2种酶免疫方法在大型生化仪上检测药物浓度的应用评估

2种酶免疫方法在大型生化仪上检测药物浓度的应用评估李甲勇;刘畅;王弘明;张如霖
【摘要】目的评估均相酶免疫法与酶放大免疫法测定血清中苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平、霉酚酸及全血环孢霉素A 8种药物浓度的一致性.方法用均相酶免疫法和酶放大免疫法检测BIO-RAD 3个水平及原厂的质控品,计算批内、批间精密度.收集用于每种药物浓度检测的临床样本120例,其中异常样本超过30%,另每种药物再收集30例同源血浆样本(除环孢霉素A外),在SIEMENS ADVIA 2400全自动生化分析仪上用2种检测方法平行测定,观察2种方法检测临床样本的一致性.结果均相酶免疫法和酶放大免疫法检测质控品批内、批间精密度,结果均在控且稳定性良好.2种检测方法测定环孢霉素A、苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平及霉酚酸浓度的总体相关性较好(r值分别为0.997、0.993、0.997、0.996、0.988、0.994、0.999、0.997),各回归方程检验均具有统计学意义(P<0.001).2种检测方法测定结果差异均无统计学意义(P>0.05).2种检测方法在各药物医学决定水平处的预期偏移均小于规定允许误差范围.除环孢霉素A外,其余药物检测同源血清与血浆样本结果的一致性好,回归方程检验均有统计学意义(P<0.01),且配对t检验显示差异均无统计学意义(P>0.05).结论均相酶免疫法和酶放大免疫法在SIEMENS ADVIA 2400全自动生化分析仪上检测苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平、霉酚酸及环孢霉素A 8种药物浓度具有较好的一致性.%Objective To evaluate the consistency of homogeneous enzyme immunoassay and enzyme-amplified immunoassay in the determinations of phenytoin,valproic
acid,theophylline,digoxin,methotrexate, carbamazepine and mycophenolic acid in serum and cyclosporine A in whole blood with 8 drug
concentrations. Methods Homogeneous enzyme immunoassay and enzyme-amplified immunoassay were used to determine BIO-RAD with 3 concentrations and original quality control products,and the within-run and between-run precisions were calculated. A total of 120 clinical samples were collected for each drug concentration,which more than 30%of them were abnormal. Except for cyclosporine A,30 homologous plasma samples were collected for each drug concentration. Using SIEMENS ADVIA 2400 automatic biochemical analyzer,homogeneous enzyme immunoassay and enzyme-amplified immunoassay were performed parallelly,and the consistency of them was evaluated. Results The within-run and between-run precisions of homogeneous enzyme immunoassay and enzyme-amplified immunoassay were good,and there was a good stability. The overall correlation of each drug concentration was good,and r were 0.997 for cyclosporine A,0.993 for phenytoin,0.997 for valproic acid,0.996 for theophylline, 0.988 for digoxin,0.994 for methotrexate,0.999 for carbamazepine and 0.997 for mycophenolic acid. All the regression equations were significant statistically (P<0.001). There was no statistical significance for the results of the 2 methods(P>0.05). The expected bias of each drug concentration at medical decision level was in allowable error range. The consistency of homologous serum and plasma samples was good,except for cyclosporine A, and each regression equations were significant statistically(P<0.01),and the difference of paired t-test was
not&nbsp;significant statistically (P>0.05). Conclusions The results of phenytoin,valproic acid,theophylline,digoxin,
methotrexate,carbamazepine,mycophenolic acid and cyclosporine A with 8 drug concentrations have good consistency between the 2 methods by SIEMENS ADVIA 2400 automatic biochemical analyzer.
【期刊名称】《检验医学》
【年(卷),期】2017(032)004
【总页数】5页(P311-315)
【关键词】均相酶免疫法;酶放大免疫法;生化分析仪;药物浓度;一致性
【作者】李甲勇;刘畅;王弘明;张如霖
【作者单位】上海市第一人民医院检验科,上海 200080;上海市第一人民医院检验科,上海 200080;上海市第一人民医院检验科,上海 200080;上海市第一人民医院检验科,上海 200080
【正文语种】中文
【中图分类】R446.61
药物浓度监测是以药代动力学原理为指导，分析药物在血液中的浓度，用以评价疗效或确定给药方案，使给药方案个体化，以提高药物治疗水平，从而达到临床安全、有效、合理用药的目的。

临床上用于治疗自身免疫系统疾病、癫痫、心律失常、哮喘、支气管扩张、心力衰竭、白血病及抗器官移植排斥反应的常用药物有环孢霉素A、苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平及霉酚酸等[1-8]。

