急性白血病诊断分型
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急性白血病的诊断、分型和 预后
急性白血病诊断分型
白血病的概念
•白血病是造血干/祖细胞 发生恶变
急性白血病诊断分型
白血病的概念
▪ 分化障碍 ▪ 增殖失控 原始和幼稚细胞增生累积 ▪ 凋亡受阻 ▪ 浸润其它器官和组织
原始和幼稚细胞 （白血病细胞）
急性白血病诊断分型
白血病的概念
临床表现： ▪ 正常造血受到抑制：乏力、面色苍白、发热、
急性白血病诊断分型
流式I
FCM的工作原理
摘自 Flow Cytometry: First Principle
急性白血病诊断分型
流式I
FCM检测的参数
• FSC: 细胞大小 • SSC:细胞内颗粒多少及细胞内构造的复杂性 • FL：3-10多种（荧光素耦联的单克隆抗体）
急性白血病诊断分型
流式I
正常BM细胞的图形（CD45/SSC）
如有2 系或以上的特异性标志，可诊断为急性混合性白血病
急性白血病诊断分型
流式I
AML(病例1）
急性白血病诊断分型
流式I
ALL (病例2）
急性白血病诊断分型
流式I
FCM 的优缺点
优点：
•一次可检测数万至数十万个细胞上的数十种标记，可同时检测每 个细胞的六个以上参数，敏感性高，分析全面
• 更容易区分良恶性，恶性细胞的系列及成熟度
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C
白血病染色体分析存在的问题：
R8：幼稚细胞群，正常骨髓中此群细胞数量极低或空缺
急性白血病诊断分型
流式I
流式细胞术判断急性白血病：
➢20%或者25%以上细胞表达早期标志 （CD34、HLA-DR、 TdT）或者不表达成 熟标志 ➢系别标志： ✓ 髓系 ✓ B系 ✓ T系
急性白血病诊断分型
流式I
白血病细胞的系列特异性标志
髓系 MPO+（用FCM，免疫组织化学染色，细胞化学染色证实） 或单核细胞（至少有以下标志中的2项阳性：NSE、CD11c、CD14、 CD64、CD36*、溶酶体
急性白血病诊断分型
形态M
病理及免疫组织化学的优缺点
• 标本直接固定，不容易损失信息，恶性细胞比例更客观，对一些 抽不出或少见细胞，仍可诊断。如伴骨髓纤维化、MM、淋巴瘤、 转移癌、组织细胞、巨噬细胞、树突细胞、何杰金细胞等 • 可以直接观察到组织结构，容易确定恶性细胞的组织部位 • 诊断慢、受诊断者个人经验及知识水平影响大 • 对一些组织结构无破坏、细胞形态改变不大的细胞，难以鉴定良 恶性及成熟度 • 有些恶性细胞在液体中，难以获取组织标本，难以判断组织结构
急性白血病诊断分型
流式幼稚B淋巴细胞增生，未见异常表型
急性白血病诊断分型
病例4 NK细胞白血病移植后40天，骨髓涂片 8%的幼稚细胞
急性白血病诊断分型
流式: 未见表型异常细胞，CD34阳性细胞 为幼稚B淋巴细胞
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C ▪ 中期分裂相的染色体分析
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C ▪ AML：50%~90%的患者细胞遗传学可检出 异常克隆
诊断误区举例
原始细胞增多是诊断前体恶性血液病尤其AL的重要指 标，但原始细胞应根据免疫学标志/基因/染色体证 实为恶性造血前体细胞
▪ 一些形态上的原始细胞可以是正常造血细胞（尤其 见于儿童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化疗 后或移植后）
急性白血病诊断分型
病例3 儿童B-ALL,化疗3年后停药，来我院复查，骨 髓涂片8%的幼稚细胞
急性白血病诊断分型
▪ MICM整合诊断对恶性血液病进行诊断和分 型重复性更好、更客观
▪ 并且能更好地帮助判断预后 ▪ 指导制定治疗方案及策略，监测疗效
急性白血病诊断分型
形态M
细胞形态及细胞化学分析的优缺点
优点： 直观：镜下直接观察细胞形态，对MDS的诊断、一些少见
的、大的恶性细胞的确定优于流式细胞分析 恶性细胞的比例更准确： 简单快速，有显微镜即可完成报告 缺点： 人为因素影响大 难以鉴别细胞的成熟阶段，B、T等系列的恶性细胞 细胞较成熟时，难以鉴别良恶性 不能提供太多的预后信息
