕及其多肽制备工艺
大豆豆粕及其多肽制备工艺大豆在提取豆油后可得到豆粕，豆粕是生产牲畜和家禽饲料的主要原料，或用于制作食品、化妆品、抗菌素。
豆粕的价格变化很大，相关的产业链长，影响的范围也很广。
美国和日本都在大豆豆粕的理论研究上有所突破。
美国为了研究水解蛋白，成立了专门的研究机构和使用蛋白肽的工厂；日本在水解产物的去苦和水解工艺上有所进展。
20世纪60年代，我国对大豆豆粕进行了研究，大豆豆粕作为新兴产业具有非常大的市场潜力。
大豆豆粕很有可能成为我国绿色饲料的添加剂，从而代替饲料中的抗生素药物[1] 。
从大豆豆粕中提取的大豆多肽具有广泛的用途。
1大豆多肽的应用1.1 营养疗效食品大豆多肽在食用时易于吸收，适合于病人在大病初愈之后服用，有利于吸收和增强体质。
为了符合老人的饮食习惯和心理，用大豆多肽作基础再加上全脂奶粉和蜂蜜，就能做出适合老年人饮食用的奶粉[2-3] 。
1.2普通食品大豆多肽具有良好的吸湿和保湿功能，水溶性高，可改善豆类制品口感和风味，用延长糕点保质期，在酸性环境中具有发泡效果，可生产酸性饮料等[4-5]1.3 运动员食品恰当的活动影响和充沛的卵白质增补可增加运动员的肌肉量，从而可以提高运动员体内的能量。
在此阶段里，供应消化吸收性优越的多肽作肌肉卵白质的原料会对运动员有一定的帮助。
大豆多肽易于在活动中被吸收，延缓心理的压力，增强活力，有利于运动员补充体力[6] 。
2发酵法制备大豆豆粕的特性2.1理化特性2.1.1溶解性高。
大豆豆粕和一般的大豆蛋白相比，具有良好的溶解性，它在分离的时候不会减弱蛋白质的营养价值，正是这个原因使其在食品和饮料的制作中得到了广泛的应用。
大豆蛋白一旦加热就会凝胶，易改变特性，影响蛋白的品质，相比之下大豆豆粕就不受其影响[7-8] 。
例如大豆豆粕在加热的条件下应用在食品和饮料工业上时，作为蛋白质补充剂的时候比较稳定，防止肌蛋白硬化和保持肉制品鲜嫩可口的口感。
2.1.2渗透压低。
大豆豆粕比氨基酸的渗透压低很多，可促进人体内营养素的吸收。
大豆肽的制备及其营养功能研究进展
ａｍ ｓｈｒｓＪ． Ｓ Ｓａｔ ｏｔ ｕｔｒｅ Ｐｓ ａｖ ｓ ｐ ｙｉｌｇ ｆ ｔｏｐ ｅｅ［］ ＩＨ ｃａｈｒ ｃｌ ａ ： ｏｔ ｒｅｔ ｈｓ ｏ ｏ ｉ ｕ ｈ ｏｙ
ｆ ｉ ，１ ９ ， ９ ： ９— ０ ｕ ｓ ｒ ｔ ９５３８５ ７
ｍ ｓｒｏ 【 ＿ｎｅｎｔ ｎｌｏ ｒａ ｏ ｏ ｃ ｎｅａ ｄｔ ｈ ｏ ｇ， ｕｈｏｍ Ｊ Ｉｔｒａ ｏａ ｊｕ ｌ ｆｏｄｓｉ ｃ ｎ ｅ ｎｌｙ Ｊ ｉ ｕ ｆ ｅ ｃ ｏ ２ １ ，５６ ：０ ７ １ ０ ０ ０ ４ （）１９ － ３ １
摘 要： 大豆肽是 大豆蛋 白水解后 ， ～ 个氨基酸残基 组成的低肽混合物 ， 由３６ 分子量在 １ ０ 以下 。 了提 高大豆蛋 白 ０ｕ ０ 为
资源的利用率， 降低 大豆 肽 的 成 本 ， 述 了以 豆粕 为 原 料 制 备 大 豆肽 的２ 方法 ， 酵法 和 酶 解 法 。 综 种 发 同时也 阐 述 了其 功
压、 促进矿物质吸收和脂肪代谢 。 大豆肽克服 了大豆蛋
作者简介： 王龙（９ ９ ， 汉） １８ 一） 女（ ， 本科， 主要研究方向： 生物技术 。 通信作者
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白质在 营养学上 的弱点 ，具有 比大豆蛋 白质更 丰富的
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【】 １ 谢雯君 ， ４ 林启训， 王则金 ， 双孢蘑菇涂膜 保鲜技术研 究【 ． 等． Ｊ 中 Ｊ 国农学通报， ０ ５ ２ （ ） ２ ７ ２ ０ ， １１ ： — ６ ０７
【５ ｅｕｉ Ａ ｒｎ ， ａｒｉ Ｍ． ｆ ｃ ｏ ｏｅｒｔ ｏ ａ ａ １】Ｂ ａ ｌｕＭ， ｐａｏＧ Ｄ Ｌ ｃｏｘ Ｅｆ ｔ ｆ ｓ ａ ｆ ｍｍ ｅ ｅ ｄ ｅ ｇ
混菌发酵豆粕制备大豆肽的研究的开题报告
混菌发酵豆粕制备大豆肽的研究的开题报告一、论文选题的背景和意义随着人们生活水平的提高和健康意识的增强，高质量蛋白质的需求量逐渐增加。
而作为蛋白质的主要来源之一的豆类产品中，大豆蛋白质含量较高，具有营养丰富、易消化吸收等优点，深受消费者喜爱。
但是，大豆蛋白质中含有一定量的抗营养因子和致敏物质等，对人体健康有一定的影响。
同时，传统的方法处理大豆蛋白质，如酶解、水解等，也存在一定的缺陷，如操作复杂、成本高等。
因此，通过混菌发酵技术制备大豆肽，具有简单、成本低、制品稳定性高等优点，能够满足人们对高质量蛋白质的需求，并提高豆类产品的附加值。
二、研究现状近年来，混菌发酵技术在大豆肽的制备中得到广泛应用。
混菌发酵技术是利用多种菌种协同作用，对大豆蛋白进行降解与转化，产生富含氨基酸的大豆肽，具有易吸收、生物利用率高的优点。
在混菌发酵过程中，主要包括两类菌种：一类是产生蛋白酶和多肽酶的菌种，如枯草芽孢杆菌、芽孢杆菌等；另一类是能够进行蛋白质转化和氨基酸合成的乳酸菌，如乳酸杆菌等。
目前，在混菌发酵豆粕制备大豆肽的研究中，主要有以下几个方面的研究：一是混菌发酵菌种的筛选与配比研究；二是发酵条件的优化及发酵过程中大豆蛋白质降解和大豆肽生成的动态分析；三是对大豆肽产物的分离纯化和理化性质分析；四是对大豆肽营养价值的评价和应用研究。
