金标免疫试纸法检测牛奶中的青霉素残留

金标免疫试纸法检测牛奶中的青霉素残留
一、试验目的把握金标免疫试纸法检测牛奶样品中青霉素残留的
原理与办法。

二、试验原理金标免疫试剂法是免疫学办法中的一种，它是抗原抗体特异性反应与色谱技术有机结合的产物。

瓷砩剥式纸系普通由样品垫、衔接垫、滤膜(结合垫)、汲取垫和垫板等几部分组成。

样品垫通常为纸质，附着于衔接垫，一样品垫上有加样孔。

衔接垫上包含有干燥金标(本试纸条上是胶体金标志的抗青霉素抗体和抗二抗金标抗体)的金标垫。

滤膜(结合垫)由检测线(T线)和质控线(C线)组成，T 线结合有青霉素蛋白质偶联物(如牛血清白蛋白的偶联物)，C线结合有二抗。

在测试时，将一定量的样品提取液滴入试纸条加样孔内，假如青霉素在样品中浓度低于5ng／mL，胶体金标志的抗青霉素抗体不能与青霉素所有结合，剩余胶体金标志的抗青霉素抗体，通过色谱分别到达固定有青霉素与蛋白质偶联物的测定区(T线)，并与之结合，浮现(紫)红色条带。

假如青霉素在样品中浓度高于5ng／mI，，胶体金标志的抗青霉素抗体所有与青霉素结合，在测试区(T线)不浮现(紫)红色条带。

另外，因为抗二抗金标抗体与二抗结合富集，显红色，因此，无论青霉素是否存在于样品中，一条(紫)红色条带都会浮现在质控区(C线)内。

三、仪器与试材 1．仪器与器材冰箱、烧杯等。

2．试剂青霉素金标试纸条(试剂盒)：附带样品稀释液和滴管等。

3．试验材料 2～3种新奇牛奶，各50g。

四、试验步骤 1．样品的制备取新奇牛奶放在洁净、干燥的玻璃烧杯内，然后加样品稀释液按1：1稀释，充分摇匀后，待用。

2．检测 (1)从冰箱中取出冷藏的试纸条，放置复原至室温。

(2)从包装袋中取出试纸条，平放在桌面上(尽量在1h内用法)。

(3)用滴管吸取待检样品溶液，缓慢而精确地滴加3滴(或以加样管加100μL)于试剂条的加样孔内(注重不要产愤怒泡)，计时。

(4)在5～10min内观看结果。

3．结果判定 (1)当位置C显示出红色线条，而位置T不显色时，或者当位置C显示出红色线条，位置T显示色彩浅于C时，判为阳性，
即样品中青霉素含量超过5ng／mL。

(2)当位置C显示出红色线条，位置T同时显示出红色线条，且T线色彩临近C线或者深于C线时，判为阴性，即样品中青霉素含量低于5ng／mL。

(3)当位置C不显示出红色线条，则无论位置T显示出红色线条与否，判为无效。

应用法新的试纸卡按解释书要求重新测试。

五、注重事项 1．在举行检测前，应仔细认真阅读试剂盒(条)的用法解释书，并根据操作步骤举行测试，操作时勿触摸试纸显示区。

2．试纸条应保存在干煤阴凉处(4～30℃)，超过有效期请勿用法。

3．试纸条为一次性产品，请勿重复用法。

4．试纸条为筛选用试剂，任何阳性结果需用其他办法作进一步确认。

六、思量题 1．简述金标抗体的制备过程。

2．简述制备抗青霉素单克隆抗体的过程。

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