杞菊地黄丸中没食子酸的高效液相色谱电化学检测

科 技 创 新
２ ０ １ ４ 年 第２ ５ 期Ｉ 科技创 新 与应用
杞菊地黄丸中没食子酸的高效液相色谱电化学检测
索 志 荣 刘 如 沁 黄 爱 玲 张 敏 暇
（ 西南科技 大学分析测试 中心 ， 四川 绵 阳 ６ ２ １ ０ １ ０ ）
摘 要： 目的 ： 建 立 测 定杞 菊 地 黄 丸 中没食 子酸 的 高 效 液相 色谱 电化 学分析 方 法 ， 并 用 该 方 法测 定 杞 菊地 黄 丸 。方 法 ： 采 用 反 相 高 效 液 相 色谱 电 化 学检 测 法 ， 以Ｚ ｏ ｒ ｂ ａ ｘ Ｓ Ｂ — Ｃ （ １ ５ ０ ｍ ｍ￣ ４ ． ６ ｍ ｍ， ５ ． ０ ｍ） 为 色谱 柱 ； 甲醇一 ２ ％醋酸为流动相 ， 梯度 洗脱 ， 流 速 为 １ ． ０ ｍ Ｌ ‘ ｍ ｉ ｎ ； 检 测 电压 为 ０ ． ７ Ｖ， 柱温为 ３ Ｏ ℃。结果 ： 没 食 子酸 浓 度在 １ ５ ． ８ ｌ 一 ４ １ ． ７ ３ ｇ ・ ｍ Ｌ ～ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ２ ） ￣ 围 内线 性 关 手良好 ， － ？ － － ￣ 回 收 率（ ｎ ＝ ３ ） 分别为 ９ ８ ． １ ％（ Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｉ ． ６ ％） 。 结论 ： 方 法快 速 ， 准确 ， 可 用于杞 菊地 黄丸 的质 量 控 制 。 关 键词 ： 高效液 相 色谱 ； 电化 学检 测 ； 杞 菊地 黄 丸 ； 没食 子 酸 杞 菊 地黄 丸 （ 浓缩丸） 由枸杞 子 、 菊花 、 熟 地黄 、 山茱萸 （ 酒制 ） 、 牡 丹皮 、 山药、 茯苓 、 泽泻八 味药组成 ， 具有滋 肾养肝 的功效 ， 主要用于 肝肾阴亏 、 眩晕耳呜、 羞明畏光 、 迎风流泪、 视物昏花等症 。其主要成 分山茱萸中含有没食子酸Ⅲ ， 且研究表明没食子酸具有良好的抗氧化 性能日 。目前， 对酚酸类化合物没食子酸的分离检测方法有薄层色谱 法日 ， 毛细 管 电泳法 ， 高相液 相色 谱法 ， 紫外 分光 光度 法 等 。但对 杞 菊 地黄 丸 中没食 子 酸 的检测 未 见报 道 。文章 基 于 电化学 检测 器灵 敏 度高 、 选 择 性好 等 特性 １ ７ ］ ， 采 用 高效 液 相色 谱 电化 学 检￣ （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ — Ｅ Ｃ Ｄ １ 法， 对杞 菊地 黄 丸中没 食子 酸进 行 了分离 和测定 。 为评 价 和控制 杞菊 地 黄丸 的质 量提供 了依 据 。 １试剂 与仪器 试剂 ： 没食 子酸 对照 品（ 购 自ｓ ｉ ｇ ｍａ 公司 ） ， 纯度 为 ９ ９ ． ７ ％； 甲醇 为 Ｏ Ｌ ， 重 复 进 样 尉 投 艮丁 堀 伶明 ｒ 手伉 女 图 色谱纯 ； 醋酸为分析纯； 水为超纯水； 杞菊地黄丸 ： 芜湖张恒春药业有 限公 司 （ 国药 准字 Ｚ ３ ４ ０ ２ ０ １ ２ ８ ， 批号： １ ３ ０ ６ １ ３ １ 、 １ ２ ０ ８ ０ ９ １ ） 。 次， 进行测 定 ， 原 儿茶 酸 峰面 积积分 值 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ４ ％。 仪器 ： Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ６ ０型高效 液 相 色谱 仪 （ 美 国Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ 公司） ； Ｕ Ｐ Ｈ ４ ． ３重 复性 试验 型优普系列超纯水机（ 成都超纯科技有限公司） ； Ｋ Ｑ ５ ２ ０ ０型超声波清 精 密称 量杞 菊 地黄 丸 （ 批号 ： １ ３ ０ ６ １ ３ １ ） 粉末 约 ２ ｇ 共６ 份， 按“ ２ ． １ ” 洗器（ 昆山市超声仪器有限公司 ） ； 电子天平 （ Ｅ 京赛多利斯仪器系统 项操作制备供试品溶液后 ， 进行测定 ， 没食子酸含量的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ２ ． ９ ％。
的 １ ０
．
