野菊花栓微生物限度检查法验证
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版 一 部 的规 定 ，方 法 可行 。 ２ １２ 培 养 基 及 稀 释 剂 ．．
营养琼脂 培养基 ，玫瑰 红钠 琼脂培 养基 ，营养 肉汤培
养 基 ，胆 盐 乳 糖 培 养 基 （ Ｌ ，改 良 马 丁 培 养 基 ，改 良 马 Ｂ ）
丁琼 脂培养基 ， Ｈ ． ｐ ７ ０无菌 氯化 钠 一蛋 白胨缓 冲液 ，０９ ．％ 无菌 氯化 钠溶液 、甘 露醇氯 化钠琼 脂培养 基 、溴化 十六烷
基 三 甲 铵 琼脂 培 养 基 、曙 红 亚 甲 蓝琼 脂 。
２ １３ 仪 器 ．．
确定野菊花栓细菌 、霉菌和酵母 菌计数 方法 为常规法 。 ３ 野 菊 花栓 微 生物 限度 检 查 方 法 根据上述试验研 究结果 ，拟建立 野菊 花栓微 生物 限度
检查方法如下 ：
天平 ，培养箱 ，冰箱 ，高压灭菌锅等 。
的供试液。 ２２３ 常规法 ．． 取 １ ０ 的供 试 液 １ｍ 和 ５ ：１ ｌ ０～１０ ｆ ０ ｃｕ菌 液 ，分 别 注 入 平 皿 中 ，立 即倾 注 １ ２ １ 脂 培 养 基 ，待 ５～ ０ｍ 琼
凝 固后 ，置规定温度 ，细菌培养 ７ ２小时 ，霉菌 和酵母菌培 养 １０小时 ，计数 ，测定 回收率。 ２
细菌数每 １ ｇ不得 过 １０个 ，霉 菌和酵母菌数每 １ ０ ｇ不得
过１ 。 ０个 ２ 野 菊 花 栓 微 生物 限度 检 查 法验 证 的 实验 研 究
按 《 中国药典》 ２ １ 版一 部附 录 ＸＩ ０ ０年 ＩＣ微 生物 限度 Ｉ
检查法规定进行方法验证 。
２ １ 实验仪器 、试药 ． ２ １ １ 样品 ．． 野菊花栓 ，批号 ：１００ 、１００ 、１０ ０ 。 ０ ６ １ ０６ ２ ０ ６ ３ 三个批号样品 的回收率试 验结 果表 明，野 菊花栓 采用 常规法进行细菌 、霉 菌和酵 母菌微 生物 限度检验 ，五种规 定试验菌的 回收率均超过 ７ ％ ；符合 《 ０ 中国药 典》２ １ ０ ０年
的 ０ ９ 无 菌 氯 化 钠 溶 液 ，将 孢 子 洗 脱 ， 吸 取 菌 液 用 含 ．％
１ １ 野菊花栓微生物 限度检查法标准起草说明 ． 野菊花栓具有 抗菌 消炎 的功 效 ，适用 于前列 腺炎及 慢 性盆腔炎等疾 病 的治疗。主要 成分 为野菊 花，辅 料为 聚 乙 二醇 。根据其 用药途 径和处 方 ，应进行 细菌 数 、霉菌 和酵 母菌数 的测定 、和大肠埃希菌的检查 。 经实验研究 ，最 终确定 采用 常规法 进行 细菌数 、霉菌 和酵母菌数 的测定 检查 。经对 所确定 的方法 进行验 证 ，符 合 ２１ ０ ０年版 《 中国药典》 一部附 录 ＸＩＣ微生物 限度检查 Ｉ Ｉ
周 焕 净
广西古方药业有限责任公司 ，广 西 南宁 ５ ０ ２ ３２１
【 关键词 】 中药 ；野菊花栓 ；微生物限度检查
