二苯胺试剂的配制
实验九DNA的粗提取与鉴定
【实验九】DNA的粗提取与鉴定陈小珺(江西省赣州市第三中学341000)1 教学建议在本实验的教学中,教师应注意以下几点。
1.1 实验材料必须准备充足。
本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。
每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。
宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。
也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
(每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠)1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。
因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。
1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。
1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液:将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精:体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。
1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。
教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。
进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。
2 实验原理的补充介绍2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富,材料易得;二是鸡血细胞极易吸水胀破。
DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。
为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。
蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。
高中生物实验试剂配制方法
高中生物实验试剂配制方法1、斐林试剂试剂甲:将34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中,加0.5亳升硫酸,混合均匀。
试剂乙:将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中。
(贮于带橡皮塞的瓶中)※临用时试剂甲与试剂乙等量混合※斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀因此,斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否。
2、双缩脲试剂取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。
取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。
瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。
※双缩脲试剂使用时,先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,与蛋白质发生紫色反应,因此,双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否注意∶林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同:(1)溶液浓度不同斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g/ml;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01g/ml。
(2)使用原理不同斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。
二苯胺合成药化中间体
二苯胺合成药化中间体二苯胺作为一种重要的有机化合物,广泛应用于医药、染料、涂料等行业。
本文将介绍二苯胺的合成及其在药化中间体中的应用。
一、二苯胺的合成方法二苯胺的合成方法有多种,下面将介绍两种常用的方法。
1. 亚硝基苯和苯胺的反应这是一种较为常用的合成二苯胺的方法。
反应过程如下:亚硝基苯 + 苯胺→ 二苯胺 + 水该方法的反应条件较为温和,反应物易得,产品纯度较高,因此在实际应用中得到广泛应用。
