广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌的影响

广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌的影响
曾春晖;杨柯;谭娥玉;蔡妮娜;李先梅;徐明光
【摘要】目的:观察广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌收缩活动的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:通过小鼠离体肠段实验,观察不同浓度的山油柑叶提取物对小鼠正常离体肠收缩活动的影响和对Ach和BaCl2引起离体肠兴奋的拮抗作用.结果:山油柑叶提取物在终浓度为1～12 mg生药/ml浓度范围内,在给药后的15 min内均能显著降低小鼠正常肠段收缩能力(P<0.05或P<0.01);在终浓度为4～12 mg生药/ml浓度范围内,山油柑叶提取物可使Ach和BaCl2作用下的肠肌收缩张力减小(P<0.01);且均与剂量呈正相关关系.结论:广西山油柑叶提取物能明显松弛小鼠正常离体肠收缩和拮抗Ach和BaCl2引起的肠兴奋作用.
【期刊名称】《广西中医药》
【年(卷),期】2011(034)005
【总页数】4页(P57-60)
【关键词】山油柑;离体小肠;收缩活动;乙酰胆碱;氯化钡
【作者】曾春晖;杨柯;谭娥玉;蔡妮娜;李先梅;徐明光
【作者单位】广西中医学院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学
院,530001,南宁市明秀东路179号;广西中医学院,530001;广西中医学院,530001;广西中医学院,530001;广西中医学院,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
山油柑Acronychia pedunculata（L.）Miq.又名降真香、山橘，为芸香科山油柑属植物，以根、心材、叶、果入药。

主要分布于我国南部和印度、马来西亚、缅甸、越南、老挝、泰国、柬埔寨、苏门答腊、菲律宾等地，是一种东南亚的特有物种［1］。

山油柑性平味甘，根、干木、叶具有祛风活血和理气止痛的功效，可用于治疗风湿性腰腿痛、跌打肿痛、支气管炎、胃痛、疝气痛等；果实具有健脾消食的作用，可治疗食欲不振、消化不良等。

近年来，有关山油柑的成分研究发现，其主要含有α-蒎烯及柠檬烯、三萜类化合物鲍尔烯醇（bauerenol）、草酸钾、β-谷
甾醇、挥发油及山油柑碱（acronycine）［2］；对其药理研究主要集中在山油柑碱抗肿瘤方面，对多种小鼠移植肿瘤有显著抑制作用［3-6］；但其理气止痛功效的相关药效研究至今未见有报道。

本文采用小鼠离体肠段实验，观察山油柑叶去油水提取液对小鼠正常离体肠的作用和对抗由乙酰胆碱（Ach）和氯化钡（BaCl2）诱导的肠兴奋。

现将实验结果报道如下。

1 实验材料与方法
1.1 动物 KM种小鼠33只，清洁级，体重25～30 g，雌雄各半。

购自广西医科
大学实验动物中心，合格证号:Scxk2003-0003。

1.2 药品山油柑叶采集于广西南宁市郊区，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为
芸香科山油柑属植物山油柑Acronychia pedunculata（L.）Miq.的叶；溴化乙酰胆碱（国药集团化学试剂有限公司，批号:WF20050225）；氯化钡（上海化工专
科学校实验工厂生产）；Tyrode’s溶液所用试剂均为分析纯，临用时现配。

1.3 仪器 BL-420F生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；HW-400S恒温平滑肌槽（张家港市生物医学仪器厂）。

1.4 实验方法
1.4.1 山油柑叶去油水提液的制备取山油柑叶适量，加入8倍量水，加热提取挥发
油5 h，取提挥发油后的水提液浓缩至1 g/ml，加入2倍量的95%乙醇，室温放置过夜，醇沉后过滤，取滤液，回收乙醇后浓缩至3.2 g生药/ml的稠膏，4℃冰
箱放置备用。

用时恢复至室温，取适量稠膏，用蒸馏水配制成浓度分别为0.15，0.3，0.6，1.2，1.8 g生药/ml的溶液，离心后取上清液使用，作用于离体肠段的终浓度分别为1，2，4，8，12 mg生药/ml（相对应的实验组分别为A、B、C、
D、E组）。

1.4.2 离体小肠的制备［7］取禁食12 h后小鼠，脱颈椎致死，立即剖开腹腔，
找出胃幽门与十二指肠交界处，以此为起点，取十二指肠近端6～8 cm肠管置于
装有Tyrode溶液平皿中。

