考研生物化学重点问答题,内附参考答案

生物化学问答题（一）
ELISA的基本原理？
答：EILSA主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。

在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

6. ELISA的优点和影响因素？
答：ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。

不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。

影响结果的主要因素：1．试剂的因素: 不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。

更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。

2.样本的因素：内源性干扰因素，包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等。

3.外源性干扰因素：包括标本溶血、标本被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全等。

4．操作中的因素; 加样; 温育时间、温度的选择; 洗板; 显色,结果判定
列出5种常用蛋白质分离和纯化技术，并说明它们分别根据蛋白质的什么特性？
答：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法
蛋白质的盐析：将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。

（二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法
1.凝胶过滤法：这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。

柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadex ged）和琼脂糖凝胶（agarose gel）。

2.透析与超滤：透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。

超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。

（三）根据蛋白质带电性质进行分离
电泳法：种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。

（四）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法
亲和层析法（aflinity chromatography）：是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。

这种方法是根据某些
蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。

化学渗透学说的具体内容是什么？
化学渗透学说(chemiosmotic theory)由英国的米切尔(Mitchell 1961)提出，
①由磷脂和蛋白多肽构成的膜对离子和质子具有选择性；②具有氧化还原电位的电子传递体不匀称地嵌合在膜内；③膜上有偶联电子传递的质子转移系统；④膜上有转移质子的ATP酶。

在解释光合磷酸化机理时，该学说强调：光合电子传递链的电子传递会伴随膜内外两侧产生质子动力，并由质子动力推动ATP 的合成。

许多实验都证实了这一学说的正确性。

⒉有哪些方法能获得目的基因？
答：⑴限制性内切酶法；⑵cDNA合成法；⑶人工合成法；⑷（PCR）聚合酶链反应以特异性引物扩增目的基因。

⒊什么是基因克隆？简述它的主要操作步骤。

克隆是指由一个细胞经过无性繁殖以后所形成的子代群体。

基因克隆是指制备DNA片段，并通过载体将其导入受体细胞，在受体细胞中复制、扩增，以获得单一DNA分子的大量拷贝。

进行基因克隆时所采用的技术就是重组DNA技术，又称为分子克隆技术或基因工程技术。

基因工程的主要操作步骤包括分、切、接、转、筛。

1. 简述物质代谢的特点。

答：物质代谢的特点（1）整体性，体内各种物质的代谢不是彼此孤立的，而是同时进行的，彼此相互联系、相互转变、相互依存，构成统一的整体。

（2）代谢调节。

机体调节机制调节物质代谢的强度，方向和速度以适应内外环境的改变。

（3）各组织、器官物质代谢各具特色。

（4）各种代谢物均具有各自共同的代谢池。

（5）ATP是机体能量利用的共同形式。

（6）NADPH是合成代谢所需的还原当量。

3．简述细胞水平调节的主要方式。

答：包括变构调节、化学修饰、同工酶、酶含量的调节以及酶在亚细胞结构中分隔分布。

1. 三种主要RNA的生物功能：
mRNA是信使RNA，它将DNA上的遗传信息转录下来，携带到核糖体上，在那里以密码的方式控制蛋白质分子中氨基酸的排列顺序，作为蛋白质合成的直接模板。

rRNA是核糖体RNA，与蛋白质共同构成核糖体，核糖体不仅是蛋白质合成的场所，还协助或参与了蛋白质合成的起始及肽键的形成。

tRNA是转运RNA，与氨基酸形成氨酰－tRNA，tRNA凭借自身的反密码子与mRNA链上的密码子相识别，把所带氨基酸放到肽链的一定位置。

1、简述凝胶过滤的原理
答：当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内网状结构，而被排
阻在凝胶珠之外随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。

这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。

5．DNA分子什么样的结构特征为DNA的生物合成提供了分子基础？
答：由于构成DNA双螺旋结构的两条多核苷酸链按照碱基互补原则，反向平行地结合在一起，当DNA进行复制时，两条亲代链彼此分开，每一条链可以按照互补的原则决定与它互补的新链的碱基顺序。