2. 氨气还原苯硝基化合物这是另一种常用的合成二苯胺的方法。
反应过程如下:苯硝基化合物 + 氨气 + 催化剂→ 二苯胺 + 水该方法反应条件较为苛刻,需要催化剂存在,但合成产率较高,可以得到高纯度的产物。
二、二苯胺在药化中间体中的应用二苯胺作为一种重要的药化中间体,在药物合成中起到了至关重要的作用。
下面将介绍二苯胺在药化中间体中的两个应用案例。
1. 常用解热镇痛药物扑热息痛的合成扑热息痛是一种常用的解热镇痛药物,其合成中需要使用到二苯胺。
以下是扑热息痛的合成路线:苯乙酸 + 氯化磷→ 苯乙酰氯苯乙酰氯 + 二苯胺→ 扑热息痛通过二苯胺与苯乙酰氯的反应,可以合成出扑热息痛这一常用的药物。
2. 乙肝疫苗的合成乙肝疫苗是用于预防乙型肝炎的疫苗,其中的药化中间体也使用了二苯胺。
以下是乙肝疫苗合成的一部分路线:1-戊醇 + 氯乙酰氯→ 氯乙酯氯乙酯 + 二苯胺→ 乙肝疫苗通过二苯胺与氯乙酯的反应,可以合成出乙肝疫苗这一重要的药物。
三、结论二苯胺作为一种重要的有机化合物,具有广泛的应用前景。
本文介绍了二苯胺的合成方法及其在药化中间体中的应用。
通过合成二苯胺,可以为药物合成提供有效的中间体反应物,促进药物研发与生产的进展。
相信在未来的研究中,二苯胺在医药领域的价值将会得到更多的发掘和应用。
常用分析试剂配制
1.乙醇制氢氧化钾试液可取用乙醇制氢氧化钾滴定液(0.5mol/L)。
2.乙醇制氨试液取无水乙醇,加浓氨溶液使每100ml中含NH39~11g,即得。
本液应置橡皮塞瓶中保存。
3.乙醇制硝酸银试液取硝酸银4g,加水10ml溶解后,加乙醇使成100ml,即得。
乙醇制溴化汞试液取溴化汞2.5g,加乙醇50ml,微热使溶解,即得。
本液应置玻璃塞瓶内,在暗处保存翳学敎育网整理。
一氯化碘试液取碘化钾0.14g与碘酸钾90mg,加水125ml使溶解,再加盐酸125ml,即得。
本液应置玻璃瓶内,密闭,在凉处保存。
4.N-乙酰-L-酪氨酸乙酯试液取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯24.0mg,加乙醇0.2ml使溶解,加磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.6ml,混合,pH值为7.0)2ml,加指示液(取等量的0.1%甲基红的乙醇溶液与0.05%亚甲蓝的乙醇溶液,混匀)1ml,用水稀释至10ml,即得。
5.乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液取对二甲氨基苯甲醛1g,加乙醇9.0ml与盐酸2.3ml使溶解,再加乙醇至100ml,即得。
6.二乙基二硫代氨基甲酸钠试液取二乙基二硫代氨基甲酸钠0.1g,加水100ml溶解后,滤过,即得。
7.二硝基苯试液取间二硝基苯2g,加乙醇使溶解成100ml,即得。
8.二硝基苯甲酸试液取3,5-二硝基苯甲酸1g,加乙醇使溶解成100ml,即得。
9.二硝基苯肼试液取2,4-二硝基苯肼1.5g,加硫酸溶液(1→2)20ml,溶解后,加水使成100ml,滤过,即得翳学敎育网整理。
10.二乙基二硫代氨基甲酸银试液取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g,加氯仿适量与三乙胺1.8ml,加氯仿至100ml,搅拌使溶解,放置过夜,用脱脂棉滤过,即得。
本液应置棕色玻璃瓶中,密塞,置阴凉处保存。
11.二苯胺试液取二苯胺1g,加硫酸100ml使溶解,即得。
12.二氨基萘试液取2,3-二氨基萘0.1g与盐酸羟胺0.5g,加0.1mol/L盐酸溶液100ml,必要时加热使溶解,放冷滤过,即得。
常用有机试剂配制
常用试剂的配制【2,4-二硝基苯肼试剂】Ⅰ.取3g 2,4-二硝基苯肼溶于15mL浓硫酸中。
将此酸性溶液慢慢加入70mL95%乙醇中,再加蒸馏水稀释到90mL,搅动混合均匀即成橙红色溶液(若有沉淀应过滤)。
Ⅱ.将1.2g 2,4-二硝基苯肼溶于50mL30%高氯酸中。
配好后储于棕色瓶中,不易变质。
I 法配制的试剂2,4-二硝基苯肼浓度较大,反应时沉淀多便于观察。
Ⅱ法配制的试剂,由于高氯酸盐在水中溶解度很大,因此便于检验水溶液中的醛且较稳定,长期贮存不易变质。
【饱和亚硫酸氢钠溶液】先配制40%亚硫酸氢钠水溶液。
然后在每100mL的40 %亚硫酸氢钠水溶液中,加不含醛的无水乙醇25mL,溶液呈透明清亮状。
如有少量的亚硫酸氢钠结晶析出,必须滤去或倾斜上层清液。
由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质,所以上述溶液也可按下法配制:将研细的碳酸钠晶体(Na2CO3·10H2O)与水混合,水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜。
然后在混合物中通入二氧化硫气体,至碳酸钠近乎完全溶解,或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中,至碳酸钠全部溶解为止。
配制好后密封放置,但不可放置太久,最好是用时新配。