【 中图分类号 】Ｒ ５ ９４
ห้องสมุดไป่ตู้
【 文献标识码】Ａ
【 文章编号】１０ — ５７ （０２ ６ ０６ ０ ０７ ８１ ２ １）１ — ０４— ２
１ 野菊 花栓 微 生 物 限 度检 查 法标 准
２ ２ 细菌 、霉菌及酵母 菌试 验方法的建立及验证 ． ２ ２ １ 菌液制备 ．． 取经 ３ ３ ℃培养 ｌ ２ 时的金黄色葡 萄球菌 、大 ０— ５ ８～ ４小 肠埃希菌 、铜绿假 单胞 菌 、枯 草芽 孢杆菌 的 肉汤培养 物用
微 生物 限度
照微生物 限度检查法 （ 中国药典》２ １ 《 ００
中 国 民 族 民 间 医 药
・
药 物 研 究
Ｔｈ ｄ ｃｎ ｓｕ ｙ ｅ ｍｅ ｉｉ ｅ ｔ ｄ
６ ・ ４
Ｃ ｉｅｅｊｕ ｌｏ ｔｎ ｍ ｄｃ ｅａ ｄ ｅ ｎｐ ａｍ ｃ ｈｎｓ ｏｍａ ｆｅｈｏ ｅ ｉｎ ｎ ｔ ｏｈｒ ａｙ ｉ ｈ
野 菊 花栓 微 生物 限度 检 查 法 验 证
法 的有 关 规 定 ，方 法 可 行 。 １２ 野 菊花 栓微 生 物 限度 检查 法标 准正 文 ．
０ ０ ％聚山梨酯 ８ ．５ ０的 ０ ９ ． ％无 菌氯化 钠溶 液制 备成 每 １ ｌ ｍ 含菌落数为 ５ ０～１０ ｆ／ ｌ ０ ｃｕ ｍ 的菌悬液 ，备用 。 ２ ２ ２ 供试液制备 ．． 取样品 ｌ ｇ Ｏ ，加 含适量 聚山梨酯 ８ Ｏ的 Ｐ ． ｍ ０无 菌氯化 钠一蛋 白胨缓冲液稀 释至 １０ ｌ ０ ｍ ，制备成溶解 均匀 的 １ ０ ：１
细菌数
取本 品 １ ０的供试液 １ ｌ ：１ ｍ 注皿 ，平行 制备 ２
个平 皿 ，置 ３ ３ ￣ ，培养 ７ ０— ５（ ２ ２小时 ，计数 。
霉菌和酵母菌数
取 １ ０的供试 液 １ ｌ ：１ ｍ 注皿 ，平 行
制 备 ２个 平皿 ，置 ２ ２ ￣ ３— ８Ｃ，培 养 １０小 时 ，计 数 。 ２
年版一 部附录 ＸＩ ） ＩＣ 。 Ｉ 取样品 １ｇ ０ ，加含适量 聚山梨酯 ８ ０的 Ｐ ７ ０无 菌氯化 Ｈ． 钠一蛋白胨 缓冲液稀 释至 １０ ｌ ０ ｍ ，制备成溶 解均匀 的 ｌ ０ ：１
表 １ 三 批 野 菊 花栓 回 收率 试 验 结 果
年版 一部 附录 ｘ ｉ ） ｎｃ 。 取 样 品 １ｇ ０ ，加 含 适 量 聚 山 梨 酯 ８ ０的 Ｐ ７ ０无 菌 氯 化 Ｈ． 钠一 蛋 白胨缓 冲液稀释至 ｌＯ ｌ Ｏ ｍ ，制备 成溶解均匀 的 １ ０ ：１
的供 试 液 。
微生物 限度
照微生物 限度检查法 （ 中国药典》２ １ 《 ００
２２ ４ 结果 ，回收率均超过 ７ ％ ，表明野菊花栓无抑菌作 ．． ０
用 ，采用常规法进行 细菌 数 、霉菌 和酵母菌数 的计 数可行 。 用 ｐ ７０无 菌氯化钠 一蛋 白胨缓 冲液作为稀 释剂对 照组 回 Ｈ． 收率均超过 ７ ％ ，表明稀释剂无抑 菌作 用。 ０ ２２ ５ 细菌 、霉菌及酵母 菌计数方法验证 ．． 取 ３个批号野菊 花栓样 品 ，按常规 法进行 加菌 回 收率 试验 ，结果见表 １ 。
