分光光度计计算公式
分光光度计说明书
沪制01080010号722/721型可见分光光度计［使用说明书］上海凤凰光学科仪有限公司目录一、仪器的主要用途 (2)二、仪器的工作环境 (2)三、仪器主要技术指标 (2)四、仪器的工作原理 (3)五、仪器的光学原理 (3)六、仪器的安装使用维修 (5)七、仪器的成套性 (9)八、仪器日常保养与维修 (9)附页故障分析 (9)产品合格证、装箱单 (15)保修卡.......................................................... ......... (16)一、仪器的主要用途722/721型可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的分析。
该仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。
二、仪器的工作环境2.1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃～35℃，相对湿度不超过85%。
2.2 使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。
2.3 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。
2.4 电扇不宜直接向仪器吹风，以免影响仪器的正常使用。
2.5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
2.6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。
推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。
使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。
2.7避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使用。
三、仪器的主要技术指标及规格四、仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理——比耳定律。
分光光度计 原理
72型分光光度计原理72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。
其光学系统如图5-11所示。
72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。
如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。
反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。
单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。
样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。
每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。
定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。
如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。
测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。
测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。
纳氏试剂分光光度法测定水中氨氮标准
纳氏试剂分光光度法测定水中氨氮标准
试剂和仪器：
纳氏试剂、蒸馏水、比色皿、分光光度计
操作流程：
1.取样：取一定量的待测水样，先进行前处理。
即用蒸馏水洗净比色皿后，加入待测水样，至刻度线。
2.添加试剂：用分度玻璃管向比色皿中加入纳氏试剂7.5ml，搅拌，室温放置10分钟。
3.进行分光测定：用分光光度计在680nm波长进行吸光度的测定，将比色皿放置在光路中，操作时注意比色皿中是否有气泡。
4.做样：将待测水样中的氨氮含量与纳氏试剂反应生成的产物的吸收光强度之间建立标准曲线，计算样品中的氨氮含量。
标准曲线与结果分析：
1.建立标准曲线：取一定量活水，分别加入0、0.7、1.4、
2.1、
3.5、7.0ml氨
标准溶液，并用蒸馏水配成100ml,加入纳氏试剂，操作3中所述的分光测定方法，得到吸光度值。
以吸光度为纵坐标，氨标准溶液中氨氮的质量浓度为横坐标，做出标准曲线。
2.计算结果：通过标准曲线找出待测水样的吸光度值，即可计算出含量。
样品中的氨氮含量，用公式计算：C=(S-A)/k，其中S为待测水样的吸光度，A为纯水的吸光度，k为标准曲线斜率，C为样品中氨氮的含量。