【Schiff(希弗)试剂】配制方法有三种:1.将0.2g对品红盐酸盐溶于100mL新制的冷却饱和二氧化硫溶液中,放置数小时,直至溶液无色或淡黄色,再用蒸馏水稀释至200mL,存在于玻璃瓶中,塞紧瓶口,以免二氧化硫逸散。
2.溶解0.5g对品红盐酸盐于100mL热水中,冷却后通入二氧化硫达饱和,至粉红色消失,加入0.5g活性炭,震荡过滤,再用蒸馏水稀释至500mL。
3.溶解0.2g对品红盐酸盐于100mL热水中,冷却后,加入2g亚硫酸钠和2mL浓盐酸,最后用蒸馏水稀释至200mL。
品红溶液原是粉红色,被二氧化硫饱和后变成无色的Schiff试剂。
醛类与Schiff试剂作用后,反应液呈紫红色。
酮类通常不与Schiff试剂作用,但是某些酮类(如丙酮等)能与二氧化硫作用,故当它与Schiff 试剂接触后能使试剂脱去亚硫酸,此时反应液就出现品红的粉红色。
几种染色剂的使用原理
几种染色剂的使用原理、使用方法归纳2009年08月30日星期日09:451。
甲基绿和吡罗红:实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布.试剂及配制方法(1)试剂质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,乙酸钠,乙酸,蒸馏水,吡罗红甲基绿混装粉。
如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉,可以分别购买甲基绿和吡罗红G,然后按A液的第二种方法配制(见下文)。
(2)染色剂的配制①染色剂A液的两种配制方法第一种方法:取吡罗红甲基绿粉1 g,加入到100 mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法:取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中,取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。
取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。
(注意:用于核酸染色的是吡罗红G,请不要错买吡罗红B。
)②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL备用;再取乙酸12 mL,用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。
取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL,加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。
③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。
取A液20 mL和B液80 mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。
应该注意的是该试剂应现用现配。
2。
龙胆紫和醋酸洋红:染色质(体)容易被碱性染料染成深色。
作为染色剂必须具备两个条件:一是具有颜色;二是要与被染组织间有亲和力。
染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的,产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。
作为染料物质,除了有发色基团外,还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。
生物化学实验常用试剂的配制方法
生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确称取氢氧化钠 40g。
2.用去离子水溶解并稀释至 2L。
2、0.5mol/L 盐酸溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确量取盐酸 83.4mL。
2.用去离子水稀释至 2L。
4、0.2%葡萄糖标准溶液 *组份浓度 0.2%*配制量 1L*配置方法 1.称取葡萄糖 2.5g 置于称量瓶中,在70℃干燥 2 小时。
2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖 2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至 1L5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清 *组份浓度 250μg/mL白蛋白标准液 *配制量 2L*配置方法 1.准确称取 250mg标准牛血清白蛋白。
2.用 0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L。
3.4℃保存。
6、Folin 试剂甲*配置方法 1.称取 10g氢氧化钠溶于 400mL去离子水中,加入 50g 无水碳酸钠,溶解,待用。