分离肠系膜，将肠管剪成0.5～1.0 cm小段，每鼠制备5～6段肠段备用。

小段肠管一端用线结扎，固定在玻璃通气钩上，置于盛有15
ml Tyrode溶液的浴槽中，另一端固定于张力换能器上与BL-420F生物信号采集
处理系统相连。

维持浴槽内Tyrode溶液温度（37±0.5）℃，并持续匀速通入空
气（约每分钟60个气泡）。

1.4.3 对小鼠正常离体肠平滑肌的影响取1.4.2方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30 min后，记录正常曲线10 min（计算1，5，10 min时间点张力，
取平均值作为正常值），然后加入0.1 ml的蒸馏水（空白对照组）或加入0.1 ml 不同浓度的受试药液（其终浓度分别为1，2，4，8，12mg生药/ml），记录加
入蒸馏水或受试药液后的曲线30min，观察小鼠离体肠段的收缩振幅。

分析加入
药液后（空白对照组为加蒸馏水后）1，5，10，15，20，25，30 min时间点的
振幅，按公式计算出张力抑制率。

张力抑制率（%）=（药前张力-药后张力）/给
药前张力×100%（负值表示兴奋，正值表示抑制）。

1.4.4 对Ach兴奋小鼠离体肠平滑肌的影响取1.4.2方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30min后，记录正常曲线10 min（计算1，5，10 min时间点张力，取平均值作为正常值），然后加入0.2%Ach 0.1 ml，1 min后加入0.1 ml蒸馏水
（对照组）或不同浓度的受试药液（其终浓度分别为4，8，12 mg生药/ml），
并记录曲线30 min，观察小鼠离体肠段的收缩振幅。

分析药后（对照组加蒸馏水后）1，5，10，15，20，25，30 min时间点的振幅，按公式计算出张力抑制率。

1.4.5 对BaCl2兴奋小鼠离体肠平滑肌的影响取1.4.2方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30 min后，记录正常曲线10 min（计算1，5，10 min时间点
张力，取平均值作为正常值），然后加入20%Ba－Cl20.1 ml，1 min后加入0.1 ml蒸馏水（对照组）或同体积不同浓度的受试药液（其终浓度分别为4，8，12 mg生药/ml），并记录曲线30 min，观察小鼠离体肠段的收缩振幅。

分析药后（对照组加蒸馏水后）1，5，10，15，20，25，30 min 时间点的振幅，按公式
计算出张力抑制率。

1.5 统计方法应用Prism5软件进行统计学分析，计量数据以表示，采用t检验，
P＜0.05具有显著性意义，P＜0.01具有非常显著性意义。

2 实验结果
2.1 对正常小肠收缩活动的影响见表1。

表1 不同浓度药物对小鼠正常离体肠平滑肌的影响（）注:与空白组比较，①P＜0.05，②P＜0.01组别n 张力抑制率（%）1 min 10 min 25 min 30 min 5 min 15 min 20 min空白组A组B组 C组 D组E组
1910101010104.18±8.1610.82±7.24①11.87±8.86②22.21±12.84②33.71±13 .27②27.99±9.89②6.98±10.4719.37±10.76②19.67±8.72②26.27±13.77②36. 00±16.59②36.39±11.91②10.85±12.8621.63±11.14①22.82±9.47②29.68±1
5.76②38.95±15.28②37.65±14.69②13.86±15.462
6.83±13.43①26.10±10.17
②35.21±19.98①36.75±15.10②37.02±18.53②17.51±18.2428.42±13.5026.8
0±12.72①34.15±19.94①35.71±15.95②36.74±18.88②18.47±18.0126.10±1 6.1232.18±12.9633.78±19.5034.16±16.51②36.76±19.57②22.44±19.3832.0
7±12.7735.45±9.0634.36±19.7333.46±15.63②36.62±20.33②
实验结果表明，不同浓度的山油柑叶去油水提液均能使肠肌张力降低，收缩幅度变小，与空白组比较，在给药后的15min内各浓度组均具有极显著作用（P＜0.05
或P＜0.01）；在1～12mg/ml剂量范围内，随着给药剂量增大，抑制效果越明显，抑制作用持续时间越长，显示明显的量效正相关性。