由于药代动力学的个体差异
较大，血药物浓度又受多种因素影响，因此临床上对血药物浓度监测非常重视。

由于药物浓度检测需要进行长期多次监测，而以前的试剂多为国外进口，成本较高，
在很大程度上增加了医疗成本，加重了患者的经济负担。

本研究对均相酶免疫法和酶放大免疫法的检测结果进行比对，分析2种方法的检测8种药物的精密度和临
床样本测定结果的一致性，讨论用国产试剂盒代替进口试剂盒的可能性。

1.1 仪器
SIEMENS ADVIA 2400全自动生化分析仪（德国西门子公司）。

1.2 材料
1.2.1 试剂均相酶免疫法试剂为苏州博源医疗科技有限公司生产的环孢霉素A测
定试剂盒（批号142708）、苯妥英测定试剂盒（批号141508）、丙戊酸测定试剂盒（批号142108）、茶碱测定试剂盒（批号141808）、地高辛测定试剂盒（批号143008）、甲氨蝶呤测定试剂盒（批号142408）、卡马西平测定试剂盒（批号140908）及霉酚酸测定试剂盒（批号141208）。

酶放大免疫法试剂为西门子医学诊断产品（上海）有限公司生产的环孢霉素A测定试剂盒（批号
6R079VL-G1）、苯妥英测定试剂盒（批号4A019VL-G3）、丙戊酸测定试剂盒（批号4G019VL-G3）、茶碱测定试剂盒（批号4F019VL-G2）、地高辛测定试
剂盒（批号4H019VL-G1）、甲氨蝶呤测定试剂盒（批号6L119VL-G1）、卡马
西平测定试剂盒（批号F019VL-G1）及霉酚酸测定试剂盒（批号6R919VL-G2）。

1.2.2 质控品 BIO-RAD的3个水平质控品：地高辛、甲氨蝶呤、茶碱、丙戊酸、
卡马西平、苯妥英（批号570331-570333）；原厂质控品：酚酸（批号141229）、环孢霉素（批号150108）
1.2.3 样本来源按照美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI） EP9-A2文件要求，收集用于8种药物浓度检测的
符合相关检测要求的无溶血、无脂血、无黄疸的样本120例，其中异常样本超过30%。

全血样本用于环孢霉素A检测，血清样本及30例同源血浆样本用于其他药物检测，将样本保存于-20 ℃待测。

1.3 方法
严格按照均相酶免疫法试剂说明书和酶放大免疫法试剂说明书要求对质控品和临床样本进行前处理和检测。

1.3.1 精密度测定批内精密度：BIO-RAD及原厂的3个水平质控品分别用2种方法重复检测20次，计算检测均值和变异系数（coefficient of variation，CV）。

批间精密度：BIO-RAD及原厂的3个水平质控品分别用2种方法每日检测4次，每批次间隔时间＞2 h，连续检测5 d，计算检测均值和CV。

1.3.2 样本检测样本复融后，分别用2种方法对样本进行平行检测，并记录结果，观察2种方法检测结果的差异以及同源血清和血浆检测的差异。

1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0软件进行统计分析。

各种药物浓度结果如果呈正态分布，则采用
表示，并对2种方法的检测结果进行配对t检验；如果呈非正态分布，则采用中位数（四分位数）表示，并对2种方法的检测结果进行Mann-WhitneyU秩和检验。

比较8种药物浓度2组检测结果的相关性，计算回归方程并进行显著性检验，计
算医学决定水平处的预期偏移并进行配对t检验，从而分析2种检测方法检测8
种药物浓度的一致性。

以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 2种检测方法质控品批内、批间精密度
2种检测方法各自BIO-RAD及原厂3个水平质控结果均在控，批内精密度CV＜5%，批间精密度CV＜10%，说明2种检测方法均处于良好的受控状态且稳定性好。

2.2 2种检测方法检测临床样本各药物浓度结果的比较
2.2.1 各药物浓度结果整体一致性分析 2种检测方法检测环孢霉素A、苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平及霉酚酸浓度的总体相关性较好（r值分别为0.997、0.993、0.997、0.996、0.988、0.994、0.999及0.997，P＜
0.001）。

以Y表示均相酶免疫法检测结果，X表示酶放大免疫法检测结果，2种
检测方法检测各药物浓度回归方程分别为环孢霉素AY=1.001 8X-0.049 7、苯妥
英Y=1.007 9X-0.347 3、丙戊酸Y=1.010 6X-0.155 6、茶碱Y=1.014 5X-0.009 0、地高辛Y=1.006 7X-1.616 4、甲氨蝶呤Y= 0.999 4X+0.002 9、卡马西平
Y=0.996 6X-0.001 0及霉酚酸Y= 1.014 3X+0.009 3，各回归方程均具有统计学意义（P＜0.01），2种检测方法结果差异均无统计学意义（P＞0.05）。