2.称取 0.5g酒石酸钾钠,溶于 80mL去离子水中,加入 0.25g 硫酸铜.5水,溶解。
3.将 1:2:去离子水按 20:4:1的比例混合即可。
4. 4℃保存,可用一周。
7、Folin 试剂乙*配置方法1.在 500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠.2水 25.0359g,钼酸钠.2水6.2526g,去离子水 175mL,85%磷酸 12.5mL,浓盐酸 25mL,充分混合。
2.回流 10 小时,再加硫酸锂 37.5g,去离子水 12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾 15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到 250mL。
4.于棕色瓶中保存,可使用多年注意:上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L 左右,几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol/L 的浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍,使之浓度为 0.1mol/L 略高。
生物类经常用的一些化学试剂的配制方法
生物类经常用的一些化学试剂的配制方法l.乳酸苯酚固定液乳酸10g, 结晶苯酚10g, 甘油20g, 蒸馏水10mL。
2. 1.6%溴甲酚紫溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。
用作培养基指示剂时,每1000mL 培养基中加入lmL 1.6%溴甲酚紫即可。
3. V.P.试剂CuSO4 1g,蒸馏水l0mL,浓氨水40mL,10% NaOH 950mL。
先将CuSO4溶于蒸馏水中,然后加浓氨水,最后加入10%NaOH。
4. 0.02%甲基红试剂甲基红0.1g,95% 乙醇760mL,蒸馏水100mL。
5. 吲哚反应试剂对二甲基氨基苯甲醛8g, 95%乙醇760mL,浓HCl160mL。
6. Alsever’s血细胞保存液葡萄糖2.05g, 柠橡酸钠0.8g, NaCl 0.42g,蒸馏水l00mL。
以上成分混匀后,微加温使其溶解后,用柠檬酸调节pH 6.1,分装于三角瓶中(30~50mL/瓶), 113℃湿热灭菌15min,备用。
7. Hank’s液(l)贮存液A液:(I)NaCl80g, KCl4g, MgSO4·7H2O1g,MgCl2·6H2O1g,用双蒸馏水定容至450mL:(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2·2H2O 1.85g) 用双蒸馏水定容至50mL。
将I和II液混合,加氯仿1mL即成A液。
(2)贮存液B液:Na2HPO4·12H2O 1.52g,KH2PO4 0.6g, 酚红0.2g, 葡萄糖10g,用双蒸馏水定容至500mL,然后加氯仿1mL,酚红应先置研钵内磨细,然后按配方顺序一一溶解。
(3)应用液:取上述贮存液的A和B液各25mL,加双蒸馏水定容至450mL,113℃湿热灭菌20min。
置4℃下保存。
使用前用无菌的3% NaHCO3调至所需pH。
注意:药品必须全部用A.R试剂,并按配方顺序加入,用适量双蒸馏水溶解,待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品,最后补足水到总量。
常用有机试剂配制
常用试剂的配制【2,4-二硝基苯肼试剂】I •取3g 2,4-二硝基苯肼溶于15mL浓硫酸中。
将此酸性溶液慢慢加入70mL95%乙醇中,再加蒸馏水稀释到90mL,搅动混合均匀即成橙红色溶液(若有沉淀应过滤)。
将1.2g 2,4-二硝基苯肼溶于50mL30%高氯酸中。
配好后储于棕色瓶中,不易变质。
I法配制的试剂2,4-二硝基苯肼浓度较大,反应时沉淀多便于观察。
H法配制的试剂,由于高氯酸盐在水中溶解度很大,因此便于检验水溶液中的醛且较稳定,长期贮存不易变质。
【饱和亚硫酸氢钠溶液】先配制40%亚硫酸氢钠水溶液。
然后在每100mL的40 %亚硫酸氢钠水溶液中,加不含醛的无水乙醇25mL,溶液呈透明清亮状。
如有少量的亚硫酸氢钠结晶析岀,必须滤去或倾斜上层清液。
由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质,所以上述溶液也可按下法配制:将研细的碳酸钠晶体(Na2CO3・10H2O)与水混合,水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜。
然后在混合物中通入二氧化硫气体,至碳酸钠近乎完全溶解,或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中,至碳酸钠全部溶解为止。
配制好后密封放置,但不可放置太久,最好是用时新配。
