柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝

柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝
实验目的
1. 了解柱色谱的分离原理及应用。

2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。

实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:
甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。

极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚
甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。

本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。

主要装置
装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱
实验步骤
1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向
旋转至透明，竖直安装在铁架台上。

关闭活塞，向
柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化
铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，
调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。

装满100mm高度后在上
面加一层石英砂(约5mm)。

在此过程中应始终保持
吸附剂沉积面上有一段液柱。

2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加
10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。

打开活塞，待
液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。

再打开活塞将液面降
至与石英砂平面相切。

依上法重复操作直至柱壁
和顶部的淋洗剂均无颜色。

3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。

观察柱中色带下行情况。

随着
色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色
，上方为黄色。

当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可
重复使用)。

当蓝色带接收完后更换接收瓶接收
空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。

当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。

待
甲基橙全部被洗脱下来，即分离完全。

注意事项
1. 连续不断地加入洗脱剂，并保持一定高度的液面，在整个操作中勿使氧化铝表面的溶液流干，一
旦流干，再加溶剂，易使氧化铝柱产生气泡和裂
缝，影响分离效果。

2. 要控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。

3. 收集洗脱液，如试样各组分有颜色，在氧化铝柱上可直接观察。

洗脱后分别收集各个组分。

在多
数情况下，化合物没有颜色，收集洗脱液时，多
采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用氧化铝的量及试样的分离情况而定。

一般若用50g氧化
铝，每份洗脱液的体积常为50mL。

如洗脱液极性
较大或试样的各组分结构相近似时，每份收集量要小。

思考题
1. 装柱不均匀或者有气泡、裂缝，将会造成什么后果,如何避免,
2. 极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱,。