4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响

4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响
周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇
【摘要】目的通过研究固定液对冷冻切片质量的影响,筛选出理想的固定液,为寻
找新型固定液提供新思路,从而提高快速冷冻切片成片质量.方法收集新鲜鸭肝组织30例,冷冻切片取材后用不同的固定液进行固定,然后进行HE染色,显微镜观察.结
果经乙醚酒精固定的鸭肝组织和细胞结构清晰,核浆颜色对比度适宜,染色鲜艳.结
论乙醚酒精最适宜用于快速冷冻切片的固定,进行HE染色.
【期刊名称】《中国医学工程》
【年(卷),期】2016(024)009
【总页数】2页(P32-33)
【关键词】固定液;快速冷冻切片;HE染色
【作者】周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇
【作者单位】湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000
【正文语种】中文
【中图分类】R818.02
冷冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法[1]。

冷冻切片是一种最省时最快速的制片方法，因此主要用于临床手术病理诊断。

其原理是：冷冻组织变硬代替石蜡做浸蜡。

将组织固定在标本拖上短时间内冻好进行切片。

术中确诊病变性质，决定手术范围，因此作出高质量的冷冻切片至关重要[2]。

冷冻切片染色前需要进行组织的固定，组织的固定是冷冻切片制造的一个非
常重要的环节，本文主要选择了4种固定液对其进行研究，筛选出一种好的固定液。

1 材料与方法
1.1 材料
选用新鲜的鸭肝组织30例进行制片。

1.2 试剂
4种固定液：①95%酒精；②AF液（乙醇，甲醛）；③AAF液（乙醇，乙酸，中性甲醛）；④乙醚酒精（乙醚：酒精=1：1）。

HE染色试剂：①苏木素；②尹红；
③碳酸锂；④无水酒精。

1.3 方法
1.3.1 取材及切片取材大小2cm×2cm，厚0.2～0.5cm的新鲜鸭肝组织30例，
用普通胶水进行包埋后用德国莱卡CM1900恒温冷冻切片机和日本Feather一次性刀片在-18℃的温度下进行切片，厚度为5 μm，各切10张。

1.3.2 固定及染色切片后用以上4种固定液各固定30 s～1min，苏木素染色过程
需加热进行染色（65℃恒温水浴箱加热）2min，染色时间为2～4min，水洗，盐酸分化5 s，碳酸锂水中返蓝20 s，水洗，伊红10 s，水洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

2 结果
结果的判断按照组织结构清晰度、细胞收缩度，细胞核染色、细胞浆染色以及核浆的对比度进行比较，具体见表1。

实验结果显示：95%酒精结构较清晰，但细胞收缩明显，细胞核和细胞浆的染色淡，并且核浆对比度欠佳。

AF液组织结构度稍差，
轻度的收缩，细胞核和细胞质染色较差，并且对比度亦欠佳。

AAF液的固定效果与AF液基本一致，细胞结果较清晰，细胞核和细胞质染色不理想，对比度亦不理想。

而乙醚酒精固定后组织结构清晰，细胞核和胞浆的染色鲜艳，并且对比度非常好。

表1 4种固定液的固定效果对比固定液组织结构清晰度核浆对比细胞收缩度细胞核染色细胞浆染色95%酒精较清晰明显收缩稍淡稍淡稍差AF液稍差轻微收缩稍淡稍淡稍差AAF液稍差轻微收缩稍淡稍淡稍差乙醚酒精清晰正常鲜艳鲜艳良好
3 讨论
快速冷冻切片的制作是为了让病理医生在短时间内做出准确的判断，为临床医生提供快速、可靠、准确的病理结果，协助临床医生确定手术方案，手术方式及范围，因此一张高质量的快速冷冻切片的制作非常重要。

快速冷冻切片地制造包括快速切片，固定和染色3个环节。

由于组织固定液可以影响细胞形态的改变，因此选择一种既可以快速固定，又可以使得组织结构保持完整的固定液显得至关重要。

用于组织固定的固定液有许多种，95%的酒精能除去切片上的水份，保持完整的组织结构，但它使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解[3]，且细胞收缩明显，细胞核和细胞浆的染色淡，并且核浆对比度欠佳，因此95%酒精不是理想的固定液。

AF 液组织结构度稍差染色欠佳，细胞核与细胞质的对比度欠佳。

AAF液与AF液效果基本一致，两者均不是理想的固定液。

乙醚酒精固定后组织结构清晰，细胞核和胞浆染色鲜艳，并且对比度非常好，由此笔者认为乙醚酒精是一种理想的固定液[4-5]。

参考文献
[1]许平,王筱璨,陈奎生,等.快速冰冻切片制备方法的改进[J].郑州大学学报(医学版),2010,45(2):241-243.
[2]李建红,石天峰.冰冻切片制作方法改进与探讨[J].长治医学院学
报,2007,21(4):305-306
[3]谢松松,王菊,王宝峰,等.不同固定方法对冰冻切片的间接免疫荧光结果的影响[J].农垦医学,2009,31(4):298-300.
[4]董愉,梁英杰,吴惠群,等.不同固定液对不同组织冷冻切片HE染色效果的探讨[J].临床医学工程,2011,18(10):1584-1585.
[5]徐云生,倪开志.6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响[J].中国实用医药,2011,6(35):47-48.。