【Schiff (希弗)试剂】配制方法有三种:1•将0.2g对品红盐酸盐溶于100mL新制的冷却饱和二氧化硫溶液中,放置数小时,直至溶液无色或淡黄色,再用蒸馏水稀释至200mL,存在于玻璃瓶中,塞紧瓶口,以免二氧化硫逸散。
2•溶解0.5g对品红盐酸盐于100mL热水中,冷却后通入二氧化硫达饱和,至粉红色消失,加入0.5g活性炭,震荡过滤,再用蒸馏水稀释至500mL。
3.溶解0.2g对品红盐酸盐于100mL热水中,冷却后,加入2g亚硫酸钠和2mL浓盐酸,最后用蒸馏水稀释至200mL。
品红溶液原是粉红色,被二氧化硫饱和后变成无色的Schiff试剂。
醛类与Schiff试剂作用后,反应液呈紫红色。
酮类通常不与Schiff试剂作用,但是某些酮类(如丙酮等)能与二氧化硫作用,故当它与Schiff 试剂接触后能使试剂脱去亚硫酸,此时反应液就岀现品红的粉红色。
试液配制标准操作规程
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试液配制标准操作规程
1.目的:
制订试液配制操作规程,规化配制操作,保证检验结果的准确性。
2.范围:
适用本企业药品检验涉用的所有试液。
3.责任:
质监部、检验室负责人、检验员
4.内容:
4.1概述
4.1.1试液为药品检验过程中涉用到的溶液、试液、指示液(剂)试纸、缓冲液等。
4.1.2技术依据:参照中国药典附录项下
4.2配制程序
4.2.1溶液类
4.2.1.1稀硫酸(酸化反应液)
试剂:浓硫酸、纯化水
配制步骤:量取纯化水约800ml于烧杯中在搅拌充分下,缓缓加入浓硫酸57ml,再加水至1000ml,摇匀。
附注:含硫酸(H2SO4)应为:1.84×57/1000=9.5%-10.5%
配制过程释放出大量的热量,所以要注意不能放在塑料盒中冷却,以防熔出穿更多免费资料下载请进:好好学习社区。
生化常用试剂配制
生物化学实验常用试剂的配制方法使用Ctrl+F 组合键可以快速的查找所需的配方。
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
3、含0.5mol/L氯化钠的0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L氯化钠、0.5mol/L氢氧化钠;配制量1L配置方法1.准确量取氯化钠29.3g。
2.准确量取氢氧化钠20g。
3.用去离子水稀释至1L。
注意:此溶液供回收纤维素时使用。
4、0.2%葡萄糖标准溶液组份浓度0.2%;配制量1L配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清白蛋白标准液组份浓度250μg/mL ;配制量2L配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。
2.称取0.5g 酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入0.25g硫酸铜?5水,溶解。
3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。
4. 4℃保存,可用一周。
7、Folin试剂乙配置方法:1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g,钼酸钠?2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL,浓盐酸25mL,充分混合。
2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。
二苯胺法测定DNA含量
实验12 二苯胺法测定DNA 含量一、目的学习和掌握测定DNA 的定糖法(二苯胺法)的原理和操作技术。
二、原理脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595nm 处有最大的吸收,在每毫升含DNA20~400微克范围内,光密度与DNA 的浓度成正比,在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应的灵敏度。
除DNA 外,脱氧木糖,阿拉伯糖也有同样的反应。
HO CH 2C — CH 2 CHO 蓝色化合物 酸性条件 二苯胺 Oω—羟基—γ酮基戊醛三、材料、试剂和器具 (一)试剂1、DNA 标准溶液:取小牛胸腺DNA 用0.1N 氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。
2、DNA 样品液:(自己提取)控制其DNA 含量在50~100微克/毫升左右。
3、二苯胺试剂:称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升分析纯的冰醋酸中,再加入10毫升过氯酸(A.R60%以上)或浓硫酸2.75毫升,混匀备用。
临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液(乙醛溶液应保存于冰箱,一周内可使用)所配得的溶液应为无色。
(二)器具1、试管及试管架2、移液管(1,2,5毫升)3、恒温水浴4、可见光分光光度计四、操作步骤(一)DNA 标准曲线的制作==加毕,摇匀,于60℃恒温水浴中保温1小时,(或于沸水中煮沸15分钟,冷却测0.D 595nm 值。