于是，按照互补原则合成的新的DNA双螺旋分子，一条链来自亲代，另一条链是以亲代链为模板合成的。

4. 什么是遗传密码？它有哪些基本性质？
答:指mRNA中、从5’→3’端、每3个连续的碱基编码一个氨基酸，这连续的3个碱基称为遗传密码。

基本性质：①连续性；②简并性；③摇性；④通用性。

5.何为基因工程？基因工程的手术刀指什么，它有什么特性？目的基因的获取有哪几个方面？答：在体外将DNA片段重组，然后导入宿主细胞内。

重组的DNA能在宿主内进行复制、转录、翻译，这种体外重组DNA 技术称为基因工程。

基因工程的手术刀指限制性核酸内切酶，能识别和切割短的回文序列。

基因基因获取的方法：人工合成，cDNA文库筛选，基因组文库筛选，PCR。

2、简述双螺旋结构模型的要点及其生物学意义。

答：（1）DNA分子由两条反向平行的多聚核苷酸链围绕同一中心轴盘曲而成，两条链均为右手螺旋，链呈反平行走向，一条走向是5′→3′，另一条是3′→5′；位于双螺旋外侧的亲水性的脱氧糖基和磷酸基和位于双螺旋内侧的配对碱基构成DNA链的骨架；两条多聚核苷酸链之间的配对碱基形成氢键，即A与T 配对，形成两个键，G与C配对，形成三个氢键。

（2）碱基对平面与螺旋轴几乎垂直，螺旋每旋转一周包含了10对碱基，每对碱基的旋转角度为360，每个碱基平面之间的距离为 0.34nm；DNA链两股链之间的螺旋形成两个凹槽，浅的叫小沟，深的叫大沟。

大沟是蛋白质识别DNA的碱基序列的基础，使蛋白质和DNA 可结合而发生作用。

（3）DNA双螺旋结构的稳定的维系横向依靠互补碱基对之间的氧键，纵向依靠碱基平面间的疏水性堆积力来维持。

双螺旋结构模型的生物学意义是揭示了DNA复制时两条链可以分别作为模板生成新生的子代互补链，从而保持遗传信息的稳定传递。

7. DNA损伤修复系统有哪几种修复类型，这些修复类型主要针对哪些损伤？
损伤产生的原因：基因组DNA的稳定性是有限的，DNA受自身或外界的因素(复制过程的错配、化学或物理损伤级转座子的转座作用等)影响可发生突变，(1分)。

（1）错配修复系统：修复DNA复制中出现的差错；（2）直接修复系统：利用酶简单地逆转DNA损伤；（3）碱基切除修复系统：切除受损碱基；（4）核苷酸切除修复系统：识别DNA双螺旋变形；（5）重组修复系统：修复DNA双链断裂损伤；（6）SOS修复系统：跨损伤DNA聚合酶能够跨越损伤部位合成DNA。

简述基因工程的基本操作程序。

答：1）分离、提纯载体和目的基因（分），并加以鉴定； 2）用限制性核酸内切酶将载体切开（切），以便插入目的基因； 3）把载体和目的基因接合成重组体（接）；4）将重组体转化宿主细胞（转）；5）将含目的基因的细胞（或细菌）筛出（筛），并鉴定之。

6）克隆基因的表达。

简述膜受体介导的信息传递途径的机制。

（3分）
答：激素→膜受体（激素受体复合物）→G蛋白→酶→第二信使→蛋白激酶→酶或功能蛋白磷酸化→生物学效应
2．虽然大多数RNA分子是单股的，但是它们对作用于双股DNA的核糖核酸酶的降解也是敏感的。