3.结果分析：根据计算出的样品中氨氮含量，判定水质是否合格。
若氨氮含量超标，则需在水处理工艺中加入相应的氨氮去除方法。
紫外-可见分光光度法
E=A / C C为100ml溶液中所含被测物质的重量 （按干燥品或无水物计算），g
（C = 0.003001g ×（1-水分）/ 100ml)
二.鉴别: 按各该品种项下的规定，测定供试品
溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有 的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收 与最小吸收的比值，均应符合规定。
在高精度的分析测定中（紫外区尤其 重要），吸收池要挑选配对。因为吸收池 材料本身的吸光特征以及吸收池的光程长 度的精度等对分析结果都有影响。
玻璃吸收池因为能吸收紫外光，故只 能用于320nm以上的可见光区。
石英吸收池因不吸收紫外光而常用 于3０0nm以下的紫外光区，但也可用于 可见光区。
最常用的光路长度为: 1cm的吸收池。
表示方法：
（1）百分吸收系数（E）：
以
E 1% 1cm
表示。
E=A/C(%)×L(cm)
中国药典规定的吸收系数即为
E 1% 1cm
。
在用吸收系数法计算含量时，E11c%m 通常要
大于100
（2）摩尔吸收系数（ε）：
当溶液的浓度（C）为1mol/L,光路长 度（L）为1cm时，相应的吸光度为摩尔吸 收系数，以ε表示。
通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长 范围为190～900nm。
第二节 光吸收基本定律和吸收系数
1.光吸收基本定律： 比尔—郎伯（Beer—Lambert）定律
为光吸收基本定律，是分光光度分析的 理论基础。 Lambert于1730年提出了光 强度与吸收介质厚度的关系。1852年 Beer提出了光强度与吸收介质中吸光物 质浓度之间的关系。
光源为空心阴极灯。每种元素都 有各自的空心阴极灯，因此原子 吸收光谱是锐线光谱。
分光光度计测定物质浓度实验
绘制图表：将 实验数据绘制 成图表，便于 观察和分析数 据的变化趋势。
数据分析：对 实验数据进行 分析，找出可 能存在的误差 和干扰因素， 提高实验的准
确性。
添加标题 添加标题 添加标题 添加标题
数据保存：将 实验数据保存 在安全的地方， 以备后续分析
和参考。
添加标题
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关闭电源，拔掉电源线
添加标题
● 烧杯：用于溶解、稀释、混合等操作 ● 试管：用于少量试剂的反应或测试 ● 滴定管：用于精确滴定液体体积 ● 容量瓶：用于精确配制溶液 ● 离心管：用于离心分离液体和固体 ● 移液管：用于精确转移液体 ● 漏斗：用于过滤或转移液体 ● 玻璃棒：用于搅拌、转移液体或固体 ● 滴定管夹：用于固定滴定管 ● 玻璃器皿清洗剂：用于清洗玻璃器皿
数据分析：根 据处理后的数 据，分析物质 的浓度和吸光 度之间的关系
结果展示：将 分析结果以图 表或文字的形 式展示在PPT 中
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浓度计算公式： C=A/V
A：吸光度，V：溶 吸光度A可以通过 溶液体积V可以通 浓度C可以通过浓 浓度计算结果可以
度、数据处理
04
注意事项：避免样品污染、保持仪器清洁、
Байду номын сангаас
正确操作仪器
● 实验试剂：硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、 硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、 硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫 酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫 酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫 酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫 酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫 酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸 锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸 钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸 银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸 铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸 锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、 硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸
纳氏试剂分光光度法步骤
纳氏试剂分光光度法步骤
纳氏试剂分光光度法是一种常用的分析化学方法，用于测定样品中铜、铁、钴等离子的浓度。
具体步骤如下：
1. 准备工作：将纳氏试剂溶液与样品混合，使铜、铁、钴等离子与纳氏试剂发生络合反应。
此外，还需要准备分光光度计，设置合适的波长及其宽度。
2. 建立标准曲线：新调配的标准溶液，应当浓度依次设为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、
3.0、3.5、
4.0、4.5、
5.0、5.5与
6.0等11个浓度值。
令每个标准溶液吸收率按下列公式计算:As=kC,（其中C为溶液的浓度，k为一种计算系数）。
将吸收率y作为因变量，浓度C作为自变量，绘制出标准曲线。
对于未知样品，可以利用标准曲线通过读出其吸光度计算出浓度。
3. 电泳：电泳的目的是在准备待测样品的同时使样品中的离子与纳氏试剂充分结合并分解分子比较大的络合物。
这时需要使用电场将电泳所有分子分离开来。
4. 测定吸光度：将待测样品吸光度读数与事先制定好的标准曲线相比较。
利用标准曲线中浓度与吸光度之间的关系，就可以求出样品中铜、铁、钴等离子的浓度，从而进行分析。
总之，纳氏试剂分光光度法是一种较为简单的离子分析方法，对于工业生产与科学研究都有着广泛的应用。
在实际应用中，需要充分理解其测量方法与注意事项，才能准确测出样品中离子的浓度。
分光光度法在药品中应用全篇
比耳-郎伯定律适用范围：
1.溶液的浓度不能过高或过低，使测 定结果的相对误差最小的最佳透射率 为T=37%左右。
2.所用溶剂不得与测定物质有分子间 缔合，生成复合物、异构化或出现酸 碱平衡。
content
1
概述
2 分光光度法的基本原理
3 紫外分光光度计的使用
紫外－可见分光光度法
4
在药检中应用
二.分光光度法的基本原理
• 在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高， 一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物 质即可测定，误差约为1-2%，在此区域内， 物质对光的吸收主要系分子中电子的能级 跃迁所致，同时伴有分子的振动和转动能 级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓， 选择性不如红外光区，故紫外-可见光区主 要用于定量分析以及作为物理常数的测定。
小结：
紫外-可见分光光度法具有灵敏度和精 密度高，操作简便、快捷等优点。已成为 药品检验的一种不可替代手段。目前各国 药典及药物标准中含量测定采用的方法以 分光光度法最多。在医院制剂的质量控制 中紫外-可见分光光度法也得到普遍的应用。
4
在药检中应用
四.紫外-可见分光光度法 在药品检验中的应用
药典和药品标准中应用紫外-可见分光光 度法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、 纯度检查、溶出度、含量均匀度检查和含 量测定等等。
1.吸收系数：
药品的吸收系数是药品的理化特性常数， 可作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。 对紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进 行精制时，应进行到产品在其特定波长测定 吸收系数达到一个稳定的最大值时为止，因 此吸收系数同其它物理常数一样，也可作为 判断药品纯度的依据。
（nm）
（最小）
（最大）
313 （最小）
紫外分光光度法计算
第20章 吸光光度法思 考 题1. 什么叫单色光？复色光？哪一种光适用于朗伯－比耳定律？答：仅具有单一波长的光叫单色光。
由不同波长的光所组成光称为复合光。
朗伯--比耳定律应适用于单色光。
2. 什么叫互补色？与物质的颜色有何关系？答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。
当混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。
3. 何谓透光率和吸光度？ 两者有何关系？答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用T 表示 T =tI I 吸光度是吸光物质对入射光的吸收程度，用A 表示，A εbc =，其两者的关系 lg =-A T4. 朗伯-比耳定律的物理意义是什么？ 什么叫吸收曲线？ 什么叫标准曲线？答：朗伯--比耳定律是吸光光度法定量分析的理论依据，即吸光物质溶液对光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。