营养琼脂 培养基 ，玫瑰 红钠 琼脂培 养基 ，营养 肉汤培
养 基 ，胆 盐 乳 糖 培 养 基 （ Ｌ ，改 良 马 丁 培 养 基 ，改 良 马 Ｂ ）
丁琼 脂培养基 ， Ｈ ． ｐ ７ ０无菌 氯化 钠 一蛋 白胨缓 冲液 ，０９ ．％ 无菌 氯化 钠溶液 、甘 露醇氯 化钠琼 脂培养 基 、溴化 十六烷
基 三 甲 铵 琼脂 培 养 基 、曙 红 亚 甲 蓝琼 脂 。
２ １３ 仪 器 ．．
确定野菊花栓细菌 、霉菌和酵母 菌计数 方法 为常规法 。 ３ 野 菊 花栓 微 生物 限度 检 查 方 法 根据上述试验研 究结果 ，拟建立 野菊 花栓微 生物 限度
检查方法如下 ：
天平 ，培养箱 ，冰箱 ，高压灭菌锅等 。
的供试液。 ２２３ 常规法 ．． 取 １ ０ 的供 试 液 １ｍ 和 ５ ：１ ｌ ０～１０ ｆ ０ ｃｕ菌 液 ，分 别 注 入 平 皿 中 ，立 即倾 注 １ ２ １ 脂 培 养 基 ，待 ５～ ０ｍ 琼
凝 固后 ，置规定温度 ，细菌培养 ７ ２小时 ，霉菌 和酵母菌培 养 １０小时 ，计数 ，测定 回收率。 ２
细菌数每 １ ｇ不得 过 １０个 ，霉 菌和酵母菌数每 １ ０ ｇ不得
过１ 。 ０个 ２ 野 菊 花 栓 微 生物 限度 检 查 法验 证 的 实验 研 究
按 《 中国药典》 ２ １ 版一 部附 录 ＸＩ ０ ０年 ＩＣ微 生物 限度 Ｉ
检查法规定进行方法验证 。
２ １ 实验仪器 、试药 ． ２ １ １ 样品 ．． 野菊花栓 ，批号 ：１００ 、１００ 、１０ ０ 。 ０ ６ １ ０６ ２ ０ ６ ３ 三个批号样品 的回收率试 验结 果表 明，野 菊花栓 采用 常规法进行细菌 、霉 菌和酵 母菌微 生物 限度检验 ，五种规 定试验菌的 回收率均超过 ７ ％ ；符合 《 ０ 中国药 典》２ １ ０ ０年
的 ０ ９ 无 菌 氯 化 钠 溶 液 ，将 孢 子 洗 脱 ， 吸 取 菌 液 用 含 ．％
１ １ 野菊花栓微生物 限度检查法标准起草说明 ． 野菊花栓具有 抗菌 消炎 的功 效 ，适用 于前列 腺炎及 慢 性盆腔炎等疾 病 的治疗。主要 成分 为野菊 花，辅 料为 聚 乙 二醇 。根据其 用药途 径和处 方 ，应进行 细菌 数 、霉菌 和酵 母菌数 的测定 、和大肠埃希菌的检查 。 经实验研究 ，最 终确定 采用 常规法 进行 细菌数 、霉菌 和酵母菌数 的测定 检查 。经对 所确定 的方法 进行验 证 ，符 合 ２１ ０ ０年版 《 中国药典》 一部附 录 ＸＩＣ微生物 限度检查 Ｉ Ｉ
周 焕 净
广西古方药业有限责任公司 ，广 西 南宁 ５ ０ ２ ３２１
【 关键词 】 中药 ；野菊花栓 ；微生物限度检查
【 中图分类号 】Ｒ ５ ９４
ห้องสมุดไป่ตู้
【 文献标识码】Ａ