说明山油柑叶去油水提液对正常小肠收缩活动有明显抑制作用。

2.2 对Ach小鼠兴奋离体肠平滑肌的影响见表2。

表2 不同浓度药物对抗Ach兴奋小鼠小肠肌的作用研究（）注:与模型组比较，
①P＜0.01（下同）组别n张力抑制率（%）Ach 1 min 药后5min 药后20 min 药后10 min 药后15 min药后1 min药后25 min 药后30 min模型组C组 D组E组24121212-25.14±19.35-32.34±17.65①-27.08±16.96①-19.39±7.60①-24.54±21.5221.42±7.81①28.83±7.75①31.99±7.53①-
19.21±25.888.65±18.06①36.26±10.76①42.81±9.00①-
16.24±28.5421.77±23.78①38.77±9.04①42.21±7.49①-
13.02±29.2122.73±25.04①39.95±9.39①39.63±8.54①-
8.95±29.6224.84±26.42①40.46±11.17①41.19±9.47①-
5.69±30.1627.18±27.14①41.27±10.05①40.82±8.47①-
1.04±31.0028.88±28.61①41.89±10.15①4
2.74±8.13①
结果表明，在实验观察期间，Ach造成离体小肠兴奋的模型，表现为基线上升，
张力增加，抑制率均为负值；山油柑叶去油水提液各浓度均能使0.2%Ach兴奋小鼠肠肌的基线降低，张力减小，与模型组比较均具有非常显著性差异（P＜0.01）；且给药剂量越大，对抗Ach兴奋的作用也越强，在30 min观察期内一直保持明
显的抑制效果。

说明山油柑叶去油水提液具有对抗Ach兴奋小鼠小肠肌的作用。

2.3 对BaCl2小鼠兴奋离体肠平滑肌的影响见表3。

表3 不同浓度药物对抗BaCl2兴奋小鼠小肠肌的作用研究（）组别n张力抑制
率（%）BaCl21 min 药后5min 药后20 min药后10 min 药后15 min药后1 min药后25 min 药后30 min模型组C组 D组E组24121212-29.22±23.24-28.06±13.02-26.62±23.72-27.03±23.34-
24.94±21.1229.17±5.29①35.56±8.90①32.26±10.59①-
4.34±23.6739.16±6.21①48.72±1
5.74①43.67±15.86①0.61±28.1141.50±
6.5
6①47.32±13.80①43.94±18.97①-
4.67±17.0543.34±8.17①4
5.97±11.76①42.97±1
6.51①4.15±29.4943.76±11. 53①44.11±12.85①44.29±18.07①10.65±35.4744.42±11.31①43.14±15.72①46.01±19.95①8.78±31.953
7.56±10.15①43.42±15.60①47.46±19.58①
结果表明，在实验观察期间，BaCl2造成离体小肠兴奋的模型，表现为使基线上升，张力增加，15min之内抑制率均为负值；山油柑叶去油水提液各浓度均能使
BaCl2兴奋小鼠肠肌的基线降低，张力减小，与模型组比较具有非常显著性差异（P＜0.01）；给药剂量越大，对抗BaCl2兴奋的作用也越强，且在30 min观察期内一直保持明显的抑制效果。

说明山油柑叶去油水提液具有对抗BaCl2兴奋小
鼠小肠肌的作用。

3 讨论
本实验结果表明，在1～12 mg生药/ml剂量范围的山油柑去油水提取液对小鼠
正常离体肠的运动具有显著抑制作用，且随着剂量的递增，抑制效果越明显。

当乙酰胆碱（Ach）同平滑肌细胞膜上的M受体结合时，通过与cAMP为第二信使的细胞信号传导，导致胞内钙离子浓度升高，兴奋胃肠平滑肌，并产生强烈收缩运动［8］；氯化钡（BaCl2）则是直接作用在平滑肌细胞膜上而引起收缩，主要
是细胞膜结合胞外钙完成的［9］。

因此我们选用Ach和BaCl2诱导肠肌兴奋，
观察山油柑去油水提取液的作用，实验结果表明，终浓度分别为4，8，12 mg生
药/ml的水提液能明显拮抗0.2%Ach和20%BaCl2对离体小肠平滑肌的兴奋作用，使小肠紧张性下降。

由此推测，提取液有可能通过抑制M受体，拮抗平滑肌细胞
膜L型钙通道，调控胞质内钙浓度这一途径［10］，减少钙离子进入细胞内，从
而使平滑肌收缩活动减弱。

但具体的作用机制还有待深入研究。

参考文献
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