数学表达式为 lg A T εbc =-=吸收曲线是描述某一吸光物质对不同波长光的吸收能力的曲线，即在不同波长处测得吸光度，波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图即可得到吸收曲线。
标准曲线是描述在一定波长下，某一吸光物质不同浓度的溶液的吸光能力的曲线，吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图即可得到。
5. 何谓摩尔吸光系数？质量吸光系数？两者有何关系？答：吸光系数是吸光物质吸光能力的量度。
摩尔吸光系数是指浓度为1.0 mol·L ，液层度为1cm 时，吸光物质的溶液在某一波长下的吸光度。
用ε表示，其单位 11cm mol L --⋅⋅。
质量吸光系数是吸光物质的浓度为1g 1L -⋅时的吸光度，用a 表示。
其单位 11cm g L --⋅⋅ 两者的关系为 εM a =⨯ M 为被测物的摩尔质量。
6. 分光光度法的误差来源有哪些？答：误差来源主要有两方面，一是所用仪器提供的单色光不纯，因为单色光不纯时，朗伯—比耳定律中吸光度和浓度之间的关系偏离线性；二是吸光物质本身的化学反应，其结果同样引起朗伯—比耳定律的偏离。
分光光度计检定规程详细
分光光度计检定规程详细UV-2450简介V－2450是一款博得了用户高度评价的紫外可见分光光度计，性能卓越且操作简单方便，与功能强大的操作软件UVProbe结合，可以具备强大的功能。
小光斑的光学系统使得微量的测定更为方便。
UV-2450紫外可见分光光度计特点1.高水平的超低杂散光UV－2550采用优异的DDM（双闪耀衍射光栅、双单色器）技术实现了超低杂散光（0.0003％以下）和高光通量。
UV－2450虽然采用单单色器，杂散光也在0.015％以下。
低的杂散光可以对高浓度的样品不进行稀释而直接测定。
2.通用型的软件UVProbeUV－2450/2550通过新一代的中英文双语操作软件UVProbe控制，包含光谱测定、光度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测定到研究解析都可以通过它实现。
UVProbe实现了真正的QA/QC功能，完全支持GLP、GMP。
另外还可以加载膜厚测定、色彩分析等软件。
3.丰富的附件选择和广泛的应用领域生命科学领域：可对从生命体内得到的微量样品进行测试。
积分球测试：可以对浑浊样品和粉末状的样品进行测试。
反射附件：可以对光学材料进行相对反射和绝对反射的测定。
UV 2450紫外可见分光光度计检定规程本仪器工作波段为190~900nm，，将其分为190~340nm、340nm~900nm两段分别检定。
1、计量性能要求1.1波长最大允许误差：A段：0.5，B段：1.01.2波长重复性：A段：0.2，B段：0.51.3噪声与漂移：0%透射比：0.1；100%透射比：0.2；漂移：0.21.4透射比最大允许误差：A段：0.5，B段：0.51.5透射比重复性：A段：0.2，B段：0.2。
分光光度法及分光光度计使用方法
I0 I
值大，表示溶液吸收光线较多；
当I 0时，lg I0 值无穷大，表示光线几乎被溶液完全吸收，即溶液不透光。 I
由此可见， lg I0 表示溶液对光吸收的程度，称作吸光度（absorbance）， I
用A表示，即A lg I0 I
2012春季学期
生物化学与分子生物学实验教学中心
如何求被测组分的含量
分光光度法
南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心
2012春季学期
内容
1 分光光度法的原理 2 如何求被测组分的含量
3
3 分光光度计的基本结构 4 分光光度计的使用与注意事项
2012春季学期
生物化学与分子生物学实验教学中心
分光光度法
• 概念：是利用物质所特有的吸收光谱来 鉴别物质或测定其含量的一项技术。
lg Io k l ＋ lg Io k c ＝ lg Io k c l
I
I
I
2012春季学期
A k cl
生物化学与分子生物学实验教学中心
分光光度法的原理
lg Io k c l IΒιβλιοθήκη 公式的意义：当I
I
时，
0
lg
I0 I
0，表示溶液完全不吸收光线；
当I＜I0时，lg
若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然 得到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线 。以后对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测 定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。