见表1。

2.2.2 各药物医学决定水平处的偏移分析
2种检测方法在各药物医学决定水平处的预期偏移均小于规定允许误差范围。

见表2。

2.2.3 除环孢霉素A外，其余7种药物同源血清和血浆样本检测结果的一致性分析采用均相酶免疫法检测同源血清和血浆样本7种药物浓度。

结果显示2种样本的
总体相关性较好，苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平及霉酚酸的r值分别为0.996、0.996、0.987、0.980、0.999、0.999及0.966（P＜
0.001）。

以Y表示血浆检测结果，X表示血清检测结果，各药物浓度回归方程分别为环孢霉素AY=1.006 7X-1.616 4、苯妥英Y= 1.002 7X-0.008、丙戊酸
Y=0.980 8X+ 0.487 4、茶碱Y=1.026 7X-0.614 4、地高辛Y=0.931X+0.041 1、甲氨蝶呤Y= 0.981 5X+0.0065、卡马西平Y=1.005 0X-0.107 7及霉酚酸
Y=0.990 7X-0.091 8，各回归方程均具有显著统计学意义（P＜0.01）。

7种药物血浆和血清测定结果差异均无统计学意义（P＞0.05）。

见表3。

治疗药物监测是临床对一些治疗指数低、安全范围窄、毒副作用强的药物进行的监测，用于考察其疗效并预防不良反应发生，及时根据血药浓度对用药剂量进行调整，以较理想的血药浓度达到最佳的治疗效果[9]。

环孢霉素A在治疗剂量下的生物利
用度、药物动力学、血药浓度等个体差异很大，因此在治疗中监测环孢霉素A血
药浓度，能防止毒副反应及肝肾功能和中枢神经系统损伤[10-11]。

卡马西平是治
疗各种类型癫痫、外周神经痛和躁狂的一线药物，检测其血药浓度已成为防止毒副反应、保证临床使用安全有效的重要手段[12-13]。

苯妥英是一种常用抗癫痫药物，其抗癫痫的血药浓度与药物中毒的浓度很接近，个体差异很大，口服吸收慢且不规则[14]。

丙戊酸又是继卡马西平、苯妥英后的一线抗癫痫药，易引起恶心、呕吐、厌食、腹痛、嗜睡、共济失调，甚至肝损伤[15]。

茶碱类药物的不良反应较多，常见的有胃肠道症状、心血管系统症状及中枢神经系统症状，发生率与其血药浓度密切相关[16]。

地高辛是临床抗心力衰竭的常用药物，但其毒副作用大，安全范围窄，药物代谢动力学、药物效应动力学个体差异大，且治疗剂量与中毒剂量相互重叠，易发生中毒反应[17]。

霉酚酸是抗代谢免疫抑制剂[8]，其浓度过低易导致免疫抑
制不足，排斥反应增加，而浓度过高会使不良反应发生的危险性增加[18]。

甲氨蝶呤为叶酸类抗肿瘤药，临床上广泛用于治疗儿童淋巴细胞白血病、淋巴瘤、绒毛膜上皮癌和骨肉瘤等恶性肿瘤[6]，大剂量甲氨蝶呤易引起消化道不良反应，肝功能
损伤和白细胞下降[19]。

因此，对以上药物进行药物浓度监测能有效预防不良反应的发生，使药物达到较为理想的治疗效果。

药物浓度检测方法有放射免疫分析法，酶免疫分析法、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法、液相-质谱联用分析法等。

酶免疫分析法具有特异性强、敏感性高、
操作简便快捷、酶标记物稳定、有效期长等优点[20]，是目前临床使用较为普遍的监测药物浓度的方法，主要是利用蛋白竞争的原理进行检测。

均相酶免疫法为酶免疫分析法的一种，这类方法较其他方法定量准确、精密度高、特异性强且样本处理简单，获取结果时间短，可用于实验室大批量的自动化检测[21]。

本研究对均相酶免疫法和酶放大免疫法进行批内、批间精密度检测，结果表明2
种检测方法具有较好的稳定性，符合临床对于项目的检测要求。

整个研究采用样本随机盲法排序，对临床样本对比平行检测，结果显示均相酶免疫法和酶放大免疫法对环孢霉素A、苯妥英、丙戊酸、茶碱、地高辛、甲氨蝶呤、卡马西平及霉酚酸检
测的总体相关性较好，结果一致性好，在医学决定水平处的预期偏移均在临床可接受范围之内；均相酶免疫法对同源血清和血浆检测的总体相关性好，而且兼容于大型生化仪后便于大批量高效率的检测，所以可以供临床对以上8种药物浓度进行
监测时使用。

