依达拉奉与清胰汤联用对SAP大鼠保护作用的实验研究

依达拉奉与清胰汤联用对SAP大鼠保护作用的实验研究
张仪娜;张艺川
【摘要】目的探讨依达拉奉与清胰汤联用对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠保护作用.方法将150只健康SD大鼠随机分为假手术组、SAP组和联合治疗组(联合组).建立SAP动物模型前,SAP组尾静脉注射同体积生理盐水,联合组给予依达拉奉;联合组术后予清胰汤灌胃,1次/12 h,连用1 w.术后1 w,比较3组大鼠胰腺组织病理评分、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、淀粉酶、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平和腹水量.结果联合组腹水量及胰腺组织病理评分均明显低于SAP组(P＜0.05);SAP组、联合组TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA及cTnT水平均明显高于假手术组,而SOD水平则明显低于假手术组(P ＜0.05);联合组TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA、SOD及cTnT水平均明显优于SAP组(P＜0.05).结论依达拉奉与清胰汤联用能够减少TNF-α的生成,从而抑制炎症反应,并有效清除氧自由基,对SAP大鼠胰腺组织及心脑等重要器官起到保护作用.【期刊名称】《西南国防医药》
【年(卷),期】2013(023)008
【总页数】3页(P820-822)
【关键词】依达拉奉;清胰汤;重症急性胰腺炎;保护;大鼠
【作者】张仪娜;张艺川
【作者单位】610500,成都,成都医学院第一附属医院药剂科;610500,成都,成都医学院第一附属医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R657.51
急性胰腺炎作为临床消化科常见疾病之一，是因胰腺内胰酶在机体多种因素诱发下异常激活，消化自身胰腺组织，引起胰腺水肿、出血乃至坏死的一类疾病，严重者可进一步诱发腹腔感染、感染性休克及多器官功能衰竭，临床死亡率极高，称为重症急性胰腺炎(SAP)〔1〕。

研究显示，SAP发生、发展关键在于大量氧自由基对
于胰腺及周围组织损伤〔2-3〕，如何降低胰腺及周围组织损伤成为临床医师们关注的重点。

笔者结合自己多年的临床工作经验，对依达拉奉与清胰汤联用能否对SAP大鼠起到保护作用进行探讨，以期为治疗急性胰腺炎提供临床依据。

1 材料与方法
1.1 实验动物 150只SD大鼠由成都医学院实验动物中心提供，合格证号为SYXK 黑2008004，雌雄各75只动物，体重为220～275(240.5±5.6)g，级别为清洁级。

采用随机数字表法分为3组，即假手术组、SAP组、联合治疗组(联合组)，每组各50只；3组大鼠年龄、体重及饲养条件组间比较无显著差异(P>0.05)。

1.2 实验仪器与试剂索福Biofuge® Stratos全能台式高速冷冻离心机(美国Thermo Fisher公司)；丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)均由南京建成公司所提供，牛黄胆酸钠由美国Sigma公司提供，肿瘤坏死
因子α(TNF-α)、IL-6及淀粉酶ELISA试剂盒由武汉博士德生物有限公司提供。

1.3 SAP动物模型建立及处理方法大鼠实验前禁食12 h，术前1 h联合组大鼠尾
静脉注射依达拉奉(国药准字H20031341，先声药业有限公司)5 mg/kg，假手术
组和SAP组尾静脉注射同体积生理盐水。

SAP组和联合组大鼠腹腔注射麻醉后，开腹探查胆管，注射器针刺进入十二指肠穿刺胆管，推注5%牛黄胆酸钠1 ml/kg，
以胰腺颜色转黑、肿胀为造模成功标准；假手术组仅开腹、翻动肠管，不行其他操作。

术后联合组大鼠每12 h予清胰汤灌胃1次，连用1 w。

清胰汤方剂组分包括：柴胡20 g，杭白芍20 g，黄芩12 g，木香15 g，元胡15 g，大黄15 g及芒硝15 g。

1剂/d，水煎取汁200 ml，分4次从胃管注入。

1.4 检测指标 cTnT定量测定：仪器为南京生产的DG3022酶标仪，采用一步夹心酶联免疫吸附分析法，cTnT试剂盒及试纸条均由德国宝灵曼(Boehringer Mannheim)公司提供。

标本选取及病理学观察：在3组模型制备完成的1 w处死实验大鼠，并快速切取其胰腺组织，进行固定、包埋及HE染色制片，每张切片随机取10个高倍视野观察，采用Kusske法进行病理评分〔4〕，对水肿、炎症和
出血以及坏死的程度按0～4分进行评估，计算总分；从心脏取血4～6 ml，离心取血清1～1.5 ml，采取ELISA法进行检测TNF-α、IL-6及淀粉酶水平，严格按
照试剂盒说明进行操作；用装有适量肝素的5 ml一次性注射器，将腹水迅速吸至细胞离心管中，立即摇匀以防凝集。

将采集的腹水以1200 r/min离心7 min，小心取出上清，即为纯净的大鼠腹水，将其采集放于试管内，采用称重法测量腹水含量；MDA、SOD检测分别采用硫代巴比妥酸比色分析法和黄嘌呤氧化酶法。