2012春季学期
生物化学与分子生物学实验教学中心
根据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度
。
A
0.8 0.6 0.4
叶绿素测定分光光度法
叶绿体色素含量的测定——分光光度法叶绿体色素含量的测定——分光光度法叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。
因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度，根据经验公式即可计算出色素溶液中各色素浓度，不同溶剂所提取的色素吸收光谱有差异，因此，应使用不同的计算公式。
叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。
叶绿体色素80 ％丙酮提取液中叶绿素a 和 b 及类胡萝卜素分别在663nm 、646nm 和470nm 波长下有最大吸收峰，而95 ％乙醇提取液中它们则在665nm 石49nm 和470nm 波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素丙酮（或乙醇）提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。
[ 实验目的]掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。
[ 器材和试剂]1 ．植物材料新鲜（或烘干）植物叶片，如菠菜叶片等。
2 ．实验器材分光光度计、天平、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、棕色容量瓶、吸水纸、擦镜纸和滴管。
3 ．实验试剂80 ％丙酮（或95 ％乙醇）、石英砂和碳酸钙粉。
[ 操作步骤］1 ．色素的提取①称取新鲜（或干材料）的洗净擦于的植物叶片0.5g （或一定面积），去中脉、剪碎后放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2~3ml80 ％丙酮（或95 ％乙醇），冰浴中研磨至组织变白，再加丙酮10ml ，研成匀浆，暗处静置约10m in 。
②将提取液过滤到50 ml 棕色容量瓶中，用丙酮反复冲洗研体与研棒数次并用少量丙酮反复冲洗滤纸和残渣，直至无绿色为止，以使色素全部转移入容量瓶。
最后用丙酮定容至50 ml ，摇匀，并保存于暗处备用待测。
分析化学-原子吸收分光光度法
非吸收线干扰是一种背景吸收（background absorption）。
现象：
原子化过程中生成的气体分子、氧化物、盐类等对共振线 的吸收及微小固体颗粒使光产生散射而引起的干扰。
消除方法：
邻近线法、连续光源（在紫外光区通常用氘灯）法、塞 曼（Zeeman）效应法等。
化学干扰 （chemical interference）
∝ 基态原子数N
这是原子吸收法的重要理论基础，如能准确测量积分吸 收，即可求得原子浓度。
峰值吸收法 (peak absorption)
采用锐线光源，通过测定吸收线中心频率的峰值吸收系 数计算待测元素的原子数。
2 ln2 2 ln 2 K K d ν KN K0～N 0 ν Δ ν π ν π
原子从基态激发到能量最低的激发态（称为第一 激发态），为共振激发，产生的谱线称为共振吸 收线。 共振线是元素所有谱线中最灵敏的谱线。常用元 素最灵敏的第一共振吸收线作为分析线。原子吸收 线一般位于光谱的紫外区和可见区。
原子在各能级的分布
理论研究和实验观测表明，在热平衡状态时，激发态原子数 Nj 与基态原子数No的关系可用玻尔兹曼 （Boltzmann）方程表示
压力变宽(pressure broadening)
由于吸光原子与蒸气原子相互碰撞而引起能级稍微变 化，发射或吸收光量子频率改变而导致的变宽。
• 赫鲁茲马克变宽（Holtsmark broadening， ν R ） 又称共振变宽，同种原子间碰撞引起的谱线变宽，它随 试样原子蒸气浓度增加而增加。
检测器的作用是将单色器分出的光信号进行 光电转换，常用光电倍增管。
原子吸收分光光度计的类型
分光光度计测rna计算公式
分光光度计测rna计算公式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：分光光度计是一种常用于测定溶液中物质浓度的仪器，利用物质在特定波长下对光的吸收来测定其浓度。
在生物学领域中，分光光度计常被用于测定核酸分子（如RNA）的浓度。
而测定RNA浓度的计算公式则是非常重要的一部分。
本文将介绍分光光度计测定RNA浓度的原理和计算公式。
一、分光光度计测定RNA浓度的原理在分光光度计中，通过设置适当的波长，使得待测样品中的RNA 分子对特定波长的光具有较强的吸收。
光通过样品时，被RNA分子吸收的光强度与RNA分子的浓度成正比。
