磷酸二氢钾流动相图
高效液相色谱
高效液相色谱仪（HPLC）开机先打开电脑，然后从左往右开。
在waters600上按底下横排第二个键（Direct）→set：35（柱子温度）测B组、叶酸冲机器甲醇流动相二次水A B C D100（过一下）抽水流速（0.10）100（过一下）抽水（流速0.10）3070各至少40分钟流量为0.5、1.0一点一点往上调703010030703070做样结束后调流速为1.53070冲仪器。
自动进样器：打开开关按纽，按第三个键（PURGE PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。
过一会等所有按纽跳到第一个键（START PUGRE）显深色后，按最后一个键，回到主菜单，关机。
（这是每次做盐类产品做完后在关主机之前冲洗针头）（注：在测完D3后应该在第二天早上要冲洗针头）打开开关按纽，按第三个键（PURGE PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。
过一会等所有按纽跳到第一个键（START PUGRE）显深色后，按最后一个键，再按最后第二个键YES。
然后再最后一个键，回到主菜单。
打印的报告中的PDA的结果表中看：纯度1角度＜纯度1阈值说明不受杂质影响（较好）计算标样含量：标样质量*标品浓度*掩盖系数*1000000/50（容量瓶定容体积）/进样品稀释倍数（掩盖系数VB1*0.787VB6*0.823）计算样品含量：样品面积/标品面积*标品含量*100/样品质量（ug/ml）建立方法：计算好标样含量后先选中标品浓度最低的然后按住ctrl键再选中其它浓度和第一个样品右击鼠标选择处理→选使用…..输入要建立的方法名（如VB3、VB6等）确定。
在通道中双击样品（第一个）点击峰形再右击鼠标选中提取色谱再右击选中提取光谱输入波长回车。
选中工具栏中处理方法向导按步骤做下去至完成，选择处理方法象二本书样子的图标选适用性输入1，选文件中的保存处理方法，再选方法组图标象一本书样子的输入方法（如VB3），选文件中的保存处理方法→直至保存。
液相色谱-原子荧光光谱法（LC-AFS）法测定大米中的无机砷
16001400120010008006004002000.0 2.0 4.0 5.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0时间/min图1 标准流动相As(Ⅲ)、As(Ⅴ)标准系列色谱图Dec. 2021 CHINA FOOD SAFETY时间/min0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.02000180016001400120010008006004002000图2 混合流动相As(Ⅲ）、As(Ⅴ)标准系列色谱图流动相分析As(Ⅲ)、As(Ⅴ)系列标准溶液，线性试验结果见表1。
由表1可知，在5.0～100 µg/L ，线性方程的相关系数良好，均大于0.999。
表1 线性试验结果（单位：µg/L）线性浓度范围线性方程相关系数5.0～100Y =214.4X -26.3565.0～100Y =171.48X -156.05在重复性条件下，使用混合流动相分析不同浓As （Ⅴ）标准溶液，结果见表2。
由Ⅲ)和As(Ⅴ)测定结果的绝对差值与算术平均值的比值均不超过5%，精密度结果 重复性条件下获得的测定结果的绝对差值与算术 平均值的比值（n =3）重复性10 µg/L 50 µg/L 2.3 2.81.32.6在大米样品中添加不同浓度水平的无机砷标准 3 结论按照《食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定》（GB 5009.11—2014）第行大米无机砷前处理，使用十二水合磷酸氢二钠（Na 2HPO 4·12H 2O ）和磷酸二氢钾磷酸二氢钾混合流动相进行测定，操作简便，在较短时间内分离出三价砷和五价砷，并能较好地测定大米中的无机砷含量，适合大米中无机砷的日常检测。
参考文献[1]SMITH A H, HOPENHA YNRICH C, BA al.Cancer risks from arsenic in drinking-water[J].Environ Health Persp,1992,97:259-267.[2]云洪霄,张磊,李筱薇,等.大米中无机砷测定方法的研究[J].卫生研究,2010,39(3):316-320.。
缓冲盐pH选择
一、磷酸二氢钾：无色结晶或白色颗粒状粉末。
在空气中稳定，在400℃时失去水，变成偏磷酸盐。
溶于约4.5份水，不溶于乙醇。
pH4.4～4.7。
相对密度2.34。
熔点252.6℃。
pKa=4.4—4.7（磷酸二氢钠的pKa=4.5）无色结晶或白色结晶性粉末。
无气味。
热至100℃失去全部结晶水，灼热变成偏磷酸钠。
易溶于水，几乎不溶于乙醇，其水溶液呈酸性。
0.1mol/L 水溶液在25℃时的pH为 4.5。
相对密度 1.915。
熔点60℃。
二、什么时候需要缓冲溶液？反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5－7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液。
在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。
如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。
如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前，高于或低于被分析物的Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，但缓冲盐的pH值应在它本身PKa的上下1个pH值内，如超出此范围，缓冲作用将大大减弱。
从HH公式：PH＝Pka＋log（[A-]/[A]）得知，溶液PH值高于或低于Pka 2个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。
如果选择不到合适的，样品的pKa与流动相的pH非常接近，那么流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。
缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。
PH＝3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，一般是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。
水产品新鲜度化学指标的检测—K值的测定
K值与挥发性盐基氮的区别
• 因为动物一旦生命活动停止，因为核酸是合成蛋白质的密码，核酸比 蛋白质分解得早，所以ATP的降解早于蛋白质的降解。
• ATP的降解作用就开始，伴随着次黄嘌呤等降解产物的生成。此时蛋白 质还没有开始分解。当ATP的降解产物次黄嘌呤和黄嘌呤浓度很高时， 挥发性盐基氮还很低。
3.流动相配制
流动相：0.02:mol/L磷酸二氢钾溶液 +0.02mol/L磷酸氢二钾溶液=1+1(V/V),用磷酸调 节pH至6.0。
其中：
• 0.02 mol/ L.磷酸二氢钾溶液:准确称取2.722 g 磷酸二氢钾,用水溶解并加水定容至1000 mL。
• 0. 02 mol/L磷酸氢二钾溶液:准确称取4. 566g 磷酸氢钾，用水溶解并加水定容至1 000 ml。
2. K值按下式计算，单位为百分率
式中: MATP——样品中腺苷三磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MADP——样品中腺苷二磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MAMP——样品中腺苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MIMP——样品中肌苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHxR——样品中次黄嘌呤核苷的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHx——样品中次黄嘌呤的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)；
• （4）1mol/L氢氧化钠溶液:称取氮氧化钠40g.用 水溶解并加水稀释至1000mI。
2.标准品配制
• （1）标准储备液:准确称取腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、 腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷各10mg(精确至 0.01mg)，用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度 为1.00mg/mL；准确称取次黄嘌呤5mg(精确至0.01mg)， 用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为0. 500 mg/mL。各标准储备液置于4C冰箱中冷藏保存，保存 期不超过一周。
流动相的离子强度对RP(1).
