染色体核仁组织区染色体带型标本的观察

(1) 绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用 2H 铅笔为宜。
(2) 图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央 稍偏左方，并向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条 要整齐平列，各部名称写在线条右边。图的下方写图的名称
及放大倍数（ 目镜倍数×物镜倍数）。
【作业】
1．绘制中期人染色体图，显示染色体的大小、数目 和形态。
察的目的物处于物镜的正下方。 调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛在侧向注
视物镜，防止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，
可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找
到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。
观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调 螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片，擦干净镜体，罩上 防尘罩，然后放回原处。
显微镜的保养及注意事项
（1）油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张 擦镜纸，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一张新擦镜纸 将镜头上残留的二甲苯擦净。否则粘固透镜的胶质会被二甲 苯溶解，日久镜片易移位脱落。
3.高倍镜的操作
使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至 视野正中处。
旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动， 这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必 须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊， 调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意 旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强 力接触，损坏镜头或载玻片。
(4) 绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象 区别清楚，不要把这些现象绘上。
(5) 图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点 细点时，要点成圆点，不要点成小撇。
(6) 整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。
向培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚， 这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐 溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及 分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可 获得较好的染色体标本。
核仁组织区（NOR）就是染色体上编码5.8SrRNA、 18SrRNA和28SrRNA的基因（rDNA）所在的部位。染色质 上具有转录活性或已转录过的rRNA基因部位伴有丰富的酸 性蛋白，含有SH基团和二硫键，可将AgNO3中的Ag+还原 成黑色的Ag颗粒，银染强度与rRNA的转录活性有关。
（6）显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起，如 碘片、盐酸、硫酸等药品。
操作练习
观察人染色体、核仁组织区、染色体带型切片。先在 低倍镜下观察，选择染色体分散良好，无重叠的分裂中期 细胞（此时已看不到细胞膜与核膜）。然后转至高倍镜下 仔细观察分析，最后换油镜观察。首先计数该细胞染色体 总数，再注意观察染色体的形态大小，每条染色体含有两 条染色单体，两染色单体连接处为着丝粒，注意每条染色 体的大小和着丝粒的位置。区分中央着丝粒染色体、亚中 央着丝粒染色体、亚端着丝粒染色体和端着丝粒染色体。 观察核仁组织区在染色体上的位置，在染色体组中的分布。 观察染色体带型特征。
Nucleolar organizing region (NOR, 核仁组织区)：细胞 核特定染色体的次缢痕处， 含有rRNA基因的一段染色 体区域，与核仁的形成有关。
satellite(随体) ：位于染色体 末端、圆形或圆柱形的染色 体片段，通过次缢痕与染色 体的主要部分相连。
Telomere(端粒)
G-显带 ： Giemsa染料使染色体的不同区段出 现亮暗相间带纹。 DNA上含高比例二硫键的氧化态 蛋白质区域，经过一系列处理后显示暗带，而另一 些含巯基的还原态蛋白质区域，为亲水性蛋白质， 对染料的亲和力低，所以不易显色，为明带区。
人类染色体
人类染色体
人类染色体
染色体带型图谱
secondary constriction(次缢 痕)：染色体上除主缢痕外 的缢缩部位。
应特别注意不要在下降镜头时用力过猛或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片观察完一个标本后如果想要再观察另一标本时需先将高倍物镜或油镜转回到低倍物镜取出标本按放片的方法换上新片即可观察
【实验原理】
显微镜的主要部分是目镜和物镜，为两组凸透 镜。物镜的焦距短，目镜的焦距较长。当被观察物 体AB放在物镜前方的1～2倍焦距之间，光线通过物 镜在镜筒中形成一个倒立的放大实像A′B′，这个实 像恰好位于目镜的焦平面之内，通过目镜后形成一 个放大的倒立虚像A′′B′′。通过调焦装置使A′′B′′落 在人眼睛的明视距离（25mm）内，眼睛看到的物 体最清晰。A′′B′′的视角比眼睛直接看AB的视角大 得多，因此我们可以用显微镜看清非常微小的物体。
（取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直 立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均 应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪 录。）
2.低倍镜的操作
置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。 将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节推动器，使观
（应特别注意不要在下降镜头时用力过猛，或者调焦时误将粗调 节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）
5.换片
观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高 倍物镜（或油镜）转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方 法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下 换片，以防损坏镜头。
6பைடு நூலகம்显微镜使用后的整理
Functions:
For the complete replication of chromosome
Protect the chromosomes from nuclease influence
Prevent the ends of chromosomes from fusing
Human mitotic chromosomes and karyotype(核型) and banding pattern(带型)
普通光学显微镜成像原理图
显微镜的分类
现代显微镜可以分为两大类：一类是光学 显微镜，另一类是非光学显微镜 。这两类显 微镜又可根据不同的情况分成若干类型 。
普通光学显微镜的基本结构
普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置， 二为光学系统 。
机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动 器、粗调节螺旋和微调节螺旋等部件组成。
2．记录染色体总数，具有核仁组织区的染色体数。 3．说明G-显带原理。 4．概述显微镜使用的注意事项。
(3) 画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔 画出与物象相符的线条。线条要清晰，比例要准确。较长的 线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同一线条粗细 相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。
（2）下降聚光器，打开光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积 聚灰尘。
（3）用绸布将镜身擦拭干净（切不可用手擦拭），除去灰尘、 油污、水汽，以免生锈长霉。
（4）使显微镜的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈 “八”字形置于载物台上，然后将显微镜送回镜箱中。
（5）显微镜应存放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光 下暴晒，霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂（硅胶）， 如长时间不用，则光学部分应卸下放在干燥器中，以免受 潮生霉。
4.油镜的操作
如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜 检查标本片，将目的物移到视野正中。
在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋 使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋 微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。
油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许 二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。
Chromosome painting=multicolor FISH
实验报告格式
一、实验项目名称 二、实验目的 三、实验原理 四、主要仪器设备及耗材 五、实验步骤 六、实验数据及处理结果 七、思考讨论题或体会或对改进实验的建议
显微结构图的绘制
生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点， 绘图注意事项如下：
光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、光 圈等组成。
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造
显微镜的光路
光源→光圈→聚光镜→通光孔→标本（一定要透明） →物镜→镜筒→目镜→眼。
显微镜的使用
1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿
约为3~4cm。镜检者姿势要端正。