【 文章编号】１０ — ５７ （０２ ６ ０６ ０ ０７ ８１ ２ １）１ — ０４— ２
１ 野菊 花栓 微 生 物 限 度检 查 法标 准
２ ２ 细菌 、霉菌及酵母 菌试 验方法的建立及验证 ． ２ ２ １ 菌液制备 ．． 取经 ３ ３ ℃培养 ｌ ２ 时的金黄色葡 萄球菌 、大 ０— ５ ８～ ４小 肠埃希菌 、铜绿假 单胞 菌 、枯 草芽 孢杆菌 的 肉汤培养 物用
微 生物 限度
照微生物 限度检查法 （ 中国药典》２ １ 《 ００
中 国 民 族 民 间 医 药
・
药 物 研 究
Ｔｈ ｄ ｃｎ ｓｕ ｙ ｅ ｍｅ ｉｉ ｅ ｔ ｄ
６ ・ ４
Ｃ ｉｅｅｊｕ ｌｏ ｔｎ ｍ ｄｃ ｅａ ｄ ｅ ｎｐ ａｍ ｃ ｈｎｓ ｏｍａ ｆｅｈｏ ｅ ｉｎ ｎ ｔ ｏｈｒ ａｙ ｉ ｈ
野 菊 花栓 微 生物 限度 检 查 法 验 证
法 的有 关 规 定 ，方 法 可 行 。 １２ 野 菊花 栓微 生 物 限度 检查 法标 准正 文 ．
０ ０ ％聚山梨酯 ８ ．５ ０的 ０ ９ ． ％无 菌氯化 钠溶 液制 备成 每 １ ｌ ｍ 含菌落数为 ５ ０～１０ ｆ／ ｌ ０ ｃｕ ｍ 的菌悬液 ，备用 。 ２ ２ ２ 供试液制备 ．． 取样品 ｌ ｇ Ｏ ，加 含适量 聚山梨酯 ８ Ｏ的 Ｐ ． ｍ ０无 菌氯化 钠一蛋 白胨缓冲液稀 释至 １０ ｌ ０ ｍ ，制备成溶解 均匀 的 １ ０ ：１
细菌数
取本 品 １ ０的供试液 １ ｌ ：１ ｍ 注皿 ，平行 制备 ２
个平 皿 ，置 ３ ３ ￣ ，培养 ７ ０— ５（ ２ ２小时 ，计数 。
霉菌和酵母菌数
取 １ ０的供试 液 １ ｌ ：１ ｍ 注皿 ，平 行
制 备 ２个 平皿 ，置 ２ ２ ￣ ３— ８Ｃ，培 养 １０小 时 ，计 数 。 ２
年版一 部附录 ＸＩ ） ＩＣ 。 Ｉ 取样品 １ｇ ０ ，加含适量 聚山梨酯 ８ ０的 Ｐ ７ ０无 菌氯化 Ｈ． 钠一蛋白胨 缓冲液稀 释至 １０ ｌ ０ ｍ ，制备成溶 解均匀 的 ｌ ０ ：１
表 １ 三 批 野 菊 花栓 回 收率 试 验 结 果
年版 一部 附录 ｘ ｉ ） ｎｃ 。 取 样 品 １ｇ ０ ，加 含 适 量 聚 山 梨 酯 ８ ０的 Ｐ ７ ０无 菌 氯 化 Ｈ． 钠一 蛋 白胨缓 冲液稀释至 ｌＯ ｌ Ｏ ｍ ，制备 成溶解均匀 的 １ ０ ：１
的供 试 液 。
微生物 限度
照微生物 限度检查法 （ 中国药典》２ １ 《 ００
２２ ４ 结果 ，回收率均超过 ７ ％ ，表明野菊花栓无抑菌作 ．． ０
用 ，采用常规法进行 细菌 数 、霉菌 和酵母菌数 的计 数可行 。 用 ｐ ７０无 菌氯化钠 一蛋 白胨缓 冲液作为稀 释剂对 照组 回 Ｈ． 收率均超过 ７ ％ ，表明稀释剂无抑 菌作 用。 ０ ２２ ５ 细菌 、霉菌及酵母 菌计数方法验证 ．． 取 ３个批号野菊 花栓样 品 ，按常规 法进行 加菌 回 收率 试验 ，结果见表 １ 。