_聚酰胺-大孔树脂联用富集杜仲雄花总黄酮 (1)

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Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） Ｎｏｖ． ２０１３ Ｖｏｌ．３２ Ｎｏ．４
聚酰胺－大孔树脂联用富集杜仲雄花总黄酮
丁 艳 霞１，２，郭 洋 静１，曾 令 连１，李 钦１＊
（１．河南大学药学院 杜仲工程研究中心，河南 开封４７５００１；２．辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 １１６６００）
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杜 仲 皮 中 总 黄 酮 ，以 ２５、５０、１００μｇ／ｍＬ 浓 度 分 别 加 ２．２ 供 试 品 溶 液 的 制 备 及 测 定 方 法
入 新 生 Ｗｉｓｔａｒ大 鼠 颅 骨 分 离 培 养 的 成 骨 细 胞 中 ，发
取 杜 仲 雄 花 粉 末 适 量 ，２５ 倍 量 体 积 分 数 为
杜 仲 （Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ Ｏｌｉｖ．）又 名 思 仙 、思 浙 、赣 、闽 等 省 、自 治 区 的 平 原 到 海 拔 １ ６９０ｍ 间 的 仲 、石 思 仙 ，为 杜 仲 科 杜 仲 属 植 物 ，落 叶 乔 木 ，花 单 丘 陵 和 山 地 。 ［３］ 杜 仲 作 为 药 材 在 我 国 已 有 ２０００ 多 性 异 株 ，是 仅 存 于 我 国 的 第 三 纪 孑 遗 植 物［１］，是 中 年 的 历 史 ，我 国 第 一 部 药 书 《神 农 本 草 经 》记 载 了 杜 国 珍 稀 濒 危 二 类 保 护 植 物［２］，它 的 栽 培 历 史 悠 久 ， 仲 的 药 效 ：“杜 仲 性 味 甘 、微 辛 、温 、无 毒 ，有 补 肝 肾 、 广 泛 分 布 于 甘 、陕 、晋 、豫 、湘 、鄂 、川 、滇 、黔 、桂 、皖 、 强 筋 骨 、益 腰 膝 、除 酸 痛 的 效 能 ”。 肖 静 等 通 过 提 取
屏 仪 器 仪 表 有 限 公 司）。
察 ，其 吸 附 在０．５ｈ内 吸 附 速 率 最 快 ，０．５～５ｈ以 内
１．２ 试 药
吸 收 变 得 缓 慢 ，但 ６～１５ｈ 后 吸 附 的 速 率 又 一 次 加
Ｘ－５、ＨＰＤ－１００、ＡＢ－８、ＮＫＢ－９、Ｄ－１０１ 大 快 快 ，到 １５ｈ后 趋 于 平 衡 状 态 。 按 式 （１）计 算 吸 附
的 亚 硝 酸 钠 ０．４ ｍＬ，混 匀 ，放 置 ６ ｍｉｎ，加 质 量 分 数 水 、体 积 分 数 为２０％ 、４０％ 、６０％ 、８０％ 、９５％ 的 乙 醇
为 １０％ 硝 酸 铝 ０．４ ｍＬ，混 匀 ，放 置 ６ ｍｉｎ，加 质 量 分 各 １００ ｍｌ，以 流 速 为 ２ＢＶ／ｈ 对 雄 花 药 液 （总 黄 酮 浓
总 黄 酮 进 行 了 探 讨 ，取 得 较 好 效 果 ，富 集 物 纯 度 提 ３．１ 聚 酰 胺 静 态 吸 附 量 － 解 吸 性 能 考 察 试 验［８］
高 近 ２００ 倍 ，远 优 于 目 前 常 用 的 黄 酮 纯 化 技 术 。
准 确 称 取 预 处 理 好 的 聚 酰 胺 ５．００ ｇ，置 于
其 总 黄 酮 的 富 集 主 要 采 用 大 孔 树 脂 ，黄 酮 纯 度 最 高 黄 酮 的 含 量 为 ３．２％ 。
能 达 到 ３３．９％（粗 提 物 中 黄 酮 纯 度 为 ３．２８％）。 本
实 验 首 次 对 聚 酰 胺 － 大 孔 树 脂 联 用 技 术 富 集 杜 仲 ３ 结 果 与 讨 论
１ 仪 器 与 试 药
２５０ ｍＬ具 塞 锥 形 瓶 中 ，加 入 样 品 溶 液 （总 黄 酮 浓 ３０ ｍｉｎ 振 摇
１．１ 仪 器
２０ｓ，每 隔 １．５ｈ吸 取 上 层 液 测 定 药 液 的 吸 光 度 ，至
ＵＶ－２１００ 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 （上 海 龙 尼 剩 余 总 黄 酮 浓 度 达 到 平 衡 ，计 算 出 每 克 干 聚 酰 胺 的
图 １ 聚 酰 胺 静 态 吸 附 动 力 曲 线 图
即得。
３．２ 聚 酰 胺 动 态 吸 附 量 － 解 吸 性 能 考 察
分别 吸 取 上 述 标 准 溶 液 ０、０．４、０．８、１．６、２．０、
将 ３．１ 项 预 处 理 的 饱 和 吸 附 黄 酮 的 聚 酰 胺
２．４ ｍＬ置 于 １０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ，加 入 质 量 分 数 为 ５％ ５．００ｇ，装 入 内 径 为 １．５ｃｍ 的 层 析 柱 ，分 别 用 蒸 馏
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｎｒｉｃｈｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍａｌｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙａｍｉｄｅ－ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｏｌｙａｍｉｄｅ ａｄｓｏｒｂｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｗａｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ ｆｉｒｓｔ ｔｏ ｅｌｉｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗａｓ ｌｏａｄｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｐ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ．Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｂｙ ｅｌｕｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｅｔｈａｎｏｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙａｍｉｄｅ ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｎｒｉｃｈ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｔｈｅ ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｐｏｌｙａｍｉｄｅ ａｎｄ ｄｒｙ Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ ｗａｓ ｔｈｒｅｅ ａｎｄ ｔｅｎ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｉｇｈｔ（１∶３ａｎｄ １∶１０），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ６０％ｅｔｈａｎｏｌ ｆｏｒ ｅｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｉｘ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｖｏｌｕｍｅ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ ８６．７６％ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｔｏｔａ１ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗａｓ５５． ２７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒｓ ｆｏｒ ｅｎｒｉｃｈｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｍｏｒｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ａ ｇｏｏｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｅｇｒｏｕｎｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍａｌｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ；ｅｎｒｉｃｈｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ；ｐｏｌｙａｍｉｄｅ－ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ
鼠 骨 质 疏 松 症 ，提 高 成 骨 细 胞 活 性 。 国 内 外 对 杜 仲 过 ，减 压 回 收 溶 剂 至 无 醇 味 ，残 渣 用 ７０％ 乙 醇 溶 解 ，
黄 酮 类 化 合 物 的 研 究 十 分 活 跃 ，已 有 研 究 表 ［６］ 明 ， 并 稀 释 至 质 量 浓 度 为 ０．０１６ｇ／ｍｌ（按 浸 膏 量 计 ），作 杜 仲 雄 花 中 的 总 黄 酮 含 量 远 高 于 杜 仲 皮 和 叶 ，关 于 为 上 柱 供 试 液 ，并 按 照 文 献 方 法［７］，测 定 药 材 中 总
摘 要 ：目 的 寻 找 一 种 有 效 富 集 杜 仲 雄 花 总 黄 酮 的 方 法 并 对 工 艺 条 件 进 行 初 步 摸 索 。 方 法 样 品 溶 液 以 聚 酰 胺 吸附，水洗除杂。将除杂后的聚酰胺 加 于 大 孔 吸 附 树 脂 柱 顶 部，以 乙 醇 洗 脱 富 集 总 黄 酮。 结 果 聚 酰 胺 与 Ｄ－１０１ 树脂联合应用能很好的富集杜仲雄花总黄酮。最佳 工 艺 条 件 为 浸 膏 与 聚 酰 胺 比 为 １∶３，浸 膏 与 树 脂 比 为 １∶１０， 以体积分数为６０％乙醇洗脱，收集洗脱液６ＢＶ。 富 集 物 总 黄 酮 收 率 可 达 ８６．７６％，黄 酮 纯 度 为 ５５．２７％。 结 论 该 方 法 优 于 目 前 常 用 黄 酮 富 集 ，且 工 艺 简 单 ，树 脂 再 生 容 易 ，具 有 良 好 的 应 用 前 景 。 关键词：杜仲雄花 ；总黄酮；富集工艺；聚酰胺－大孔树脂结合法
司）；杜 仲 雄 花 药 材 购 自 洛 阳 市 鸡 冠 山 商 贸 有 限 公
吸 附 量 ＝ 原 液 总 黄 酮 量 一 剩 余 总 黄 酮 量（１）
司 ，经 河 南 大 学 药 学 院 李 钦 教 授 鉴 定 均 为 杜 仲 科 植
物 杜 仲 Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｉｍｏｉｄｓ Ｏｌｉｖ．的 雄 花 ；芦 丁 对 照 品
ＤＩＮＧ Ｙａｎｘｉａ１，２，ＧＵＯ Ｙａｎｇｊｉｎｇ１，ＺＥＮＧ Ｌｉｎｇｌｉａｎ１，ＬＩ Ｑｉｎ１＊
（１．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｅｕｃｏｍｍｉａ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ，Ｋａｉｆｅｎｇ，Ｈｅｎａｎ ４７５００４，Ｃｈｉｎａ ；２． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｌｉａｎ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ １１６６００，Ｃｈｉｎａ）
孔 吸 附 树 脂（天 津 市 海 光 化 工 有 限 公 司 ），柱 色 谱 用 量 和 每 克 干 聚 酰 胺 的 吸 附 量 ，结 果 表 明 ：平 衡 状 态
聚 酰 胺（１００～２００ 目 ）（国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 时 ，５ｇ聚 酰 胺 树 脂 的 静 态 吸 附 量 为３７．７１ ｍｇ。
中图分类号：ＴＱ４６０．６ 文献标识码：Ａ
文 章 编 号 ：１６７２－７６０６（２０１３）０４－０２４２－０５
Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍａｌｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ Ｅｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓ－ Ｏｌｉｖ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙａｍｉｄｅ－ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