为什么？答：虽然大多数RNA分子是单股的，但它们可通过自身的回折，在那些可以形成氢键的部位形成局部的双螺旋区。

在这种双螺旋区内，碱基配对的规则是A与U、G与C。

由于存在局部的双螺旋结构，因此，对专一于双股的核糖核酸酶的降解是敏感的。

1、与DNA聚合酶不一样，RNA聚合酶没有校对活性。

请解释为什么缺乏校对活性对细胞无害？
答：RNA聚合酶缺乏校对活性使得转录的错误率比DNA复制的错误率高。

但是所合成的有缺陷的RNA分子不可能影响细胞的生存力，因为从一个给定基因所合成的RNA大多数拷贝是正常的，有缺陷的蛋白质只占所合成蛋白质总数很小的百分比，而且转录时产生的错误很快被消除，因为大多数RNA分子的半衰期很短。

1、简述RNA和DNA主要区别。

答：（1）构成DNA的碱基为A、T、G、C；而RNA的碱基为A、U、C、G；（2）构成DNA的戊糖是β-D-2-脱氧核糖；而构成RNA的戊糖为β-D-核糖。

（3）DNA的结构是由两条反向平行的多聚核苷酸链形成的双螺旋结构；而RNA的结构以单链为主，只是在单链中局部可形成双链结构。

3、细胞内的哪几种主要的RNA？其主要的功能是什么？
答：（1）信使RNA（mRNA）：mRNA是以DNA为模板转录后经剪切生成的，它的主要作用是为蛋白质的合提供模板。

（2）核蛋白体RNA（rRNA）：rRNA与核糖体蛋白共同构成核糖体，其主要作用是作为蛋白质的合成部位，参与蛋白质的合成。

（3）转运RNA（tRNA）ltRNA能与氨基酸缩合成氨基酰-tTNA，在蛋白质合成过程中起到转运氨基酸的作用。

（4）核不均一RNA（hnRNA）：成熟mRNA的前体。

（5）小核RNA（snRNA）：参与hnRNA的加工。

（6）小核仁RNA（snRNA）：rRNA的加工和修饰。

（7）小胞质RNA（scRNA/7SL-RNA）:蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分。

2．试述短期饥饿状态下，糖、脂、蛋白质在体内代谢的特点。

答：短期饥饿指不能进食1-3天。

此时，肝糖原明显减少，血糖趋于降低，引起胰岛素分泌减少和胰高血糖素分泌增加，引起系列代谢变化：肌肉蛋质分解加强；糖异生作用加强；脂肪动员加强；组织对葡萄糖的利用降低。

2．DNA复制的忠实性如何？哪些因素可以促进此特征？
DNA能够准确的进行复制，具有保真性。

DNA聚合酶对模板的依赖性，是子链与母链能准确碱基配对是遗传信息延续和传代的保证，严格的碱基配对，包括对核苷酸碱基的选择和复制出现碱基错配有3′→5′外切酶活性及时的校正。

5．试述中心法则的内容。

中心法则是指遗传信息从DNA向RNA称为转录，再从RNA向蛋白传递称为翻译的规律。

（DNA→RNA→蛋白质）。

后来补充了在RNA为遗传物质的生物，遗传信息从RNA流向DNA称为逆转录路，RNA流向DNA称为RNA复制。

4．概述分泌性蛋白靶向输送的信号肽假说。

答：分泌性蛋白质的初级产物N-末端多有信号肽结构。

分泌性蛋白质的合成尚未终止，信号肽即被胞浆的信号识别蛋白（SRP）结合带到膜内侧面，SRP与其受体即对接蛋白（DP），组成一个输送系统，促使膜通道开放，信号肽带动合成中的蛋白质沿通道穿过膜，信号肽在沿通道折回时被膜上的信号肽酶切除，成熟的蛋白质就分泌到胞外。

3．作为基因工程的载体必须具备哪些条件。

答：载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。

理想的载体应具备以下几个条件：（1）能稳定复制，目的基因的插入基本不影响载体的复制能力；应具有一个以上的单一限制性酶位点，以便目的基因插入；（2）分子质量小、拷贝数高；（3）从生物防护角度考虑是安全的。