目前，已有不少文献报道了在混菌发酵豆粕制备大豆肽方面取得的初步成果。
但是，由于发酵条件的复杂性、菌种的多样性等因素的影响，混菌发酵豆粕制备大豆肽的研究仍需进一步深入。
三、论文研究的内容本文拟采用混菌发酵技术，以豆粕为原料，制备高品质、高营养价值的大豆肽。
具体研究内容包括：1. 对大豆肽混菌发酵过程中的主要菌种进行筛选，探究不同种类和比例的菌种对混菌发酵质量的影响，并进行最优配比的确定。
2. 优化大豆肽的发酵条件，包括温度、菌种数量、发酵时间等参数，确保大豆蛋白质的充分降解和大豆肽的高产。
3. 通过高效液相色谱法等方法，对大豆肽产物进行分离纯化，并对其理化性质进行分析。
一种高品质豆粕蛋白肽的制备方法[发明专利]
![一种高品质豆粕蛋白肽的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3d51759e31b765ce04081422.png)
专利名称：一种高品质豆粕蛋白肽的制备方法专利类型：发明专利
发明人：陈石良
申请号：CN201611168419.3
申请日：20161216
公开号：CN106578421A
公开日：
20170426
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种高品质豆粕蛋白肽的制备方法，主要步骤包括豆粕粉碎、豆粕混合液配制、磨浆、酶解、压滤、超滤、喷雾干燥得豆粕蛋白肽。
本发明的方法以价格低廉、来源广泛的豆粕为原料，采用分段酶解法将豆粕蛋白水解成最理想的小分子肽，并结合超滤膜分离技术和喷雾干燥加工技术，工艺流程简单，生产效率高，成本低，适合规模化的工业生产。
本发明所制备的产品蛋白含量高，活性小分子肽（相对分子量介于180～1000Da之间）含量高，能显著促进断奶仔猪生长，增强仔猪免疫力和抗病能力，是一种高品质的功能性蛋白饲料原料。
申请人：陈石良
地址：432600 湖北省孝感市安陆市经济开发区宝迪路1号宝迪工业园4栋206室
国籍：CN
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豆粕血管紧张素转化酶抑制肽的结构鉴定及作用机制解析
豆粕血管紧张素转化酶抑制肽的结构鉴定及作用机制解析刘静波，王子秦，于一丁，张婷，刘博群*（吉林大学食品科学与工程学院，吉林省营养与功能重点实验室，吉林长春130062）摘 要：以大豆粕为原材料，利用超声辅助酶解技术、超滤-ÄKTA层析相结合的方法分离纯化获取豆粕酶解产物中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）抑制肽，对其分子质量分布进行研究，后通过质谱分析与分子对接技术鉴定并筛选出ACE抑制活性肽的氨基酸序列，经固相合成肽序列，检测其ACE抑制肽的活性并基于分子对接技术探索其抑制机制。
结果表明：经超声辅助酶解提取获得的豆粕肽分子质量主要分布在6 000 Da以下；根据分子对接的最低预测自由能筛选出的GVRP（－8.44 kcal/mol）和IIVTP（－9.04 kcal/mol）可以抑制ACE 活性，半抑制浓度（50% inhibitory concentration，IC50）分别为（84±0.06）、（77±0.08）μmol/L；分子对接结果表明：GVRP、IIVTP能够与ACE的活性口袋S1、S1′、S2形成氢键相互作用，共有的过近接触（3.5 Å范围内）ACE氨基酸残基为His513、Ala354和Glu384。
本研究基于串联质谱与分子对接技术，建立从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽的方法，探究活性多肽与ACE稳定结合并体现其ACE活性的抑制机制，为后续的深入研究提供一定参考。
关键词：大豆粕；血管紧张素转化酶抑制肽；分离纯化；分子对接；活性口袋Identification and Mechanism Analysis of Angiotensin-I Converting Enzyme Inhibitory Peptides from Soybean MealLIU Jingbo, WANG Ziqin, YU Yiding, ZHANG Ting, LIU Boqun*(Jilin Provincial Key Laboratory of Nutrition and Functional Food, College of Food Science and Engineering,Jilin University, Changchun 130062, China)Abstract: In this study,ultrasonic-assisted enzymatic hydrolysis, ultrafiltration and ÄKTA chromatography were sequentially used to separate and purify angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides from an enzymatic hydrolysate of soybean meal, and the molecular mass distribution of peptides was