1.5 统计学处理应用SPSS 11.5统计分析软件包进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验，
P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 3组大鼠腹水量及组织病理评分比较 SAP组、联合组腹水量和胰腺组织病理评分均明显高于假手术组(P<0.05)；而联合组大鼠腹水量和胰腺组织病理评分均明
显低于SAP组(P<0.05，表1)。

3组的胰腺组织变化见图1。

2.2 3组TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA、SOD及cTnT水平比较 SAP组、联合组TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA及cTnT水平均明显高于假手术组，而SOD水平则
明显低于假手术组(P<0.05)；同时联合组大鼠TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA、SOD及cTnT水平均明显优于SAP组(P<0.05)，见表2。

表1 3组腹水量及胰腺组织病理评分比较(n=50)组别腹水量(ml)组织病理评分(分)假手术组0.64±0.120SAP组5.53±1.68① 11.47±2.10① 联合组
3.85±1.24①②8.32±1.45①②
注：与假手术组比较，①P<0.05；与SAP组比较，②P<0.05
图1 3组胰腺组织病理切片(HE ×200)A：假手术组；B：SAP组；C：联合组
表2 3组大鼠TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA及SOD水平水平比较(n=50)组别TNF-α(ng/L)IL-6(ng/L)AMY(IU/L)MDA(mol/kg)SOD(kU/kg)cTnT(ng/ml)假手术组39.4±2.9195.4±6.2976.4± 97.28.8±1.229 300±25000.10±0.02SAP组108.3±14.6①572.3±16.6①8952.3±342.6①35.0±3.8①
7000±800①2.43±0.36①联合组
65.5±12.3①②402.5±15.3①②6845.5±1440.3①②24.6±2.3①②15
000±1900①②1.29±0.33①②
注：与假手术组比较，①P<0.05；与SAP组比较，②P<0.05
3 讨论
SAP发病机制至今还未完全阐明，大多数学者认为与炎性介质水平异常改变、微循环严重障碍及缺血再灌注损伤密切相关，而氧自由基被认为在疾病损伤进展过程中发挥着关键作用。

已有研究证实，胰酶异常激活后，胰腺局部炎症细胞聚集诱发活性氧大量释放，并与相应产生的炎性介质进一步激活MAPK和NF-κB通路级联反应，最终导致全身炎症反应综合征及多器官功能障碍综合征等〔5〕；超过25%急性胰腺炎患者可转为SAP，进而出现肺、肾、心、脑等多器官功能障碍，危及生命安全。

本研究结果显示，SAP组、联合组腹水量及胰腺组织病理评分均明显高于假手术
组(P<0.05)，而联合组腹水量及组织病理评分均明显低于SAP组(P<0.05)；SAP 组、联合组大鼠TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA及cTnT水平均明显高于假手术组，而SOD水平则明显低于假手术组(P<0.05)；同时联合组大鼠TNF-α、IL-6、淀粉酶、MDA、SOD及cTnT水平均明显优于SAP组(P<0.05)。

由此推断，临床中
依达拉奉联合清胰汤能够对SAP大鼠胰腺组织起到保护作用。

依达拉奉作为一种
新型化学合成氧自由基清除剂，其作用原理主要为减少脂质氧自由基产生及后续细胞膜氧自由基反应，研究证实其对于减轻胰腺炎症反应及组织损伤作用确切〔6〕。

中医认为SAP治疗应疏肝通里，理气攻下。

清胰汤是中医急性胰腺炎治疗经典方
剂之一，具有解毒化瘀、理气清肝之功效，能够显著降低血中炎性介质及淀粉酶水平。

方剂组分中芒硝可留存于肠腔内形成高渗环境，刺激肠蠕动以及促进腹腔积液吸收作用明显。

而且张桂信等〔7〕研究也表明，清胰汤能够有效降低SAP大鼠的胰腺腺泡细胞凋亡，对胰腺组织起到一定的保护作用。

两者联用后，依达拉奉作为氧自由基清除剂，抑制了氧自由基的活性，减轻了其对器官组织的损害程度。

加用清胰汤能够显著降低血中炎性介质及淀粉酶水平，可进一步保护胰腺组织，提高疗效。

综上所述，依达拉奉与清胰汤联用对于SAP大鼠胰腺组织及心脑等重要器官保护
作用确切，能够有效降低炎性介质及氧自由基水平。

【参考文献】
〔1〕王小红,沈云志,黄中伟.依达拉奉对重症急性胰腺炎大鼠脑损伤保护作用的试验研究[J].新医学,2009,40(6):361-362.
〔2〕卢明军,毛燕飞,张传青,等.依达拉奉对急性重症胰腺炎大鼠心肌损伤保护作用的研究[J].实用医学杂志,2011,27(20):3662-3663.
〔3〕陈都,陆士奇,李军根,等.急性胰腺炎导致多器官功能障碍综合征的早期危险因素研究[J].中国急救医学,2011,31(10):77-78.
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Gastroenterol,2007,13(5):1966-1969.
〔5〕张兴文,王湘英,肖彦,等.清胰汤对急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜机械屏障的保护作用[J].中华胰腺病杂志,2010,10(4):289-290.
〔6〕龚平,张彧,宋政军.依达拉奉对大鼠重症急性胰腺炎的保护作用[J].世界华人消化杂志,2009,17(1):31-35.
〔7〕张桂信,陈海龙,曲淑贤,等.清胰汤对大鼠急性重症胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡的影响[J].中国中西医结合外科杂志,2008,14(1):38-39.。