)以光密度为纵坐标,DNA 含量(ug/ml )为横坐标,绘制标准曲线。
(二)样品的测定取2支试管,各加0.2~0.5毫升的待测液(内含DNA 应在标准曲线可测范围之内)加蒸馏水稀释至2毫升,再加4毫升二苯胺试剂,摇匀,其操作步骤与标准曲线的制作相同。
根据测得的光密度值,从标准曲线上查出相当该光密度DNA 的含量,按下式计算出样品中DNA 的百分含量。
DNA 含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数10010)(/(%)6⨯⨯⨯=g DNA 新鲜鲜肝总体积毫升含量产率五、注意事项1、二茉胺法测定DNA 含量灵敏度不高,待测样品中DNA 含量低于50mg/L 即难以测定。
纯化水检验试剂配置方法
纯化水检验试剂配置方法(2010药典版)甲基红:甲基红0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠7.4ml溶解,用水稀释到200ml。
pH4.2~6.3(红-黄)。
溴麝香草酚蓝:溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠3.2ml溶解,用水稀释到200ml。
pH6.0~7.6(黄-蓝)。
高锰酸钾滴定液(0.02mol/L):高锰酸钾 3.2g,加水1000ml,煮沸15分钟,密塞,静置2日以上,用垂熔玻璃滤器滤过,摇匀。
标准硝酸盐溶液:取硝酸钾0.163g,加水溶解稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,再精密量取10ml,加水稀释成100 ml,摇匀,即得(每1 ml相当于1μgNO3)。
10%氯化钾溶液:10g氯化钾加90ml水。
0.1%二苯胺硫酸溶液:0.1g二苯胺加浓硫酸100g(100/1.84=54.3ml)。
标准亚硝酸盐溶液:取亚硝酸钠0.750g(按干燥品计算),加水溶解,稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,摇匀,再精密量取1 ml,加水稀释成50ml,摇匀,即得(每1ml相当于1μgNO2)。
对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液:1g磺胺用稀盐酸稀释到100ml。
盐酸萘乙二胺溶液:0.1g萘乙二胺盐酸盐用水稀释到100ml。
稀盐酸:23.4ml浓盐酸用水稀释到1000ml。
氯化铵溶液:取氯化铵31.5mg,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml。
碱性碘化汞钾试液:碘化钾10g,加水10ml溶解,缓缓加饱和二氯化汞水溶液,至红色沉淀不再溶解,加氢氧化钾30g,溶解后加饱和二氯化汞水溶液1ml或1ml以上,用水稀释到200ml。
静置沉淀,用时取上层清液。
稀硫酸:57ml浓硫酸用水稀释到1000ml。
标准铅溶液的贮备液:取硝酸铅0.1599g,置1000ml容量瓶,加硝酸5ml与水50ml溶解后,用水稀释至刻度,摇匀。
标准铅溶液(非储备液):精密取铅溶液贮备液10ml,置100ml容量瓶,用水稀释摇匀,即得(1ml相当于10ug的Pb)。
中学生物实验中常用试剂的配制及作用
中学生物实验中常用试剂的配制及作用郑英皇湖南省沅陵县第七中学1.碘液配制:取2g碘化钾,溶解在5ml蒸馏水中,再加1g碘,待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。
溶液在光亮处容易变成紫色,必须保存在暗色玻璃瓶里。
作用:用来测定淀粉,淀粉遇碘后,形成紫色的复合物。
2.斐林试剂配制:斐林试剂(Fehling's solution)是德国化学家斐林(Hermann von Fehling,1812年--1885年)在1849年发明的。
斐林试剂斐林试剂A和斐林试剂B配制而成的。
斐林试剂A 是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液,斐林试剂B是硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL 的溶液。
临用时斐林试剂A与斐林试剂B等量混合。
作用:鉴定还原性糖:C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用,水浴加热,生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中是否有还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
3.班氏尿糖定性试剂配制:173克柠檬酸钠和100克无水碳酸钠溶解于800毫升水中。
再取17.3克结晶硫酸铜溶解在100毫升水中,慢慢将此溶液加入上述溶液中,最后用水稀释到1升,边加边搅,如产生沉淀可滤去。