鲁 冀 ６ 图 ２ 没 食 子 … ￣ ｇ ， Ａ ｔ ｃ 杞 菊地 黄 丸 （ 批号 ： １ ３ ０ ６ １ ３ １ ） 的供试 品溶 液 在 ８ ｈ之 内每 隔 １ ｈ ２ ． １供试品溶液 进行 考察 ， 结果 没食 子 酸峰 面积 积分值 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ８ ％（ ｎ ＝ ９ ） 。 取 杞菊 地黄 丸 ４ ０ 丸， 在研 钵 中研 细 ， 过 ６号筛 后 ， 得 到 杞 菊地 黄 ４ ． ５加样 回收率试 验 丸粉 末样 品 。取 杞菊 地黄 丸粉末 ２ ｇ ， 精 确称量 ， 置于 １ ０ ｍ Ｌ 试管中， 加 精 密称 量 杞 菊地 黄 丸 （ 批号 ： １ ３ ０ ６ １ ３ １ ） 粉末 约 １ ． ０ ｇ ， 共 ３份 ， 每 份 入适 量 甲醇 ， 超 声提 取 ２次 ， 每次 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 滤入 ２ ５ ｍ Ｌ容 量 瓶 中 ， 再 用 分别准确加入 １ ． ０ ｍ Ｌ没食子酸储备液 ， 按“ ２ ． １ ” 项下方法制备供试品 甲醇 定容 至刻 度 ， 摇匀。 取适 量用 ０ ． ４ ５ ￣ ｍ微孑 Ｌ 滤膜 滤过 ， 即得 杞菊 地 溶液 后 ， 进行 测定 。没食 子酸 的平 均 加样 回收率 （ ｎ ： ３ ） 为９ ８ ． ７ ％； Ｒ Ｓ Ｄ 黄丸 供试 品溶 液 。 为２ ． ３ ％。 ２ ． ２对 照品溶 液 ４ ． ６样 品分析 精密 称取 没食 子酸 对照 品 ５ ． ２ ４ ｍ ｇ 于２ ５ ｍ Ｌ容 量瓶 中 ，用 甲醇溶 按“ ２ ． １ ” 项下操作制备供试 品溶液 ， 在“ ３ ” 项 的色谱 条件下进样 解并 定容 ， 摇匀 ， 配 得没 食 子酸 浓度 为 ０ ． ２ ｌ ｎ ｉ ｇ ・ ｍ Ｌ － ｔ 的对照 品溶 液 ， 作 １ ０ ． ０ １ ｘ Ｌ ， 对其进行检测 ， 用标准曲线法 以峰面积计算含量。结果批号 为储备液 ， 其它不同浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。 １ ３ ０ ６ １ ３ １ 和１ ２ ０ ８ ０ ９ １中没食 子 酸含 量分 别 为 ０ ． ２ ６ ８ ｍ ｇ ・ ｇ 和 Ｏ ． ２ ７ ３ ｍ ｇ ・ ３色谱 条 件 Ｚ ｏ ｒ ｂ ａ ｘ Ｓ Ｂ — Ｃ １ ８ （ １ ５ ０ ａ ｒ ｍ￣ ４ ． ６ ｍ ｍ ， ５ ． ０ ｍ） 色谱柱ｆ 美 国） ； 流动相 ： 甲 ５讨论 醇一 ２ ％醋酸 ， 梯度洗脱 ， 其时间程序为 ０ —３ ０ —３ ２ —３ ７ —４ Ｏ 一５ Ｏ ｍ ｉ ｎ ， ５ ． １提取 条件 的选 择 甲醇体积分数相应为 ５ ． ０ ％一３ ５ ． ０ ９ 一９ ０ ． ０ ％ 一９ ０ ． ０ ％一５ ． ０ ％一５ ． ０ ％， 流 分别 考察 了水 ， ２ ０ ％甲醇 ， ４ ０ ％甲醇 ， ６ ０ ％甲醇 ， ８ ０ ％甲醇 及 甲醇 对 速： １ ． Ｏ ｍ Ｌ ・ ｍ ｉ ｎ ； 电化 学检 测器 ： 安培检 测 ， 电压 ０ ． ７ Ｖ， 柱温： ３ ０ ℃。 没 食 提取 效率 的 影响 。结 果显 示 ： 用 甲醇 作为 溶剂 提取 时 ， 没食 子 酸 的 提 子酸 的保 留时 间为 ３ ． ５ ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。色谱 图见图 １ 。 取率最 高 。 ４ 方法 学考 察与样 品分析 ５ ． ２工作 电压 的选 择 ４ ． １线性 关 系考察 以对 照 品储 备液 配制 一 定浓 度 的没食 子 酸待 测 液 ， 在… ３ ’ 项 条件 精密量取“ ２ ． ２ ” 项所配的没食子酸储备液一定体积于量瓶中， 用 下 ， 进样 ７ ． ０ ￣ Ｌ ， 考察 检 测 电位 范 围为 ： ０ ． １ — ０ ． ９ Ｖ 。 以没食 子 酸 在 Ｅ Ｃ Ｄ 甲醇 稀 释 ， 配成 没食 子 酸浓 度 分 别 为 ４ ． ２ ， ８ ． ４ ， １ ６ ． ８ ， ２ ５ ． ２ ， ３ ３ ． ６ ， ４ ２ ． ０ ｇ ・ 上的 响应 峰 面积对 电极 的工 作 电压作 图 ， 得到 其 流体 动力 学伏 安 图 ， 如图 ２ 。由图 可 以看 出 ： 当 电位高 于 ０ ． ７ Ｖ时 ， 没 食 子 酸 的 电化 学 响 应 出现 一个 平 台 ， 继 续 提高 电位 ， 虽然 峰 电流继 续增 加 ， 但 噪音 也 明 显增 加 。故 选 择 检 测 电位 为 ０ ． ７ Ｖ（ Ｖ Ｓ ． ａ ｓ ／ Ａ ｇ Ｃ １ ） 。