investigated.Then, the amino acid sequence of the ACE inhibitory peptides was identified by mass spectrometry (MS) and molecular docking. A consensus peptide sequence was synthesized by a solid-phase method to determine its ACE inhibitory activity and explore its underlying mechanism by molecular docking. The results showed that after ultrafiltration, the molecular mass distribution of peptides in the hydrolysate was mainly under 6 000 Da. The peptides GVRP and IIVTP, selected for their lowest free energy (–8.44 and –9.04 kcal/mol correspongdingly) predicted by molecular docking, could inhibit ACE activity, with half-maximum inhibitory concentration (IC50) values of (84 ± 0.06) and (77 ± 0.08) μmol/L, respectively. The molecular docking results revealed that GVRP and IIVTP could form hydrogen bonds with the S1, S1′ and S2 pockets of ACE. The shared amino acid residues in close contacts (within 3.5 Å) with ACE were His513, Ala354 and Glu384. Based on the LC-MS/MS and the molecular docking technology, a method to rapidly identify and select active ACE inhibitory peptides from peptides mixture was established. The stable binding of active peptides to ACE and the inhibitory mechanism of its ACE activity were also reflected in this study. The finding of this study may provide further references for studies on ACE inhibitory peptides.Keywords: soybean meal; angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides; isolation and purification; molecular docking;active site pocketsDOI:10.7506/spkx1002-6630-20200416-212中图分类号：TS209 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）12-0123-07收稿日期：2020-04-16基金项目：吉林省科技发展计划科技攻关计划项目（20170204021NY）第一作者简介：刘静波（1962—）（ORCID: 0000-0002-1419-0808），女，教授，博士，研究方向为营养与功能食品。
大豆粕碱性蛋白酶水解肽及ACE抑制活性的研究
大豆粕碱性蛋白酶水解肽及ACE抑制活性的研究研究背景高血压和心脑血管疾病一直是世界范围内健康问题的重要因素。
血管紧张素转换酶（ACE）是影响血压水平的主要因素之一。
针对ACE的抑制活性是目前治疗高血压和一些心血管疾病的重要途径。
天然产物中具有ACE抑制剂活性的化合物正受到越来越多的关注。
大豆粕中含有碱性蛋白酶，它是一种重要的天然来源，其中富含ACE抑制剂活性的产物。
因此，对于大豆粕中碱性蛋白酶水解肽及其ACE 抑制活性的研究具有一定的重要意义。
研究目的本研究的目的是探究大豆粕中碱性蛋白酶水解肽及其ACE抑制活性的研究，包括对大豆粕进行碱性蛋白酶水解，并测试其对ACE的抑制能力。
通过本研究，为大豆及其水解产物的开发和利用提供重要的实验依据。
材料与方法材料大豆粕、碱性蛋白酶、ACE（来自羊肺）方法1.大豆粕水解将大豆粕与碱性蛋白酶按照一定比例混合，并在一定的时间和温度条件下进行反应。
2.ACE抑制活性测试采用荧光素二乙酰三胺（FAPGG）为底物，羊肺ACE作为酶，分别添加一定量的水解产物和ACE，根据反应体系的荧光强度的变化来计算ACE的抑制活性。
结果与分析大豆粕水解大豆粕中的碱性蛋白酶水解产物的组成、分子量及其机理的分析结果见表1。
