不同成熟阶段_不同来源的人类卵子冷冻后发育潜能的比较_卢兴宏

关键词 卵子 冷冻 发育潜能
卵子冷冻技术在拓宽目前辅助生殖技术服务的 范围和保存女性生育能力方面有重要的价值。对于卵 巢功能早衰、遗传异常、多次常规体外受精技术失败 患者来说，卵子捐赠是解决生育问题的有效手段。而 卵子捐赠的广泛应用，须基于卵子冷冻技术。自 !+## 年 QVOOVGJLHC 首次冷冻小鼠卵子并获得新生小鼠 以来，人们对卵子冷冻进行了大量的研究，并取得了 一定的进展 ) ! * 。但是到目前为止，卵子冷冻技术还不成 熟，人们对冷冻卵子的成熟阶段、冷冻程序、冷冻剂等 方面还不能全面了解。本研究通过不同成熟阶段、不 同来源的人类卵子冷冻后，对其体外成熟率、解冻存 活率、体外受精率与卵裂率等的观察，比较其发育潜 能的变化，为选择卵子冷冻最佳成熟阶段和供卵来源 提供试验依据。
中胞浆透亮均匀、胞膜连续平滑的为优质卵子。
$H !H % 未成熟卵子的体外成熟 将取得的未成熟卵 子放于培养液在培养箱中培养 %" + (R 7，观察有无 CD 泡破裂及极体排出。培养液用 S$’’，添加 TBO、OIC、 OFC、U!、丙酮酸、- J 谷氨酰氨及青霉素和链霉素。 $H !H ( 成熟卵子的体外受精及胚胎的观察 将 % 组 的优质 I!卵子行 EFBE，所用的精子来自健康男士捐 献的正常精液。EFBE 后 $# + $R 7，观察受精情况；第 !、 % 天观察卵裂情况并进行胚胎评分。 $H !H * 统计学方法 采用 T=873< 确切概率法。 ! 结果
发育潜能的比较
例[P \
来源 CD 卵子数 存活卵子数 成熟卵子数 受精卵子数 卵裂卵子数
自然周期
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$" [&$H ( \ * [*"H " \ h $ [!*H " \ $ [$"" \
孕期
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促排周期
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不同成熟阶段、不同来源的人类卵子冷冻后 发育潜能的比较
卢兴宏 黄艳仪 龙晓林 杜红姿 许海燕 刘见桥 石 宇 黄玉玲
摘 要 目的：探索卵子冷冻的成熟阶段及来源。方法：将 !(" 个不同来源的生发卵泡期（JX 期）人类卵子分为 " 组，未冷冻组，体外培养至成熟阶段（C!期），行单精子胞浆内注射（3/,-.D8,412.0U3D 01:-U 3/‘:D,34/，V\KV）；C!期冷 冻组，体外成熟至 C!期，然后将 C!期卵子进行冷冻，解冻后将存活的卵子行 V\KV；JX 期冷冻组，将 JX 期卵子进 行冷冻，解冻后体外培养至 C!期，然后再行 V\KV。观察解冻后卵子存活情况、体外成熟情况、受精情况及胚胎发育 情况。结果：@ ! A 冷冻对卵子具有一定程度的损伤，但 JX 期冷冻组的存活率、受精率显著高于 C!期冷冻组。@ % A 促 排周期来源的卵子的体外成熟率高于孕期及自然周期来源的卵子，孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育 潜能。结论：在 JX 期进行冷冻可降低冷冻对卵子的伤害；孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育潜能。
CD 期冷冻组 (% [ &$H ! \ !! [ *$H ! \ R [ (!H $ \ # [ &*H " \ * [ R%H % \
( 值 f "H "* f "H "*
f "H "*" f "H "*";未冷冻组与 CD 期冷冻组比较
表 ! 自然周期、孕期、促排周期未成熟卵子冷冻后
未冷冻组、I!期冷冻组、CD 期冷冻组以及自然 周期组、促排周期组、孕期组的体外成熟率、解冻存活
率、受精率、正常受精率、卵裂率分别如表 $ 和表 ! 所 示。CD 期冷冻组的解冻存活率和体外成率要显著高 于 I!期冷冻组，但均低于未冷冻组。孕期来源的 CD 期卵子解冻后也有一定程度的发育潜能。
表 $ 未冷冻组、!期冷冻组、C D 期冷冻组间发育
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潜能的比较
例[P \
组别 存活卵子数 成熟卵子数 受精卵子数 正常受精率 卵裂卵子数
未冷冻组
J
!R [&"H " \ $& [#RH " \ $* [RRH ! \ $% [R#H & \
I!期冷冻组 !" [*$H % \ %’ [&%H # \ * [%%H % \ ! [("H " \ $ [*"H " \
!< % 方法 !< %< ! 未成熟卵子的获得 自然周期及孕期 JX 期
实用医学杂志 !""# 年第 !! 卷第 $! 期
$%&’
卵子的获取：开腹后在直视下用 ($ ) ! 注射针穿刺直径 * + $" ,, 的窦卵泡，抽取卵泡液，注射器装有 $ ,%&. 的磷酸平衡盐溶液 （/0123445 6758679:3 20;;3<3/ 8510:=5>，?@AB）。促排周期 CD 期卵子的获取：对于因 男性不孕因素行 EFBE 的妇女，用常规长方案进行促排 卵后G 在超声介导下用 $#C 取卵针进行穿刺取卵。 $H !H ! 卵子的冷冻和解冻 将 I!期冷冻组的 I! 卵子和 CD 期冷冻组的 CD 期卵子慢速冷冻进行冷 冻，用快速解冻法进行解冻。冷冻液和解冻液均以
?@AB 作 为 基 质 ， 用 不 同 浓 度 的 $， ! J 丙 二 醇 （6<56K13>3 L1K451，@MNO）和蔗糖以及 $*P 人血清蛋白 （OQB）为保护剂。判断解冻后卵子死亡的标准：胞浆变 黑或溢出、胞膜皱缩或断裂、卵周不清、透明带断裂，
出现上述任何一项，即为卵子死亡。否则即为存活。其
及生殖中心因男性不孕因素行单精子胞浆内注射 @ V\KV A 术患者（促排周期）自愿捐献的未成熟卵子。病 人年龄 %% e ?% 岁。精子来自在本生殖中心行体外受精 B 胚胎移植 @ VXWYPO A 术的健康男士捐献的正常精 液。共 !(" 个生发卵泡期 @ JX A 期卵子，其中，来源于自 然周期 "! 个，孕期 $& 个，促排周期 ?% 个，随机分为 " 组，未冷冻组：# f ?&，体外培养至成熟阶段 @ C!期 A ， 进行 V\KV；C!期冷冻组：# f ("，体外成熟至 C!期， 然后将 C!期卵子进行冷冻，解冻后将存活的卵子行 V\KV；JX 期冷冻组：# f ’&，将 JX 期卵子进行冷冻，解 冻后体外培养至 C!期，然后再行 V\KV。各组间卵子的 来源无明显差异。