通过测量入射光和出射光的光强度差，可以计算出样品中RNA的浓度。
在进行测量时，通常会使用一个叫做吸光度（Absorbance）的参数来表示样品对光的吸收程度。
吸光度与样品中RNA的浓度成正比，可以通过下面的公式来表示：Absorbance = ε × c × l二、计算公式的具体应用在实际操作中，我们通常会先制备一系列不同浓度的RNA标准溶液。
通过测定这些标准溶液的吸光度，可以建立起一条吸光度与RNA 浓度之间的标准曲线。
利用这条曲线，我们就可以通过测定待测样品的吸光度来计算出其RNA的浓度。
以测定RNA浓度为例，我们首先要根据实验条件选择适当的波长和摩尔吸光系数。
通常以260nm的波长为例，对于RNA而言，摩尔吸光系数ε约为40 ng/ml^-1·cm^-1。
c为RNA浓度，Absorbance为待测样品的吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程。
通过这个公式，我们可以很方便地计算出样品中RNA 的浓度。
三、实验操作的注意事项在进行测定RNA浓度的实验时，有一些注意事项需要注意。
要小心操作，避免污染样品，以免影响测量结果。
要注意保持仪器的稳定性和精准度，尽量避免仪器的误差。
要注意选择适当的波长和摩尔吸光系数，以保证测量结果的准确性。
要注意样品的光程要一致，以保证吸光度的准确性。
紫外可见—分光光度计分析原始记录
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样品名称：
检测项目：
检测时间：
检测地点：
检测依据：
室温：。C
湿度：%
显色温度：。C
仪器名称及仪器编号:紫外可见—分光光度计
允许误差：
液槽厚度：cm
测定波长: nm
参度
（mg/l）
回归方程：y= x
相关系数：r=
计算公式：ω=
样品编号
取样量
定容体积
V/mL
吸取体积
V1/mL
吸光度
A
A - A0
含量
平均值
误差
%
备注：
测试人：校核人：复核人：
年月日年月日年月日
紫外可见—分光光度计分析原始记录（表二）
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样品编号
取样量
定容体积
V/mL
吸取体积
V1/mL
吸光度
A
A - A0
含量
平均值
误差
%
备注：
测试人：校核人：复核人：
年月日年月日年月日
第七章分光光度法
第七章分光光度法【基本要求】1.1 掌握分光光度法基本原理—Lambert-Beer定律，能熟练运用Lambert-Beer 公式进行有关计算。
1.1 掌握吸光度、透光率、吸光系数、摩尔吸光系数的概念。
1.2 明确溶液颜色与光吸收的关系。
1.3 了解物质对光的选择性吸收及吸收光谱。
1.4 了解分光光度计的基本构造；提高测量灵敏度和准确度的方法。
1.5 了解紫外分光光度法进行物质定性分析和定量测定的基本原理。
【重点难点】2.1 重点分光光度法原理－Lambert-Beer定律。
紫外分光光度计的使用2.2 难点提高测量灵敏度和准确度的方法。
【讲授学时】4学时4.1 第一节概述一、比色分析法比色分析法：利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶液中有色物质的含量。
有色物质溶液颜色越深，浓度越大；颜色越浅，浓度越小。
二、比色分析法测定步骤①选择适当显色剂，使被测组分转变成有色物质，称为显色阶段。
测定无色溶液时要进行显色阶段。
②选择最佳条件测定溶液的深浅度，称为比色阶段。
三、发展过程：目视比色法→光电比色法→分光光度计（吸光光度法）四、比色与分光光度法的特点比色和分光光度法主要用于测定微量组分。
1、灵敏度高：测定试样中微量组分（1～0.001%）常用方法，甚至可测定10-4 ~ 10-5%的痕量组分。
2、准确度高：一般比色法相对误差为5～10%，分光光度法为2～5%，其准确度虽比重量法和滴定法低，但对微量组分的测定已完全满足要求。
如采用精密蓝450-480紫400-450红650-750青蓝480-490青490-500绿500-580黄580-600橙600-650白光分光度计，误差将减少至1～2%。
3、应用广泛：几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用比色法和分光光度法进行测定。
4、操作简便、快速，仪器设备也不复杂。
例如：试样中含Cu 量为0.001%，即在100mg 试样中含Cu 0.001mg ，用比色法可以测出。
紫外可见分光光度法在药品检验中的应用
9
三.分光光度法的基本原理
