浙江大学生物化学实验甲 维生素C的定量测定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)

2、维生素C的测定原理
• 根据维生素C的还原性可测定其含量，常用2，6-二 氯酚靛酚测定法。还原性抗坏血酸能还原染料2，6 二氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中， 2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时， 维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被
还会给滴定终点的观察造成困难。
3、材料与试剂
⑴、实验材料
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 橘子、青椒等。 ⑵、试验试剂
• 标准抗坏血酸溶液和2，6-二氯酚靛酚溶液配制时的
注意事项参P162。
4、操作方法
• 操作步骤及注意事项参P162-P163。
5、实验结果及处理
• 准确纪录所称青椒的克数； • 仔细观察滴定终点，准记录滴定所用 2，6-二氯酚 靛酚的毫升数，代入下列公式计算维生素C的含量：
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 滴定终点：当溶液从无色转变成微红色（15s内不 消退）时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，
此时即为滴定终点。
• 2，6-二氯酚靛酚滴定法的特点：简便，快速，比较 准确，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不 能直接测定样品中的氧化型抗坏血酸，并且，易受 其它还原物质的干扰，如果样品中含有色素类物质，
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
（VA-VB）×C×T 维生素C含量（mg/100g样品）= D×W × 100
• VA：滴定样品所耗用的染料的平均体积（ml） • V Ｂ ：滴定空白对照所耗用的染料的平均体积（ml）
• C：样品提取液的总体积（ml）
• D：滴定时所取的样品提取液体积（ml） • T：１ml染料能氧化抗坏血酸的质量（mg）（由操 作二计算出） • W：待测样品的质量（g）
O Cl H+ OH
N
O-
（蓝色） OH-
H C
HO CH CH2OH 还原型抗坏血酸 O C O C
氧化型2，6-二氯酚靛酚（粉红色）
Cl
O C
H C
O
+
HO
Cl
N H
OH
HO CH
CH2OH 氧化型抗坏血酸
（被还原的标准染 还原型2，6-二氯酚靛酚 料量与样品中所含 （无色） 的还原型抗坏血酸 量成正比）
还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化
时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。 • 所以，当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中 的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。 如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料
量与样品中所含的还原性抗血酸量成正比。
0
Cl
O
C HO C HO C O + O Cl Cl N
• 维生素C为一种稍有酸味的糖类白色晶体，易溶于
水，不溶于有机溶剂。在酸性溶液中比在中性及碱 性溶液中稳定，易被热、光及某些金属离子（Cu2+ 、
Fe2+等破坏。
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 维生素C具有很强的还原性，参与体内多种氧化还 原反应，是一些氧化还原酶的辅酶。金属铜和酶 （抗坏血酸氧化酶）可催化维生素C氧化为脱氢型 （氧化型）。还原型和氧化型都具有活力。
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
1、维生素C简介
• 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，食物 中如缺乏，将会导致坏血病，因此又称为抗坏血酸。 • 植物的绿色部分及许多水果（如橙子、橘子、苹果、 草莓、山楂、鲜枣、猕猴桃等）、蔬菜（黄瓜、洋 白菜、西红柿、豆芽菜、辣椒等）中维生素C的含 量尤为丰富。