T细胞系 cCD3+(用抗CD3ε链的单抗及FCM分析，不能用免疫组化的抗CD3ζ链 多克隆来检测，因为后者不是T细胞特异性抗原) 或sCD3+
B细胞系 CD19强阳性并同时有以下标志中的至少1项阳性：CD79a、cCD22、 CD10 或CD19弱阳性并同时有以下标志中的至少2项阳性：CD79a、cCD22、 CD10
出血 ▪ 浸润：肝脾淋巴结肿大、皮肤、中枢神经系
统等浸润
急性白血病诊断分型
Leabharlann Baidu
急性白血病分型
➢ FAB分型: 细胞形态学及细胞化学染色 AML: M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7 ALL: L1、L2、L3
➢ WHO分型: 2008年修订 MICM
急性白血病诊断分型
MICM整合诊断
• M: 形态学、细胞化学、病理 • I: 免疫学，包括免疫组化、流式细胞分析 • C: 染色体、荧光标记探针的原位杂交(FISH) • M: 分子生物学：白血病融合基因、基因突变、 克隆性基因重排、正常基因表达水平过高
• 可帮助确定免疫治疗的靶点并监测疗效，如CD20、CD19是监测 MRD覆盖面最广的方法。
• 快速、简便、重复性好
缺点：
•不能确定组织结构，一些罕见的大细胞不能分析到，一些细胞粘 附性高，难以抽出。因此对HL等难以确诊。
•判断恶性细胞的比例不如形态准确，对M6、MDS的诊断不如形态
•预后价值不如染色体和基因急性白血病诊断分型
▪ ALL：大约60%～85%的患者可检出克隆性 染色体畸变
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C
染色体的诊断价值
• 一些染色体有诊断价值: 如重现性染色体异常，如t(8;21)， inv(16)、t（16；16）、 t(15;17)（q22;q12）， t(5;14)(q31;q32) ，t(3;3),t(4;11)可直接诊断急性白血病； • 一些染色体和/或基因有辅助诊断价值，如5q31、CEP7、 7q31、CEP8、20q、CEPY、P53 高度疑似MDS等； • 有-7、5q-、 t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、复杂染色体等的 急性白血病预后不好
急性白血病诊断分型
白血病的概念
•白血病是造血干/祖细胞 发生恶变
急性白血病诊断分型
白血病的概念
▪ 分化障碍 ▪ 增殖失控 原始和幼稚细胞增生累积 ▪ 凋亡受阻 ▪ 浸润其它器官和组织
原始和幼稚细胞 （白血病细胞）
急性白血病诊断分型
白血病的概念
临床表现： ▪ 正常造血受到抑制：乏力、面色苍白、发热、
急性白血病诊断分型
流式I
FCM的工作原理
摘自 Flow Cytometry: First Principle
急性白血病诊断分型
流式I
FCM检测的参数
• FSC: 细胞大小 • SSC:细胞内颗粒多少及细胞内构造的复杂性 • FL：3-10多种（荧光素耦联的单克隆抗体）
急性白血病诊断分型
流式I
正常BM细胞的图形（CD45/SSC）
如有2 系或以上的特异性标志，可诊断为急性混合性白血病
急性白血病诊断分型
流式I
AML(病例1）
急性白血病诊断分型
流式I
ALL (病例2）
急性白血病诊断分型
流式I
FCM 的优缺点
优点：
•一次可检测数万至数十万个细胞上的数十种标记，可同时检测每 个细胞的六个以上参数，敏感性高，分析全面
• 更容易区分良恶性，恶性细胞的系列及成熟度
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C
白血病染色体分析存在的问题：
R8：幼稚细胞群，正常骨髓中此群细胞数量极低或空缺
急性白血病诊断分型
流式I
流式细胞术判断急性白血病：
➢20%或者25%以上细胞表达早期标志 （CD34、HLA-DR、 TdT）或者不表达成 熟标志 ➢系别标志： ✓ 髓系 ✓ B系 ✓ T系
急性白血病诊断分型
流式I
白血病细胞的系列特异性标志
髓系 MPO+（用FCM，免疫组织化学染色，细胞化学染色证实） 或单核细胞（至少有以下标志中的2项阳性：NSE、CD11c、CD14、 CD64、CD36*、溶酶体
急性白血病诊断分型
形态M
病理及免疫组织化学的优缺点
