龙眼胚性愈伤组织DlHOS1基因克隆与表达分析
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ＬＩＮ Ｙｕｌｉｎｇ ， ＬＡＩ Ｚｈｏｎｇｘｉｏｎｇ
１ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｊｉａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３５０００２，Ｃｈｉｎａ ２ Ｆｒｕｉｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｒｕｊｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３５００１３，Ｃｈｉｎａ
迫 诱 导 。总 体 上 低 温 下 其 表 达 水 平 上 升 。研 究 结 果 认 为 ，ＤＩＨＯＳ１参 与 龙 眼抗 寒 和 低 温 胁 迫 过 程克 隆 ；密 码 子 使 用 偏 爱性 ；ｑＰＣＲ
中 图分 类号 ￥６６７．２
文 献 标 识 码 Ａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ０Ｓ１ ｉｎ ｃｏｌｄ ｓｔｒｅｓｓ ｏｆ Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ— ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｄ．
１ｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ＨＯＳ１ ｇｅｎｅ （ＤＩＨＯＳ１），ａｎｄ ｃｏｄｏｎ ｂｉａｓ，ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒ ｎ ｏｆ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｄ ＩＨ ＯＳ１ ｉｎ Ｅｍ ｂｒｙｏｇｅｎｉｃ Ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｄｉｍ ｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ．
ＸＩＡＯ Ｘｉａｏｅ ，ＸＵ Ｘｉａｏｐｉｎｇ ，ＬＩ Ｊｉａｍｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｚｉｈａｏ ，ＬＡＩ Ｒｕｉｌｉａｎ ，
热 带作 物 学 报 ２０１８，３９（２）：２９３—２９９ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ
龙 眼胚性愈伤 组织 ＤＩＨＯＳ１基 因克隆与表达分 析
肖小 娥 ，徐 小 萍 ，李佳 蜜 ，张梓 浩 ，赖 瑞 联 ，一，林 玉玲 ，赖 钟 雄 件
１ 福 建农 林 大学 园 艺植 物 生物 工程研 究所 ，福建福 州 ３５０００２ ２ 福 建省 农业 科 学 院果树研 究所 ．福 建福 州 ３５００１３
ＪＤ坍 ＤＪｓＪ基 因 序 列 全 长 ３ ５７７ ｂｐ，包 含 ＯＲＦ ３ ０００ ｂｐ，编 码 ９９９个 氨 基 酸 ，５’ＵＴＲ 和 ３’ＵＴＲ 分 别 １６２ ｂｐ和
４１５ ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登 录号 ：ＫＹ９９０４０４）；密 码 子 使 用 偏 爱 性 分 析 表 明 ，Ｄ埘 ＯＳ１密 码 子 的 选 择 偏 爱 性 较 弱 ，偏 爱
Ｄ ｜ｏＳ１ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｕ１１ １ｅｎｇｔｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＤｔＨｏｓｌ ｗａｓ ３ ５７７ ｂｐ．ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎ ０ＲＦ ３ ０ｏｏ ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ ９９９ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ５’ ＵＴＲ ａｎｄ ３’ ＵＴＲ ｗａｓ １６２ ｂｐ ａｎｄ ４１５ ｂｐ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｆ ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＹ９９０４０４）．Ｔ ｈ ｅ ｃｏｄｏｎ ｂｉａｓ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｄ坍 ０ＳＪ ｗａｓ ｌＯＷ．ａｎｄ ｉｔ ｂｉａｓｅｄ ｔｏｗａｒｄ ｔｈｅ ｓｙｎｏｎｙｍｏｕｓ ｃｏｄｏｎｓ ｗｉｔｈ Ａ ａｎｄ Ｔ ａｔ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｃｏｄｏｎ ｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｄ坍 ＤＳ１ ｗａｓ ａｎ ｕｎｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｍｕｈｉｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｔ ｈ ｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ ａｎｄ ｓｔｒａｎｄ．Ｂｅｓｉｄｅｓ．