•在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高， 一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物质即 可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物质 对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁所 致，同时伴有分子的振动和转动能级的变化， 电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不如红 外光区，故紫外-可见光区主要用于定量分析 以及作为物理常数的测定。
6
A
B
C E
D
7
•光子能量与其传播频率和波长的关系：
E=h=h*C/ 其中:E—光子跃迁能量 h—普郎克常数（6.62619610-34J） —频率,每秒发出波的数目(单位：HZ)
C—光速（2.9979251010 cm/s）
1/—波数
由上式可以看出：光子能量与频率成正比，与 波长成反比
40
（2）.吸收系数法：
应用范围：
•单一成分药剂的测定。
38
测定要求
• 分别配制供试品溶液和对照品溶液
• 对照品溶液所含对照品的量应为供试品溶液中 被测组分标示量的10%以内。
• 所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保 持一致。
39
• 计算公式：
Cs=Cr*As/Ar
Cs：供试品溶液的浓度
As：供试品溶液的吸光度
Cr：对照品溶液的浓度
Ar：对照品溶液的吸光度
14
四.紫外-可见分光光度计
1.基本构造：
稳压电源 记录装置
光源
波长选择装置
样品池
检 测 器
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•光源： 可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯 •波长选择装置： 一般简易的仪器，如比色计多采用滤光片来获得一定 波长的光辐射。 分光光度计则采用棱镜或衍射光栅为核心构成单色器， 以获得纯度较高的单色光。 •样品池（吸收池）： 玻璃吸收池仅适用于320nm以上波长的测定。 水晶或熔融石英吸收池可用于200nm以上波长的测定。 最常用的是光路长度为1cm的吸收池。 •检测器： 紫外-可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、 光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。
分光光度计计算公式
分光光度计计算公式
1. Lambert-Beer定律
Lambert-Beer定律表示为：A = εlc
其中，A是吸光度，ε是摩尔吸光系数，l是光程长度，c是溶液中色素的浓度。
2.直接测量法
直接测量法是最简单的测量吸光度的方法，计算公式为：
C=A/(εl)
其中，C是溶液中色素的浓度，A是样品的吸光度，ε是摩尔吸光系数，l是光程长度。
3.双波长法
双波长法是一种常用的测定溶液中色素浓度的方法，该方法根据溶液中色素在不同波长下的吸光度差值与浓度的线性关系进行计算。
计算公式为：
C=(A1-A2)/[(ε1-ε2)l]
其中，C是溶液中色素的浓度，A1和A2是样品在两个不同波长下的吸光度，ε1和ε2是两个波长下的摩尔吸光系数，l是光程长度。
4.标准曲线法
标准曲线法是一种常用的测量物质浓度的方法，它利用一系列已知浓度的溶液的吸光度数据建立一个浓度与吸光度之间的线性关系曲线，通过测量未知浓度样品的吸光度并在曲线上插值得到其浓度。
标准曲线的计算公式为：
C=(A-b)/m
其中，C是溶液的浓度，A是样品的吸光度，m是标准曲线的斜率，b 是标准曲线的截距。
以上就是分光光度计计算公式的详细解释，不同的方法适用于不同的实验条件和测量样品。
在使用分光光度计时，根据实际需求选择适当的计算公式可以准确测量样品的浓度。
分光光度法曲线公式
分光光度法曲线公式
分光光度法中，标准曲线给出的计算公式通常为A=K1*c+K0。
这个公式通常用来计算吸光度（A）和浓度（c）之间的关系。
其中，K1和K0是常数，代表曲线的斜率和截距。
然而，需要注意的是，用仪器显示的吸光度代入公式计算的结果和仪器给出的结果可能存在误差。
这可能是由于仪器本身的误差、样品的不均匀性、实验条件的变化等因素导致的。
因此，在实验中需要注意控制实验条件，选择合适的样品和实验方法，以提高实验的准确性和可靠性。
此外，分光光度法还可以用于测定样品中某些特定离子的浓度。
例如，可以用标准曲线法测定样品中铁离子的浓度。
具体步骤如下：
1. 准备一系列不同浓度的铁离子标准溶液，分别测定其吸光度。
2. 将吸光度和浓度之间的关系绘制成标准曲线。
3. 测定未知样品中铁离子的吸光度。
4. 根据标准曲线，计算未知样品中铁离子的浓度。
需要注意的是，在实验中需要注意控制实验条件，如波长、光程、酸度、干扰物质等。
此外，为了保证实验结果的准确性，还需要进行空白实验和对照实验等质量控制措施。
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