6．什么是蛋白质的变性作用和复性作用？蛋白质变性后哪些性质会发生改变？
答：蛋白质变性作用是指在某些因素的影响下，蛋白质分子的空间构象被破坏，并导致其性质和生物活性改变的现象。

蛋白质变性后会发生以下几方面的变化：
（1）生物活性丧失；（2）理化性质的改变，包括：溶解度降低，因为疏水侧链基团暴露；结晶能力丧失；分子形状改变，由球状分子变成松散结构，分子不对称性加大；粘度增加；光学性质发生改变，如旋光性、紫外吸收光谱等均有所改变。

（3）生物化学性质的改变，分子结构伸展松散，易被蛋白酶分解。

应用：应用：在基因组中对特异基因的定位及检测；PCR技术扩增目的基因等；核酸分子杂交；
5. 举例说明基因治疗的过程及注意事项。

定义：基因治疗是指用基因重组技术纠正疾病相关的缺陷基因的治疗手段。

(1)治疗基因的克隆与鉴定；(2)载体的选择；(3)基因转染方法的选择；(4)靶器官的选择；(5)基因表达调控的选择。

11. 简述第二信使必须具备的特点。

第二信使的定义：细胞信号转导过程构成了一个复杂的转导网络系统，其中的一些小分子被称为第二信使。

必须具备的特点：(1)浓度变化迅速；(2)可模拟外源信号的作用；(3)阻断该分子的变化可阻断细胞对外
源信号的反应；(4)有胞内靶分子；(5)可作为别位效应剂作用于靶分子。

43. 何谓cDNA文库？如何建立cDNA文库？（5分）
答：由于许多真核生物基因是内含子和外显子的嵌合体，为了建立更专门更特异的文库以克隆那些在某个器官或组织的细胞中才能表达的基因，可从这些器官或组织的细胞中分离纯化出mRNA，经反转录酶催化产生与之互补的DNA，即 cDNA，将这些cDNA插入载体进行克隆，产生的克隆群体叫做cDNA文库。

如胰岛素原的制备，从胰腺组织细胞中分离出胰岛素原的mRNA，在反转录酶的作用下，产生胰岛素原的cDNA；将胰岛素原的 cDNA插入质粒构成一个重组质粒，经转化，重组质粒可进入大肠杆菌细胞，胰岛素原便可在细菌细胞中合成。

44. 叙述DNA聚合酶，RNA聚合酶、逆转录酶、RNA复制酶所催化的反应的三个共同点。

指出多核苷酸磷酸化酶与它们的相似点和不同点。

答：1）这三种酶都是从5'一3'方向合成核酸； 2）都使用模板，并以3'一5'方向指导核酸的合成； 3）都是使用生长链的末端3'一OH对核苷三磷酸的α一磷酸基团发动亲核进攻，并释放焦磷酸。

所谓重叠基因（overlapping gene）是指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。

重叠基因有多种重叠方式。

例如，大基因内包含小基因；前后两个基因首尾重叠一个或两个核苷酸；几个基因的重叠，几个基因有一段核苷酸序列重叠在一起，等等。

重叠基因中不仅有编码序列也有调控序列，说明基因的重叠不仅是为了节约碱基，能经济和有效地利用DNA遗传信息量，更重要的可能是参与对基因的调控。

40.如何看待RNA功能的多样性
答] RNA有五方面的功能:(1)控制蛋白质合成；(2)作用于RNA转录后加工与修饰；(3)参与细胞功能的调节；(4)生物催化与其他细胞持家功能；(5)遗传信息的加工和进化；关键在于RNA既可以作为信息分子又可以作为功能分子发挥作用。

