高效液相色谱法测定生发片中二苯乙烯苷的含量

高效液相色谱法测定生发片中二苯乙烯苷的含量
陈超凤;许振朝;李修善
【摘要】目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定生发片中二苯乙烯苷的含量的方法 .方法采用HPLC法;色谱柱:Kromasil C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-水(25 ∶75);检测波长:320 nm.结果二苯乙烯苷的线性范围为0.067～1.332 μg(r=0.9998).该方法二苯乙烯苷回收率为98.7%(RSD=0.87%).结论 HPLC法能将二苯乙烯苷较好地分离检测,准确、可靠,重现性好,可作为生发片质量检测方法 .【期刊名称】《广西医学》
【年(卷),期】2010(032)001
【总页数】2页(P110-111)
【关键词】生发片;二苯乙烯苷;高效液相色谱法;含量测定
【作者】陈超凤;许振朝;李修善
【作者单位】广西万寿堂药业有限公司技术开发中心,南宁市,530219;广西万寿堂药业有限公司技术开发中心,南宁市,530219;广西万寿堂药业有限公司技术开发中心,南宁市,530219
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
生发片为中药复方制剂，由何首乌、女贞子、山药、地黄、墨旱莲、茯苓等 12味中药组成，有滋补肝肾、益气养血、生发乌发的功效，用于肝肾不足、气血亏虚所
致的头发早白、脱落、斑秃、全秃等症。

收载于《部颁标准中药成方制剂》第十七册。

原标准中无含量测定项。

为了更好地控制本品的质量，本研究参照文献[1～3]，建立测定生发片中二苯乙烯苷的含量方法。

经方法学考察，本方法专属性强、灵敏度高，重现性好，可作为本品质量控制方法。

1 材料与方法
1.1 材料 Aglient 1100高效液相色谱仪(Aglient VWD检测器，HP二维化学工作站，Aglient 8543紫外分光光度计)。

二苯乙烯苷对照品(批号:0844-200003)购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯；生发片为市购品(山西仁源堂药业有限公司)。

1.2 方法
1.2.1 色谱条件:Kromasil C18柱(5μm，250 mm×4.6 mm)；流动相:乙腈 -水(25 ∶75)，流速:1 ml/min；柱温:25℃；检测波长:320 nm。

1.2.2 对照品溶液制备:精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加甲醇制成每 1 ml含
20μg的溶液。

1.2.3 供试品溶液制备:取本品约 0.5 g，精密称定，精密加入 50%乙醇溶液 20 ml，称定重量，加热回流30 min，取出，放冷至室温，再称定重量，用 50%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过。

1.2.4 阴性样品溶液的制备:按处方比例制备缺何首乌药材的阴性样品，依“1.2.3”项下制备阴性样品溶液。

2 结果
2.1 干扰试验将阴性样品溶液按拟定的色谱条件进样10μl，记录色谱图，结果见
图1。

在二苯乙烯苷的保留时间处，无其他成分干扰。

图1 对照品、样品及阴性样品色谱图
2.2 线性关系的考察精密称取二苯乙烯苷对照品，于棕色量瓶中用 50%乙醇配制
成66.6μg/ml的溶液。

分别吸取1 μl、2 μl、4 μl、10 μl、20 μl进样，以测得
的峰面积积分值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标作图，绘制标准曲线，计算得二苯乙烯苷的回归方程为:Y=3689.4X-41.0(r=0.9998)，表明二苯乙烯苷在 0.067～
1.332μg内具有良好的线性关系。

2.3 精密度试验精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液及供试品溶液各10μl，分别重复
进样 5次，测定峰面积积分值。

结果对照品溶液与供试品溶液中二苯乙烯苷的相
对标准偏差(RSD)分别为 0.28%、0.31%。

2.4 重复性试验精密称取同一批生发片样品 5份，按“1.2.3”项下的方法处理，
考察方法的重复性，供试品中二苯乙烯苷的含量平均为 0.2032 mg/片，RSD为0.84%。

2.5 稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于配制后 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h测定，结果二苯乙烯苷的峰面积积分值的 RSD为 1.17%。

供试品溶
液在 24 h内基本稳定。

2.6 回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号的生发片0.25 g，共 5份。

分别精密加入对照品溶液(浓度为75.40 μg/ml)2 ml，按“1.2.3”项下
制备供试液，分别测定，计算回收率。

结果平均回收率为98.7%，RSD为0.87%。

2.7 样品测定结果按照“1.2.3”项下的方法制备3批供试品溶液，精密吸取对照
品和供试品溶液各10μl，进样，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计
算含量，结果 3批样品中二苯乙烯苷的含量分别为 0.2112 mg/片、0.2054 mg/片、0.2121 mg/片。

3 讨论
3.1 流动相的选择本试验先后采用乙腈 -水不同比例22∶78、16∶84作为流动相测定，但二苯乙烯苷与其杂质峰均不能较好地分离[3]。

故参考《中国药典》
[1]2005年版一部“何首乌”含量测定项下流动相进行摸索，结果按正文拟定的色谱条件测定能将二苯乙烯苷与其他杂质峰较好地分离，故选用此流动相。

3.2 样品提取方法的选择试验中曾采用乙醇超声、75%乙醇超声提取等方法[3～6]，结果杂质干扰较大，提取率低，因而采用“1.2.3”项下供试液制备的方法提取，
所得图谱杂质干扰少，分离较好。

参考文献
【相关文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社，2005:122-123.
[2]盛静.HPLC测定血脂灵片中 2、3、5、4'-四羟二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量[J].中成药，2004，26(7):26-27.
[3]刘振国，宋志前.不同地区制何首乌中二苯乙烯苷含量测定及稳定性考察[J].中成药，2002，
24(9):684.
[4]李彤辉，闫便杰.HPLC法测定滋定生发片中 2、3、5、4'-四羟二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含
量[J].陕西中医，2005，26(1):75-76.
[5]陆蕴如，邓巧虹.何首乌及其制剂中 2、3、5、4'-四羟二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定研
究[J].北京中医药大学学报，1998，21(6):31-33.
[6]苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社，2003:546-547.。