• 标本直接固定，不容易损失信息，恶性细胞比例更客观，对一些 抽不出或少见细胞，仍可诊断。如伴骨髓纤维化、MM、淋巴瘤、 转移癌、组织细胞、巨噬细胞、树突细胞、何杰金细胞等 • 可以直接观察到组织结构，容易确定恶性细胞的组织部位 • 诊断慢、受诊断者个人经验及知识水平影响大 • 对一些组织结构无破坏、细胞形态改变不大的细胞，难以鉴定良 恶性及成熟度 • 有些恶性细胞在液体中，难以获取组织标本，难以判断组织结构
急性白血病诊断分型
流式幼稚B淋巴细胞增生，未见异常表型
急性白血病诊断分型
病例4 NK细胞白血病移植后40天，骨髓涂片 8%的幼稚细胞
急性白血病诊断分型
流式: 未见表型异常细胞，CD34阳性细胞 为幼稚B淋巴细胞
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C ▪ 中期分裂相的染色体分析
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C ▪ AML：50%~90%的患者细胞遗传学可检出 异常克隆
诊断误区举例
原始细胞增多是诊断前体恶性血液病尤其AL的重要指 标，但原始细胞应根据免疫学标志/基因/染色体证 实为恶性造血前体细胞
▪ 一些形态上的原始细胞可以是正常造血细胞（尤其 见于儿童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化疗 后或移植后）
急性白血病诊断分型
病例3 儿童B-ALL,化疗3年后停药，来我院复查，骨 髓涂片8%的幼稚细胞
急性白血病诊断分型
▪ MICM整合诊断对恶性血液病进行诊断和分 型重复性更好、更客观
▪ 并且能更好地帮助判断预后 ▪ 指导制定治疗方案及策略，监测疗效
急性白血病诊断分型
形态M
细胞形态及细胞化学分析的优缺点
优点： 直观：镜下直接观察细胞形态，对MDS的诊断、一些少见
的、大的恶性细胞的确定优于流式细胞分析 恶性细胞的比例更准确： 简单快速，有显微镜即可完成报告 缺点： 人为因素影响大 难以鉴别细胞的成熟阶段，B、T等系列的恶性细胞 细胞较成熟时，难以鉴别良恶性 不能提供太多的预后信息
T细胞系 cCD3+(用抗CD3ε链的单抗及FCM分析，不能用免疫组化的抗CD3ζ链 多克隆来检测，因为后者不是T细胞特异性抗原) 或sCD3+
B细胞系 CD19强阳性并同时有以下标志中的至少1项阳性：CD79a、cCD22、 CD10 或CD19弱阳性并同时有以下标志中的至少2项阳性：CD79a、cCD22、 CD10
出血 ▪ 浸润：肝脾淋巴结肿大、皮肤、中枢神经系
统等浸润
急性白血病诊断分型
Leabharlann Baidu
急性白血病分型
➢ FAB分型: 细胞形态学及细胞化学染色 AML: M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7 ALL: L1、L2、L3
➢ WHO分型: 2008年修订 MICM
急性白血病诊断分型
MICM整合诊断
• M: 形态学、细胞化学、病理 • I: 免疫学，包括免疫组化、流式细胞分析 • C: 染色体、荧光标记探针的原位杂交(FISH) • M: 分子生物学：白血病融合基因、基因突变、 克隆性基因重排、正常基因表达水平过高
• 可帮助确定免疫治疗的靶点并监测疗效，如CD20、CD19是监测 MRD覆盖面最广的方法。
• 快速、简便、重复性好
缺点：
•不能确定组织结构，一些罕见的大细胞不能分析到，一些细胞粘 附性高，难以抽出。因此对HL等难以确诊。
•判断恶性细胞的比例不如形态准确，对M6、MDS的诊断不如形态
•预后价值不如染色体和基因急性白血病诊断分型
▪ ALL：大约60%～85%的患者可检出克隆性 染色体畸变
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
急性白血病诊断分型
细胞遗传学C
染色体的诊断价值
• 一些染色体有诊断价值: 如重现性染色体异常，如t(8;21)， inv(16)、t（16；16）、 t(15;17)（q22;q12）， t(5;14)(q31;q32) ，t(3;3),t(4;11)可直接诊断急性白血病； • 一些染色体和/或基因有辅助诊断价值，如5q31、CEP7、 7q31、CEP8、20q、CEPY、P53 高度疑似MDS等； • 有-7、5q-、 t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、复杂染色体等的 急性白血病预后不好