57.试述G蛋白参与信号传递在细胞代谢调节中的意义
[答] G蛋白在激素、神经递质等信息分子作用过程中，起信号传递、调节和放大的作用。

由于G蛋白家族结构的相似性（指β、γ-亚基）和多样性（指α-亚基），所以它的参与使激素和许多神经递质对机体的调节更复杂、更具多层次，更能适应广泛的细胞功能变化。

G蛋白种类很多，它的介入使激素、受体更能适应不同细胞反应和同一细胞反应的多样性，使机体对外界环境变化的应答更灵敏、更准确、更精细。

一些毒素如霍乱毒素和百日咳毒素等都是通过G-蛋白的α-亚基ADP核糖基化而失去正常调节功能，导致一系列病理反应。

94.DNA和RNA各有几种合成方式，各由什么酶催化新链的合成？
[答]（1）DNA → DNA，其中DNA半不连续复制需要DNA聚合酶III、DNA聚合酶I和DNA连接酶；DNA修复合成需要DNA聚合酶I、DNA连接酶。

（2）RNA → DNA， RNA指导下反向转录合成DNA需要逆转录酶。

（3）RNA合成包括：DNA → RNA，以DNA为模板转录合成RNA需要RNA聚合酶；RNA → RNA，以RNA为模板合成RNA需要RNA复制酶；RNA → DNA → RNA需要RNA转录酶和RNA聚合酶。

95.真核生物DNA聚合酶有哪几种？它们的主要功能是什么
[答] 真核生物的DNA聚合酶有α、β、γ、δ、ε五种，均具有5′→ 3′聚合酶活性，DNA聚合酶γ、δ和ε有3′→5′外切酶活性，DNA聚合酶α和β无外切酶活性。

DNA聚合酶α用于合成引物，DNA 聚合酶δ用于合成细胞核DNA，DNA聚合酶β和ε主要起修复作用，DNA聚合酶γ用于线粒体DNA的合成。

101.简述原核细胞和真核生物蛋白质合成的主要区别？
答：原核生物蛋白质合成与真核生物蛋白质合成的主要差别有：（1）原核生物翻译与转录是偶联的，真核生物要将细胞核内转录生成的mRNA转运到细胞质才能进行蛋白质合成，因此，转录和翻不可能偶联。

（2）
（3）原核生物肽链的合成是从甲酰甲硫氨酰-tRNA开始的，真核生物的肽链合成是从甲硫氨酰-tRNA开始的。

原核生物肽链合成的起始依赖于SD序列，真核生物肽链合成的起始依赖于帽子结构。

（4）原核生物的mRNA 与核糖体小亚基的结合先于起始tRNA与小亚基的结合，而真核生物的起始tRNA与核糖体小亚基的结合先于mRNA与小亚基的结合。

（5）在原核生物蛋白质合成的起始阶段，不需要消耗ATP，但真核生物需要消耗ATP。

（6）参与真核生物蛋白质合成起始阶段的起始因子比原核生物复杂，释放因子则相对简单。

（7）原核生物与真核生物在密码子的偏爱性上有所不同。

（8）真核细胞的翻译后加工比原核细胞复杂。

102.在原核细胞中高效表达真核细胞的基因要注意哪些问题
答：要想在原核细胞中高效地表达真核生物的基因必须注意以下几点：
（1）对于含有内含子的基因不能直接从基因组中获取，可以通过人工合成的方法或者从cDNA库中获取。

（2）需要在真核生物基因的上游加入SD序列。

（3）使用原核生物的强启动子。

（4）如果人工合成某一蛋白质的基因，需要考虑原核生物对密码子的偏爱性。

（5）为了防止原核生物分解目的蛋白，可以考虑分泌表达和融合表达等方法。

（6）需要较复杂翻译后加工的蛋白质最好不用原核细胞表达。

107.原核生物与真核生物翻译起始阶段有何异同
答：相同之处：（1）都需生成翻译起始复合物；（2）都需多种起始因子参加；（3）翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；（4）都需要mRNA和氨酰- tRNA结合到核糖体的小亚基上；（5）mRNA在小亚基上就位都需一定的结构成分协助。

