薄层色谱的操作

6．检测

6.1定性分析（同一性试验）

在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。

当混合物物质被测试时，参考标准物中单个馏份的Rf值可能会与纯物质的Rf有所不同，但测试物理学馏份和标准化馏份的hRf值必须相符，其DhRf在±3之内。

为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪实时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。多波长测定将测试物和参照物的图谱情况和hRf值相关联供进一步鉴别。

6.2定量分析

（仪器：

存及打印。

同心部份的

TLC/HPTLC

增加。

，302，313，3 66，405，436

图10：a)

b)TLC/HPTLC

7．标准条件

7．1HPTLC板

10x10和20x10cmHPTLC预涂板的标准条件总结如下以便于参考。

薄层商品化生产的HPTLC板

规格10x10和20x10cm板；由样品数目决定

点样用毛细管移液管或Nanomat进行斑状点样或用自动点样器作条状点样

数量一般，斑状点样用20nl-1ml,窄条点样用2-20ml

定位起点在距板下缘10mm处

溶剂数量限定采用体积量或绝对量。一般，对10x10cm双槽展开室的一个槽加5ml,对20x10cm双槽展开室的一个槽加10ml

分离距离5cm

展开室对10x10或20x10cm板用双槽展开室

分离模式线性（上行式或水平的）

饱和（A）无滤纸放入；溶剂和TLC/HPTLC板同时加入到展开室中。

（B）无滤纸放入；至少在层析展开开始前10分钟将溶剂倒入至展开室中。

（C）放入滤纸；至少在层析展开开始前30分钟将溶剂倒入至展开室中。

（D）放入滤纸；用溶剂蒸汽将在无溶剂的空槽中的TLC/HPTLC板调整其状况不少于10分钟。将展开室倾侧使层析展开开始。这方法只在用20x10cm板的双槽展开室适用。用10x10cm板的双槽展开室，溶剂需从外面用移液管或类似方法注入。

温度室温，通常为20-25?C

空气湿度无机薄层必须在室温，相对湿度50-60%下达到平衡

检测如各相应的方法所规定

7．2TLC板

20x20和

规格20x20cm

分离距离对

展开室对

饱和（A

（B

（C

（D

20x10cm

铺板

G:水=1：2～3，硅胶G:

稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。

点样

尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。

展开剂配制

选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同

的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。

展开系统的饱和

一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。

温湿度的控制

温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。

显色