46 微生物的分离和培养 导学案

高三一轮复习案四十六微生物的分离和培养
班级姓名
【自学质疑】
④紫外线消毒等100Kpa、121℃）
三、微生物培养技术（以大肠杆菌为例）
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：
（1）制备过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
平板制作的方法及注意事项
a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：___________________。

b.甲、乙、丙中的灭菌方法是__________。

c.丁中的操作需要等待________后才能进行。

【思考】平板冷凝后为什么要将平板倒置？
2．纯化接种
纯化接种：是指在______条件下将微生物接入培养基的操作过程，最常用的是___________和_________________。

主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。

（1）平板划线法：是通过接种环在_______________表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步____________到培养基的表面,得到__________。

操作步骤：准备接种→_________→试管口灭菌→挑取少许菌种，塞上棉塞→划线接种（如下图）→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。

培养基表面平行或分区划线
注意事项：①取菌种前第一次灼烧接种环的目的：消灭接种环上的微生物，避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
②除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环目的：使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落
③取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行目的：防止高温杀死菌种
④最后灼烧接种环的目的：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？
(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？
(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？
【迁移应用】
1．做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（）
A. 高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖
B. 倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上
C. 为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D. 用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
2.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次是（）
①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
3.关于平板划线操作正确的是（）
A．使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞
C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放在培养箱中
4.高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。

研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

请据图回答下列问题：
(1)Ⅰ号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入琼脂作为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以淀粉作为唯一碳源。

(2)配制固体培养基的基本步骤是()
A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌
B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
(3)溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地搅拌，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。

对培养基灭菌的方法一般为高压蒸汽灭菌。

(4)过程①是稀释，过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法
5.牛奶是微生物培养的良好培养基，牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图1所示操作。

用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次。

请回答下列有关问题：
(1)巴氏消毒的方法是70～75 ℃煮30分钟，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。

(2)取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是图2中的B。

(3)图1中所示方法为稀释涂布平板法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。

若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为3.4×106个，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小(填“偏大”或“偏
小”)，原因是个别菌落可能是由2个或多个细菌形成的。

(4)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？稀释次数减少。