脑心肌炎增强型绿色荧光蛋白嵌合病毒的构建

脑心肌炎增强型绿色荧光蛋白嵌合病毒的构建
徐超;杨晓炼;朱书
【期刊名称】《西北农业学报》
【年(卷),期】2024(33)2
【摘要】携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)的脑心肌炎(Encephalomyocarditis virus, EMCV)嵌合病毒是研究该病毒体内外
生物学特性的有力工具。

因此,本研究基于前期构建的巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)感染性克隆,在EMCV基因组2A蛋白序列之后插入EGFP基因片段,并将重组质粒转染BHK-21细胞,获得携带EGFP的嵌合病毒。

通
过荧光定量PCR(real-time PCR)、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay, IFA)及半数组织细胞感染量测定(Median tissue culture infective dose, TCID50)等方法对拯救病毒的基因组复制、蛋白表达及病毒粒子的感染性进行测定,结果证实嵌合病毒能够在BHK-21细胞上成功表达EGFP并产生完整的病毒粒子。

然而,相较于野生型亲本拯救病毒,嵌合病毒在BHK-21细胞上的复制能力降低,并且在连续传代后逐渐失去绿色荧光信号,表明嵌合病毒中EGFP基因的插入对EMCV
病毒粒子的组装释放具有不良影响,并在传代过程中逐渐累积导致EGFP功能丧失
的缺失和突变。

【总页数】7页(P218-224)
【作者】徐超;杨晓炼;朱书
【作者单位】浙江大学医学院附属第二医院临床研究中心;湖州市农业科技发展中心;浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
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