水解产物分子量氨基酸组成机理P1 10 kDa Arg-Gln、Gln-Gln、Gln-Arg ACE抑制P2 7 kDa Lys-Tyr、Gly-Gln 不明确P3 5 kDa Trp-Tyr、Lys-Tyr、Tyr-Pro ACE抑制ACE抑制活性测试在本实验条件下，大豆粕水解产物具有一定的ACE抑制活性。
其中water extract（WE）对ACE抑制率最高，达到48.12%±0.28%。
随着反应时间的延长，水解产物的抑制率也有所提高。
在反应72小时后，WE的抑制率可达56.29%。
结论本研究证明大豆粕中的碱性蛋白酶水解产物具有一定的ACE抑制活性。
其中water extract对ACE抑制率最高。
工业制备大豆肽的原理
工业制备大豆肽的原理大豆肽是一种来源于大豆中的蛋白质水解产物，是由多肽链组成的复合物质。
大豆肽具有多种生物活性，如抗菌、抗癌、抗氧化等。
工业制备大豆肽的原理主要包括以下几个步骤：大豆破碎、蛋白质提取、酶解、分离纯化以及干燥等。
首先，工业制备大豆肽的第一步是将大豆进行破碎。
大豆的破碎可以利用高压均质机、球磨机等设备进行，目的是将大豆内部的蛋白质释放出来，便于后续的提取工作。
第二步是大豆蛋白质的提取。
提取大豆蛋白质可以采用液态提取或干态提取两种方式。
液态提取是将破碎后的大豆浆与稀酸或稀碱进行反应，使蛋白质溶解出来。
干态提取是将大豆粉末与有溶剂的稀酸或稀碱进行浸提，随后过滤得到蛋白质提取液。
提取液中含有大豆蛋白质、脂肪、纤维等杂质。
第三步是蛋白质的酶解。
蛋白质的酶解是利用蛋白酶将蛋白质链酶解成较小的片段，生成大豆肽。
常用的酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶等。
酶解的条件包括酶解时间、温度、酶解酶剂、酶解液的酸碱度等。
通过酶解，蛋白质链中的肽键被酶水解断裂，生成不同长度的大豆肽链。
第四步是大豆肽的分离纯化。
在酶解后，需要对酶解产物进行分离纯化，以得到目标大豆肽。
常用的分离纯化方法包括超滤、酸沉淀、盐析、凝胶过滤等。
超滤是将酶解液通过滤膜，根据分子量的不同将大分子蛋白质等杂质分离出去，得到目标大豆肽。
酸沉淀是利用酸将大豆肽沉淀出来，随后通过离心、洗涤等步骤得到纯化的大豆肽。
盐析则是利用盐浓度变化将目标蛋白质或肽沉淀出来。
最后一步是大豆肽的干燥。
纯化得到的大豆肽需要进行干燥，以保持其稳定性和保存性。
常见的干燥方法包括喷雾干燥、真空干燥等。
干燥后的大豆肽可以作为功能性食品添加剂、保健品原料等进行应用。
总结起来，工业制备大豆肽的原理包括大豆破碎、蛋白质提取、酶解、分离纯化以及干燥等步骤。
这一过程旨在将大豆中的蛋白质释放出来，并利用酶解和分离纯化技术得到目标大豆肽，以应用于食品、医药等领域。
高产多肽发酵豆粕的制备工艺研究
高产多肽发酵豆粕的制备工艺研究摘要通过菌种、接种量选择和发酵条件优化，研究了高产多肽发酵豆粕的制备工艺，得出一套最佳发酵工艺参数。
各菌种的最佳接种量为：枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）X2、X3、X4均接种0.6%，啤酒酵母（Saccharomyces crevisiae）Y和乳酸杆菌（Lactobacillus）Z均接种1%；最佳发酵基本条件为：豆粕粒度40目、发酵起始温度40℃、料水比1∶1、初始pH值为7、糖蜜添加1%、物料厚3.5cm、发酵时间48h。
关键词豆粕；发酵；制备工艺；多肽随着畜牧业的迅速发展，蛋白质需求量越来越大，但由于食品安全性问题，鱼粉等动物性蛋白质源的使用逐渐受到限制，因此，找到优质植物性蛋白质源已成为全世界科技研发的重点。
豆粕是我国乃至全世界应用最为广泛的植物性饲料蛋白质原料，但随着科技的进步和研究的深入，人们发现80%左右的大豆蛋白质相对分子质量都在100kDa以上，且大多数分子内部呈反平行β-helix非有序结构，分子高度压缩、折叠，使得豆粕蛋白质的消化性和生物学功能远不及鱼粉等动物性蛋白质饲料。
此外，豆粕中存在多种抗营养因子，对动物有毒害作用，严重影响了豆粕在动物生产上的应用价值等[1，2]。
目前，大量研究表明，微生物发酵可以消除豆粕中的各种抗营养因子[3，4]，大豆蛋白质多肽也具有优良的营养生理特性[5，6]。
因此，本研究拟采用多菌种混合固体发酵技术，制备高产多肽发酵豆粕，为解决我国畜牧业发展中优质蛋白质资源紧缺的问题提供一定的理论依据和技术支持。
1 材料与方法1.1发酵原料试验所用的去皮豆粕购于东莞中谷油脂有限公司。
1.2菌种试验初始选择的菌种有：4株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）（X1、X2、X3、X4，其中X4为航空诱变菌株）、啤酒酵母（Saccharomyces crevisiae）（Y）和乳酸杆菌（Lactobacillus）（Z），均为广东省农科院农业生物技术研究所保藏菌种。
大豆肽制备及其营养功能研究进展
大豆肽的制备及其营养功能研究进展Advancement of preparation of soybean peptide and its nutritional function摘要：大豆肽是大豆蛋白水解后，由3～6个氨基酸残基组成的低肽混合物，分子量在1000 U 以下。