（6）小亚基结合mRNA和起始者tRNA后，才能与大亚基结合。

（7）都需要消耗能量。

不同之处：（1）真核生物核糖体是80S（40S+60S）；eIF种类多（10多种）；起始氨酰- tRNA是met- tRNA （不需甲酰化），mRNA没有SD序列；mRNA在小亚基上就位需5′端帽子结构和帽结合蛋白以及eIF2；mRNA 先于met-tRNA结合到小亚基上。

（2）原核生物核糖体是70S（30S+50S）；IF种类少（3种）；起始氨酰- tRNA 是fmet- tRNA（需甲酰化）；需SD序列与16S-tRNA配对结合，rps-1辩认识别序列；小亚基与起始氨酰
-tRNA结合后，才与mRNA结合。

114.在基因表达的转录水平调控中，为什么真核生物多为正调控，而原核生物多为负调控？
答：（1）真核生物以正调控为主的必要性与优越性如下：
a.真核生物基因组大，某一种cis-factor（顺式作用位点）出现的几率高，可与多种trans-factor（反式作用因子）结合，体现调控的灵活性。

b.真核生物的调控一般有大于或等于5组trans-factor-cis-factor 参与，随机出现5组完全相同的几率小，体现调控的严谨性。

C．真核生物中特异基因表达导致细胞分化。

如果10%基因表达，即90%基因关闭，若采用负调控，则需要表达90%基因的阻遏蛋白；若采用正调控，只需要合成10%基因的反式作用因子，这显然是经济合理的调控方式。

（2）原核生物为负调控的必要性与优越性如下：原核生物基因组小，基因少，简单，生命繁殖快；所以一般用一种调节蛋白调节一组功能相关的基因（即操纵子）一开俱开，一关俱关，减少不必要的环节。

即使调节蛋白失活，酶系统可照样合成，只不过有点浪费而已，而决不会使细胞因缺乏该酶系统而造成致命的后果。

116.自然质粒通常需要改造，才能成为理想的质粒载体，请问质粒改造包括哪些基本内容？
答：基本内容包括：（1）删除一些非必要的区段及对宿主有不良影响的区段，减少DNA的长度，使载体具有更大的容纳外源片段的能力。

（2）插入易于选择或检测的标记。

（3）插入限制性内切核酸酶的酶切位点，便于外源基因插入到载体中的特定位置。

（4）插入一些调控元件，有利于克隆基因的表达。

（5）进行安全性能改造，限定载体的宿主范围。

125.用于DNA重组的载体应具备什么条件？常用的载体有哪一些？各有何特点
[答] DNA重组载体应具备的条件：
（1）能自主复制；（2）具有一种或多种限制性内切酶的单一切割位点，并在位点中插入外源基因后，不影响其复制功能；（3）具有1～2个筛选标记；
（4）克隆载体必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入其他生物细胞；（5）易于操作，转化效率高。

常用的基因载体有以下几种：
（1）质粒：是细菌染色体以外的小型环状双链DNA分子，本身有复制功能，且带有某些选择信息，但可插入的目的基因片段较小。

（2）噬菌体DNA：是一种病毒DNA，能插入比较大的外源DNA片段，在DNA分子上有多种限制性核酸内切酶识别位点，便于多种外源DNA酶切片段的克隆。

（4）柯斯质粒载体和酵母人工染色体：前者结合了质粒和噬菌体载体的优点，也是一种环形双链DNA分子，具有质粒的性质，可以转化大肠杆菌，并自行复制和增殖，但它不会产生子代噬菌体，构建成的此种载体较小，因此能插入比较大的外源DNA片段，所以被广泛地用于构建基因组文库。

后者既含有大肠杆菌来源的质粒复制起始位点，又含有酵母菌染色体DNA着丝点，端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因，可在转化的酵。