目前，随着国内检验学科的发展，在很多项目上，国产试剂的检测性能不逊于进口试剂。

为了降低医疗成本，减轻患者的经济负担，减少医患矛盾，今后实验室可以采用检测结果准确、稳定但价格相对较低廉的国产试剂。

但在质量把控上，由于每个实验室所采用的仪器不同，在更换试剂盒时，应该做相关的性能验证工作，防止骤然更换试剂造成检测结果偏差而引发临床诊疗矛盾的发生。

【相关文献】
[1] 唐振香，魏建英. 环孢霉素A的临床应用与安全性分析[J]. 现代中西医结合杂志，2008，17（35）：5553-5556.
[2] 姜德华，黄成琼，王博，等.ABCB1基因多态性与苯妥英钠治疗癫痫疗效的相关性研究[J]. 中华临床医师杂志（电子版），2015，9（13）：2482-2486.
[3] 王静，徐新毅. 丙戊酸钠、托吡酯对学龄期癫痫患儿认知功能的影响及对比分析[J]. 国际检验医学杂志，2015，37（20）：2956-2957.
[4] 李媛，林青. 茶碱类药物的研究进展及应用[J]. 中国医药指南，2013，11（4）：421-422.
[5] 李艳芳. 对百年老药地高辛的再认识[J]. 中华老年心脑血管病杂志，2013，15（9）：1005.
[6] 许耘川，袁向亮，沈立松. HPLC法测定血清甲氨蝶呤浓度的方法建立及其与荧光偏振法的比较[J].检验医学，2010，25（9）： 701-704.
[7] 张思玲，廖加友. 卡马西平联合黄连上清丸在三叉神经痛患者中的疗效观察[J]. 检验医学与临床，2014，11（1）：71-73.
[8] 王庆华，尚乐乐，陈锦华，等. 肾移植中霉酚酸血浓度的监测[J]. 中国组织工程研究，2012，
16（53）：9887-9892.
[9] 薄娜娜，王倩，刘旭. 血药浓度监测技术进展的研究[J]. 国际检验医学杂志，2015，37（22）：3291-3294.
[10] 郭祥，刘红耀，王靖宇. 环孢霉素A联合干扰素-α对膀胱癌T24/ADM耐药逆转的研究[J]. 中国医药导报，2011，32（29）：13-14.
[11] 祁峰，卞海林，陈迎平，等. 探讨监测环孢霉素A血药浓度的临床应用[J]. 中国医药导刊，2013，15（8）：1425-1427.
[12] 李小军. 卡马西平与托吡酯治疗癫痫的疗效比较[J].中国医药指南，2010，8（12）：30-31.
[13] 李美珠，陈棪焜. 均相酶增强免疫法监测丙戊酸浓度及临床应用[J]. 检验医学与临床，2011，
8（24）：2959-2960.
[14] 韩涛，刘素琴，位坤坤，等. 苯妥英钠致伴嗜伊红细胞增多和全身性反应综合征一例[J]. 中华
神经科杂志，2013，46（3）：213-214.
[15] 王林. 丙戊酸钠脑病1例[J]. 临床合理用药杂志，2015，8（26）：166.
[16] 王学亮，周传麟，刘爱文，等. 氨茶碱对CVA患者Th1/Th2及FeNO的影响[J]. 临床肺科杂志，2015，20（5）：871-873.
[17] 孙贺伟，刘海明，李水军，等. 液相色谱-串联质谱法测定地高辛及其室间质量评价[J]. 检验医学，2015，30（5）： 437-441.
[18] 张耀东，段丽芳，叶驰霞. 血游离霉酚酸浓度监测的研究进展[J]. 中国药物应用与监测，2013，10（6）：352-354.
[19] 李涛，郭洪敏，田宝方，等. 大剂量甲氨蝶呤联合顺铂治疗骨肉瘤的效果分析[J]. 实用癌症杂志，2014，30（7）：886-888.
[20] 李优鑫，毛静远，李惠芬. 地高辛血药浓度检测方法的分析[J]. 中国中药杂志，2007，32（4）：285-288.
[21] 齐谢敏，虞留明，李冬，等. 均相酶免疫分析技术在治疗药物监测中的应用[J]. 药学与临床研究，2015，23（1）：47-50.。