Ｄ珏ｉＯｓｌ ｓｈａｒｅｄ ａ ｖｅｒ ｙ ｃｌｏｓｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｃｉｔｒｕｓ． ｑＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｄ埘 ＯＳ１ ｗａｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｕＤ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ａｔ ｌＯＷ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ＤｌｔｔＯＳ１ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃｏｌｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｌｏｎｇａｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ— ＤＩＨＯＳ１；ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ；ｃｏｄｏｎ ｂｉａｓ；Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｆ ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｄｏｉ １０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１０００—２５６１．２０１８．０２．０１３
摘 要 以 龙 眼 胚 性 愈 伤 组 织 为 材 料 ， 采 用 ＲＴ—ＰＣＲ 和 ＲＡＣＥ—ＰＣＲ 技 术 对 植 物 抗 寒 重 要 调 控 因 子 ＨＯＳ１
（ＤＩＨＯＳ１）进 行 克 隆 ，并 进 行 密 码 子 使 用 偏 爱 性 、生 物 信 息 学 和 低 温 胁 迫 下 表 达 等 方 面 的 分 析 。 结 果 表 明 ：
以 Ａ／Ｔ结 尾 ；生 物 信 息学 分 析 结 果 表 明 ，Ｄ册 ＯＳ１编 码 的 蛋 白属 于 不 稳 定 的 疏 水 性 跨 膜 蛋 白 ，不 含 信 号 肽 ，定 位
于 细胞 质 和 细 胞 核 ，二 级 结 构 富 含 螺 旋 ，与 柑 橘 的 亲 缘 关 系 较 近 ；ｑＰＣＲ结 果 发 现 ，ＤＩＨＯＳ１能 够 响 应 低 温 胁
１ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｊｉａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３５０００２，Ｃｈｉｎａ ２ Ｆｒｕｉｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｒｕｊｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３５００１３，Ｃｈｉｎａ
迫 诱 导 。总 体 上 低 温 下 其 表 达 水 平 上 升 。研 究 结 果 认 为 ，ＤＩＨＯＳ１参 与 龙 眼抗 寒 和 低 温 胁 迫 过 程克 隆 ；密 码 子 使 用 偏 爱性 ；ｑＰＣＲ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ０Ｓ１ ｉｎ ｃｏｌｄ ｓｔｒｅｓｓ ｏｆ Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ— ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｄ．
１ｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ＨＯＳ１ ｇｅｎｅ （ＤＩＨＯＳ１），ａｎｄ ｃｏｄｏｎ ｂｉａｓ，ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒ ｎ ｏｆ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｄ ＩＨ ＯＳ１ ｉｎ Ｅｍ ｂｒｙｏｇｅｎｉｃ Ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｄｉｍ ｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎ Ｌｏｕｒ．
ＸＩＡＯ Ｘｉａｏｅ ，ＸＵ Ｘｉａｏｐｉｎｇ ，ＬＩ Ｊｉａｍｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｚｉｈａｏ ，ＬＡＩ Ｒｕｉｌｉａｎ ，
热 带作 物 学 报 ２０１８，３９（２）：２９３—２９９ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ
龙 眼胚性愈伤 组织 ＤＩＨＯＳ１基 因克隆与表达分 析
肖小 娥 ，徐 小 萍 ，李佳 蜜 ，张梓 浩 ，赖 瑞 联 ，一，林 玉玲 ，赖 钟 雄 件
１ 福 建农 林 大学 园 艺植 物 生物 工程研 究所 ，福建福 州 ３５０００２ ２ 福 建省 农业 科 学 院果树研 究所 ．福 建福 州 ３５００１３
ＪＤ坍 ＤＪｓＪ基 因 序 列 全 长 ３ ５７７ ｂｐ，包 含 ＯＲＦ ３ ０００ ｂｐ，编 码 ９９９个 氨 基 酸 ，５’ＵＴＲ 和 ３’ＵＴＲ 分 别 １６２ ｂｐ和
４１５ ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登 录号 ：ＫＹ９９０４０４）；密 码 子 使 用 偏 爱 性 分 析 表 明 ，Ｄ埘 ＯＳ１密 码 子 的 选 择 偏 爱 性 较 弱 ，偏 爱
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摘 要 以 龙 眼 胚 性 愈 伤 组 织 为 材 料 ， 采 用 ＲＴ—ＰＣＲ 和 ＲＡＣＥ—ＰＣＲ 技 术 对 植 物 抗 寒 重 要 调 控 因 子 ＨＯＳ１
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以 Ａ／Ｔ结 尾 ；生 物 信 息学 分 析 结 果 表 明 ，Ｄ册 ＯＳ１编 码 的 蛋 白属 于 不 稳 定 的 疏 水 性 跨 膜 蛋 白 ，不 含 信 号 肽 ，定 位
于 细胞 质 和 细 胞 核 ，二 级 结 构 富 含 螺 旋 ，与 柑 橘 的 亲 缘 关 系 较 近 ；ｑＰＣＲ结 果 发 现 ，ＤＩＨＯＳ１能 够 响 应 低 温 胁