为了提高大豆蛋白资源的利用率，降低大豆肽的成本，本文综述了以豆粕为原料制备大豆肽的两种方法，发酵法和酶解法。
同时也阐述了其功能特性及其在食品工业的应用。
由于它具有很多优良的理化特性和生理活性，具有极高的利用价值和广阔的发展前景。
关键词：大豆肽豆粕营养功能制备Abstract: Soybean peptides are a mixture of many small peptides which have 3 to 6 amino acids and molecular weight is below of 1000 U. In order to improve the utilization rate of soybean protein and reduce the cost of soybean peptide, the two methods, fermentation and enzymatic method of soybean peptides being made from soybean meal were reviewed in this paper. Also, the function characteristics and the application in the food industry of soybean peptides were described. Soybean peptides have high utilization value and broad prospects because of its excellent physical-chemical properties and biological activity.Key words: soybean peptides soybean meal nutritional function preparation大豆肽就是由大豆蛋白经水解所得到的由3～6个氨基酸组成的低分子量肽。
以高温(或低温)豆粕为原料
以高温（或低温）豆粕为原料，在一条生产线上连续生产高纯度异黄酮、高纯度低聚肽等新技术一、发明内容本项目属于自主创新、大豆（花生、玉米胚）油脂加工行业共性高技术。
共包括发明专利4项：1、“酶解大豆蛋白”于2002年1月获美国发明专利授权，专利号：US6.335，043B1。
2、“以高、低温豆粕（花生粕、玉米胚粕）为原料连续提取异黄酮、短肽、皂苷、核酸、低聚糖、浓缩蛋白的生产方法”于2003年4月获中国发明专利授权，专利号：ZL01128012.3。
3、“高低温豆粕（花生粕、玉米胚粕）为原料，提取大豆复合功效因子的方法”于2004年10月获中国发明专利授权，专利号：ZL03110825.3。
4、“用于面制食品添加的大豆（花生粕、玉米胚粕）蛋白粉”于2003年7月获中国发明专利授权，专利号：ZL99113106.1。
上述项目于2003年被国家科技部评为优秀火炬计划项目。
“十·五”计划以来，上述项目已分别被国家科技部批准为《国家科技成果重点推广计划》项目。
二、自主创新发明专利，是面向我国大豆（花生、玉米粕）油脂加工全行业“扭亏为赢”的共性高技术。
“中国是大豆的故乡”，在营养匮乏的旧中国，是大豆养育了中华民族。
但是近年来，我国的大豆产业从种植到加工全面退步，我国大豆加工的最大行业——浸油业，年加工大豆约3000万吨，是我国大豆总产量的2倍。
我国已经由大豆最大出口国退化成为最大的进口国。
2004年1—6月份，我国油脂加工业亏损额达50亿元，80%以上的企业倒闭，至2006年，大中型油脂加工业每加工1吨大豆利润不超200元。
2005年以后，由于禽流感的发生，饲料滞销，豆粕售价一直在2300元/吨左右徘徊。
面对我国大众蛋白营养与其他营养的重要来源——大豆产业日渐衰退的现实，如何创新发明具有大豆加工行业共性需求的、高附加值的发明专利技术已是当前不可回避的严峻任务。
大豆加工是拉动大豆产业的龙头，我国大豆加工业最大的行业是浸油业。
豆粕抗营养因子及酶解豆粕制备肽的研究进展
豆粕抗营养因子及酶解豆粕制备肽的研究进展赵满琦;陈星;陈志敏;刘国华;郑爱娟【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2024(51)5【摘要】豆粕作为大豆提取豆油过程中产生的副产品,因其蛋白质含量高、氨基酸均衡和营养元素全面而成为中国主要的植物蛋白质饲料原料之一。
然而,豆粕中存在的抗营养因子(如胰蛋白酶抑制剂、脲酶、大豆球蛋白和非淀粉多糖等)会严重阻碍动物对豆粕营养物质的消化吸收。
豆粕肽作为豆粕蛋白质不完全水解的产物,具有转运速度快、载体不易饱和、耗能低、避免氨基酸相互竞争以及多种生物学活性的特点。
因此提高豆粕中肽的含量可以显著提高豆粕的营养价值。
目前以豆粕为原料制备肽的主要方式有化学法、微生物发酵法以及酶解法,相较于前两种制备方法,酶解法对于豆粕中抗营养因子的去除,以及提高豆粕中肽的含量具有更强的特异性。
作者概括了豆粕的营养特点以及影响其营养价值的主要因素,并分析了豆粕中抗营养因子的作用机理。
此外,还对化学法以及微生物发酵法制备肽的优缺点进行了讨论,总结了酶解豆粕制备肽的优势和实际应用效果,并对存在的问题进行了分析。
为酶解法消除豆粕抗营养因子和制备肽提供了参考依据。