作用:鉴定还原性糖,在沸水浴加热条件下与还原糖反应而生成砖红色的Cu2O沉淀,使用原理同斐林试剂,都是二价铜离子与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀,所不同的是班氏试剂可长期使用。
4.双缩脲试剂配制:双缩脲试剂(biuret reagent)是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成。
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
作用:鉴定蛋白质,蛋白质与双缩脲试剂发生作用,可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
双缩脲试剂使用时,先向2mL蛋白质溶液加入2mL双缩脲试剂A,振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴双缩脲试剂B,振荡摇匀后观察现象。
抗氧剂之二苯胺
抗氧剂之二苯胺摘要:高分子材料最致命的缺点就是老化性,也就是在材料的合成、加工、贮存和使用的各个阶段都可能发生变质,即材料的性能变坏。
老化的化学本质是:高分子材料都具有一定的分子结构,其中某些部位具有一些弱键,这些弱键自然就称为化学反应的突破口,而老化也就是一种化学反应,通常以弱键发生化学反应(例如氧化反应)为起点并进行一系列化学反应。
结果是高分子材料的分子结构发生改变及相对分子质量下降(即降解)或产生交联,从而材料性能变坏,以至无法使用。
而抗氧剂就是能抑制或延缓聚合物分子链断裂产生自由基的物质,是阻止高分子材料氧化老化的助剂。
二苯胺就是抗氧剂中的一种。
二苯胺结构式一基本信息:1 名称:中文别名:二苯胺英文别名:Diphenylamine,N-PhenylanilineN-Phenylbenzeneamine2 化学式:C12H11N3 相对分子质量:169.234 性状:白色至微红色结晶。
有花香气味。
见光变色。
易溶于乙醚、苯、冰乙酸和二硫化碳,1g溶于2.2ml乙醇、4.5ml丙酮,不溶于水。
能与强酸生成盐。
相对密度1.16。
熔点54~55℃。
沸点302℃。
闪点153℃。
低毒,半数致死量(大鼠,经口)3000mg/kg。
有刺激性。
5 储存:密封阴凉避光保存。
6 用途:硝酸盐、氯酸盐和其他氧化性物质的检定。
铱的催化测定。
硝酸盐的光度测定。
氧化还原指示剂。
单倍体育种培养基。
制造染料。
是硝化纤维素、炸药、火棉的稳定剂。
7 成分/组成信息:有害物成分含量 CAS No.二苯胺 122-39-48 危险性概述:健康危害:未见职业中毒的报道。
本品制造过程中可含有4-氨基联苯,应注意后者的致癌性。
燃爆危险:本品可燃,具刺激性。
9 急救措施:皮肤接触:脱去污染的衣着,用流动清水冲洗。
眼睛接触:提起眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗。
就医。
吸入:脱离现场至空气新鲜处。
就医。
食入:饮足量温水,催吐。
就医。
10 消防措施:危险特性:遇明火、高热可燃。
二苯胺试剂的配制
二苯胺试剂的配制
A液:1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%Fra bibliotek溶液。配制:将0.1mLB液加入10mLA液中,现配现用。
DNA的鉴定:
配制二苯胺试剂取0.1mLB液,滴入到10mLA液中,混匀。
鉴定:取4mLDNA提取液放入试管中,加入4mL二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(1000C)min.在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
二苯胺生产工艺
二苯胺生产工艺
二苯胺是一种广泛应用于染料、橡胶、塑料、医药等领域的重要有机化工原料。
以下是该化合物的生产工艺的介绍:
1. 原料准备:苯胺和苯酚是二苯胺的原料,需要优质的苯和酚作为原料。
2. 反应器准备:选择合适的反应器,例如釜式反应器或管式反应器,并确保反应器的材质和操作条件可以满足工艺要求。
3. 反应条件的选择:二苯胺的合成可以采用氢氧化钠催化的方法进行,反应温度一般为150-200°C,反应时间为5-8小时。
4. 反应步骤:首先将苯酚与苯胺按照一定的比例加入反应器中,然后将氢氧化钠溶液缓慢滴加进去,同时加热反应器。
在反应过程中,反应物会发生酰基化反应,生成二苯胺。
5. 反应后处理:反应结束后,将反应液降温至室温,然后用稀盐酸进行酸碱中和,将产物二苯胺从反应液中析出。
6. 产品分离:将反应液中析出的二苯胺进行过滤、洗涤、干燥等处理,然后进行精制,得到纯度较高的二苯胺产物。
7. 产品收集和包装:将得到的二苯胺产品进行收集,并根据需要进行包装,以便储存和运输。
需要注意的是,在整个生产工艺过程中,应严格控制反应的温
度、压力和反应物的投料速度,确保反应的安全和高效性。
此外,还应注意废弃物和废气的处理,减少对环境的污染。
以上是二苯胺生产工艺的简要介绍,具体的工艺条件和步骤可能会因不同的生产厂家和工艺要求而有所不同。