【总页数】8页(P1931-1938)【作者】赵满琦;陈星;陈志敏;刘国华;郑爱娟【作者单位】中国农业科学院饲料研究所【正文语种】中文【中图分类】S816【相关文献】1.乳酸菌固态发酵酶解对豆粕、棉籽粕和菜籽粕粗蛋白质、pH、酸度及抗营养因子含量的影响2.豆粕与发酵豆粕中主要营养成分、抗营养因子及体外消化率的比较分析3.内外切蛋白酶连续酶解制备豆粕鲜味肽的研究4.酶制剂体外酶解豆粕中抗营养因子的研究5.酶解豆粕制备鲜味肽外切酶筛选与工艺优化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
豆粕功能肽制备及其降血脂作用
豆粕功能肽制备及其降血脂作用王金玲;江连洲;许晶【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2012(033)024【摘要】以来源丰富、价廉的高变性豆粕为原料制备大豆功能性多肽，并对多肽的降血脂作用进行研究。
通过单因素及正交试验法确定Alcalase碱性蛋白酶水解高变性豆粕的最佳工艺条件。
采用小鼠高脂模型试验，通过小鼠体质量以及各项血脂指标的变化，评价酶解大豆多肽的降血脂功能。
结果表明：Alcalase碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为底物质量浓度5g/100mL、酶添加量14400U/g、pH9.0、酶解温度55℃、酶解时间4h，此条件下，豆粕蛋白的水解度为37.5%；酶解大豆多肽对高脂小鼠具有一定的降血脂作用，主要表现为显著降低小鼠的血清TC值及提高小鼠的血清HDL-C值(P＜0.05)作用。
【总页数】4页(P52-55)【作者】王金玲;江连洲;许晶【作者单位】东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030; 黑龙江职业学院，黑龙江双城 150111;东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030; 国家大豆工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.菌酶融合工艺制作高肽发酵豆粕的研究及高肽发酵豆粕在保育料中替代鱼粉的应用 [J], 王晓明; 毛悦; 唐香山; 邓敦; 舒剑成; 罗杰; 李慧2.豆粕固态发酵及酶解制备小分子肽的研究 [J], 闫凯;周玉岩;陈子龙;冯蓓;吴先纯3.内外切蛋白酶连续酶解制备豆粕鲜味肽的研究 [J], 范海茹;李淑英;许斌;高雅鑫;张蒙冉;王凤忠4.豆粕源抗氧化肽的制备、鉴定与活性表征 [J], 潘风光;蔡转章;伍海波;刘静波;刘博群;张婷5.响应面法优化豆粕肽制备工艺 [J], 刘静波;王子秦;于一丁;张婷;刘博群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
发酵豆粕制造工艺介绍
发酵豆粕制造工艺介绍A、发酵豆粕又名生物肽，生物豆粕，生物活性小肽，大豆肽利用现代生物工程发酵菌种技术，以豆粕为主要原料，通过最大限度地消除大豆蛋白中的脲酶、胰蛋白酶抑制因子、凝血素、大豆球蛋白、β－伴球蛋白、植酸等抗营养因子，有效地降低蛋白质的分子量为小分子蛋白和小肽的无抗原优质小肽蛋白源，并可产生大量益生菌、寡肽、谷氨酸、乳酸、维生素、UGF（未知生长因子）等物质。
具有提高适口性、消化吸收率，促生长减少拉稀的功效。
一、作用功效1、具有独特的发酵芳香味，诱食性极佳，改善饲料风味，增加动物食欲，长期使用养成嗜好，提高动物采食量，促进生长、降低料耗；2、提供天然的酸化剂－乳酸、醋酸，不必另行添加饲料酸化剂，降低饲料成本；3、无抗原和抗营养因子，解决动物的营养性腹泻；4、调理和激活细胞和机体的整体活性，促进动物肠道绒毛的发育，促进幼龄动物胃肠道功能，提高防病抗病能力，促进动物的健康生长发育；5、高含量生物活性小肽蛋白，可以通过肠道粘膜直接吸收，转运速度快、吸收速率快、不易饱和；不存在与氨基酸吸收竞争，还能促进游离氨基酸的转运；小肽吸收耗能低，节省能量，提高蛋白利用率；6、补充大量活性益生菌，增强有益微生物的生长繁殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌的生长，改善肠道的微生态平衡，减少疾病的发生；7、提高动物机体的免疫功能，减少抗生素的用量或替代部分抗生素，具有营养和提高免疫力的双重作用。
二、添加比例可以依据饲养对象、饲养阶段和生理状态的不同需求（泌乳，抗应激，促生长等），决定使用量：（1）全部替代乳清粉、代乳粉；（2）全部替代鱼粉，且无组胺、无肌胃糜烂素；无高酸价；无高过氧比值；无挥发性盐基氮；（3）全部取代肠膜蛋白粉及40%的血浆蛋白粉，且无病菌污染的危险；（4）优于豆粕等所有的植物性蛋白源。
动物用量乳猪 10-25 中大猪 5-8 种蛋禽 10-20 淡水鱼5-15仔猪 5-15 哺乳母猪 5-10 肉小禽 5-10 鳜鳖海水鱼 10-20小猪 5-15 怀孕母猪 5-8 牛、羊 5-15 虾蟹鳗 10-25.三、成份含量1、无抗原和抗营养因子经微生物发酵处理后，原有的脲酶、胰蛋白酶抑制因子、凝血素、大豆球蛋白、β－伴球蛋白、植酸等抗营养因子被充分净化，有利于维持肠道组织结构，促进免疫功能，提高动物生产性能。
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豆粕功能肽制备及其降血脂作用王金玲1,2，江连洲1,3,*，许 晶1(1.东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030；2.黑龙江职业学院，黑龙江 双城 150111；3.国家大豆工程技术研究中心，黑龙江 哈尔滨 150030)摘 要：以来源丰富、价廉的高变性豆粕为原料制备大豆功能性多肽，并对多肽的降血脂作用进行研究。
通过单因素及正交试验法确定Alcalase 碱性蛋白酶水解高变性豆粕的最佳工艺条件。
采用小鼠高脂模型试验，通过小鼠体质量以及各项血脂指标的变化，评价酶解大豆多肽的降血脂功能。
结果表明：Alcalase 碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为底物质量浓度5g/100mL 、酶添加量14400U/g 、pH9.0、酶解温度55℃、酶解时间4h ，此条件下，豆粕蛋白的水解度为37.5%；酶解大豆多肽对高脂小鼠具有一定的降血脂作用，主要表现为显著降低小鼠的血清TC 值及提高小鼠的血清HDL-C 值(P ＜0.05)作用。
关键词：高变性豆粕；酶解；大豆多肽；降血脂Preparation and Hypolipidemic Effect of Functional Peptides from Soybean MealWANG Jin-ling 1,2，JIANG Lian-zhou 1,3,*，XU Jing 1(1. Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China ；2. Heilongjiang Polytechnic, Shuangcheng 150111, China ；3. National Research Centre of Soybean Engineering and Technology, Harbin 150030, China)Abstract ：Functional peptides were prepared from high temperature soybean meal (HTSM) as a rich and cheap resource and their hypolipidemic effect was evaluated. Based on one-factor-at-a-time experiments, an orthogonal array design was used to establish optimum conditions for HTSM hydrolysis by alcalase. The hypolipidemic effect of HTSM-derived peptides in hyperlipidemic mice was evaluated by measuring changes in body weight and serum lipid indices. The optimum conditions for HTSM hydrolysis by alcalase were found to be hydrolysis at 55 ℃ and pH 9.0 for 4 h with a substrate concentration of 5 g/100 mL and an enzyme dosage of 14400 U/g. The degree of hydrolysis of HTSM under the optimized conditions was 37.5%. The hydrolysate obtained had hypolipidemic effect in hyperlipidemic mice mainly by remarkably lowering serum TC level and increasing serum HDL-C levels.Key words ：high-temperature soybean meal (HTSM)；enzymolysis ；soybean peptides ；hypolipidemic effect 中图分类号：TS201.2 文献标识码：A文章编号：1002-6630(2012)24-0052-04收稿日期：2011-03-25基金项目：农业部大豆产业技术体系项目(CARS-04-11B)；黑龙江省“十一五”重点科技攻关项目(GB08B401)作者简介：王金玲(1984—)，女，助教，博士研究生，研究方向为粮食油脂及植物蛋白。
E-mail ：jinlingwang1003@ 近年来，大豆多肽的生理活性受到人们越来越多的重视。
大豆多肽是一种多功能保健因子，具有降低血清胆固醇、抑制血压升高等生理活性[1-6]。
在无副作用的前提下，既满足了人们营养需求，又满足了人们保健的需求。
目前，大豆的利用主要是大豆蛋白和大豆油脂的制取及精深加工。
其中高变性豆粕是大豆加工中的主要副产品，含有丰富的蛋白质，但由于此蛋白质变性程度较高，仅作为饲料及酿造食品原料，造成了一定的资源浪费。
若能以高变性豆粕为原料采用微生物发酵或生物酶酶解技术生产大豆多肽，既促进了大豆多肽产品的研发和应用，又降低了大豆多肽的生产成本，将会具有良好的应用前景及经济价值[7-8]。
为此，本研究在大量实验的基础上，深入研究Alcalase 碱性蛋白酶酶解高变性豆粕蛋白的工艺条件，以及最佳条件下的豆粕酶解多肽的降血脂功能。
1 材料与方法1.1材料与仪器高变性豆粕黑龙江省九三油脂有限公司；碱性蛋白酶(经测定酶活为120899U/g)丹麦Novo 公司；SD小鼠(体质量12～14g ，雄性)、饲料(基础饲料) 汉方生物养殖所；高脂饲料(配方[9-10]为基础饲料79%、蛋黄粉10%、熟猪油10%、胆固醇1%)为自行配制。
pHS-25型酸度计 上海伟业仪器厂；AE100电子分析天平 梅勒特-托利多仪器(上海)有限公司；LD4-2A 离心机北京医用离心机厂；全自动生化分析仪意大利BSI 公司；TGL-16B 台式高速离心机(16000r/min) 湖南星科科学仪器有限公司；190喷雾干燥机 瑞士Büchi 公司。
1.2 方法1.2.1指标测定水解度：通过pH-stat 法[11-13]测定并计算蛋白质的水解度。
水解度(DH)/%＝ ×100V (NaOH)×N (NaOH)α×M p ×H tot式中：V (NaOH)为消耗碱液的体积/mL ；N (NaOH)为消耗碱液的的摩尔浓度/(mol/L)；α为氨基酸的解离数；M p 为参加水解的蛋白总量/g ；H tot 为每克原料蛋白质中肽键的物质的量/mmol 。
血清总甘油三酯(triglyceride ，TG)、血清总胆固醇(total cholesterol ，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high densitylipoprotein cholesterol ，HDL-C)直接利用全自动生化分析仪测定；动脉硬化指数(arteriosclerosis index ，AI)根据Fridewaid 公式计算：AI [9]＝TC －HDL-C HDL-C1.2.2酶解工艺及操作要点工艺流程：豆粕样品一定条件下酶解酶解液钝化酶离心分离→喷雾干燥→肽产品，备用。
操作要点：本实验中碱性蛋白酶水解高变性豆粕的条件范围是在参考碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的工艺条件以及预实验的基础上确定的[14-16]。
配制一定浓度的高变性豆粕溶液，在一定温度条件下，依据所用酶的活力，准确添加蛋白酶，使其在不断搅拌下酶解，反应过程中用1mol/L NaOH 溶液调节体系酸碱度至实验pH 值，并维持其不变。
反应到预定时间，90℃加热20min ，钝化蛋白酶，终止酶解反应。
经冷却后的酶解液于4000r/min 离心20min ，得到上面澄清的豆粕蛋白酶解肽溶液。
取上清液，按照pH-stat 法计算水解度，喷雾干燥后，得到肽产品备用。
1.2.3动物实验分组所有实验小鼠先适应性喂养基础饲料4d 。
取42只小鼠，16只为正常对照组，喂基础饲料，其余为高脂模型组，给予高脂饲料(自制)。
连续喂养1周后，每组各随机抽取6只小鼠，空腹12h ，摘眼球取血，测定血清脂质含量，并以高脂模型组血清TG 含量显著的高于正常对照组为确定造模成功的指标[17-19]。
将高血脂小鼠随机分成2组，每组10只，分别为高脂对照组、碱性酶解肽组。
试验组以每天每只小鼠0.5mL 的量灌胃，碱性酶解肽组按人体推荐剂量的5倍定剂量灌胃，酶解多肽溶液现用现配，灌胃情况见表1。
实验连续进行4周后，取小鼠血清，测定各项脂质指标。
表 1试验设计方案Animal groups and treatmentsTable 1 试验分组处理方案正常对照组基础饲料＋生理盐水高脂对照组高脂饲料＋生理盐水碱性酶解肽组高脂饲料＋2.5g/kg 酶解肽1.2.4 数据处理正交试验的结果分析采用正交设计助手Ⅱ V3.1分析软件进行数据处理。
动物实验数据采用t 检验，结果以“平均值±标准差”的方式表示，采用Excel 2003和SPSS 13.0软件数据处理。
2结果与分析2.1 碱性蛋白酶最佳水解条件的确定[15-16]2.1.1 酶添加量对水解度的影响在温度55℃、pH8.5、底物质量浓度5g/100mL 、酶添加量(每克底物)分别为4800、9600、14400、19200、24000U/g 条件下酶解4h，测定水解度，确定最佳酶添加量。
48009600144001920024000䝊⏏ 䞣/(U /g)∈㾷 /%图 1酶添加量对水解度的影响Effect of enzyme dosage on degree of hydrolysisFig.1由图1可以看出，酶添加量对水解效果的影响极为显著(P ＜0.01)。
水解度随着酶添加量的增加呈上升趋势，但其变化幅度逐渐趋缓。
当酶添加量为14400U/g 时，水解度达到最大，之后水解度变化缓慢，且与14400U/g 相比较差异不显著(P ＞0.05)。
原因可能是酶添加量过高，底物被饱和，过剩的酶分子没有底物可以作用[20]。
因此，综合考虑生产成本，确定酶添加量为14400U/g 。
2.1.2 酶解时间对水解度的影响在温度55℃、pH8.5、酶添加量14400U/g 、底物质量浓度5g/100mL 条件下，分别酶解1、2、3、4、5h ，测定水解度，确定最佳酶解时间。
由图2可以看出，酶解时间对水解效果的影响极为显著(P ＜0.01)。
水解度随着时间的延长呈上升趋势，但其变化幅度逐渐趋缓。