流动相的离子强度对RP(1)在反相高效液相色谱(RPHPLC)过程中，流动相的离子强度可显著影响可解离的化合物如抗生素的色谱峰形，原因在于流动相的离子强度较低时，色谱填料的固定相易于过载，使离子化的化合物的色谱峰形呈典型的过载特征――峰形接近直角三角形。
随着进样量的增加，色谱区带中高浓度的前半部的保留时间减少，但色谱区带均在同一时刻结束，色谱峰的拖尾因子及峰宽均显著增加，同时被测物与有关物质间的分离也随之变差。
选择合适的缓冲盐并适当地增加流动相的离子强度即可显著改善抗生素的色谱峰形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均随之降低，同时被测物与有关物质间也更加易于分离。
关键词： RPHPLC；抗生素；色谱峰形；流动相；离子强度Influence of the ionic strength of mobile phase on peak shape of antibiotics in RPHPLCABSTRACT The ionic strength of mobile phase can significantly affect the peak shape of ionogenic compounds such as antibiotics in reversedphase high performance liquid chromatography (RPHPLC). The influence may be attributed to overloading of ionogenic analytes in lower ionic strength mobile phase. In such phase, peak becomes increasingly rightangled triangle in shape with increasing sample load together with increasing peak width and tailing. The retention time of the highconcentration front decreases with increasing sample load, while the end of the peak tail has a constant retention time, equal to the symmetrical analytical peak. Due to considerably worse peak shapes, poorer resolution between the main component and its related substances might be observed. With the optimal buffer and the increase of ionic strength, significant improvement in peak shape of antibiotics could be achieved and consequently a decrease in the tailing factor, an increase in the apparent column efficiency as well as an efficient resolution were obtained.KEY WORDS RPHPLC; Antibiotics; Peak shape; Mobile phase; Ionic strength据统计，约80%的药物含有碱性官能团，故碱性化合物的反相高效液相色谱(RPHPLC)行为在色谱学界始终是一个引人注目的研究课题，而具有不同pKa值的碱性药物的RPHPLC分离在药学界的重性正日益被关注［1］。
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明化妆品 32 种禁限用染料成分的检测方法和编制说明附件 2: 化妆品中 32种禁限用染料成分的检测方法 1 范围本方法规定了测定染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分(见附录 A)的高效液相色谱法。
本方法适用于染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分的含量测定。
本方法无法区分所涉及染料成分的游离态、硫酸盐和盐酸盐，化妆品中各种形态同时存在时，应换算成一种形态，以总量表示。
2 原理用无水乙醇水11 的混合溶液提取染发类化妆品中的 32 中禁限用染料成分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。
本方法中 32 种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取 0.5g 样品时的检出浓度及最低定量浓度见表 1。
表 1 32 种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度 - 1 - - 2 - 3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 乙腈，色谱纯。
3.4 亚硫酸氢钠。
3.5 磷酸溶液(19):吸取磷酸(ρ201.69g/mL)10mL，加水 90mL。
3.6 磷酸盐混合溶液:称取十二水合磷酸氢二钠 1.8g、磷酸二氢钾 2.8g 和庚烷磺酸钠(C7H15SO3Na)1.0g，用水稀释至 1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠(1g/L)的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液(3.5)，调节 pH 至 6.0 左右，0.45m 微孔滤膜过滤。
3.7 染料类化合物标准储备溶液(ρ(染料成分)10g/L):称取染料对照品约 100mg(精确至 0.1mg)于 10mL 容量瓶中，以 2g/L 亚硫酸氢钠水溶液无水乙醇(3.1)11的混合溶液定容至 10mL，配成约 10g/L 的单标溶液。
以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施:甲苯-25-二胺硫酸盐和 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 2 种物质直接用2g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容;甲苯-34-二胺直接用无水乙醇(3.1)定容;2-硝基-p-苯二胺和 4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至 25mg，再用无水乙醇(3.1)定容，配成约2.5g/L 的单标溶液。
化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法2023年
附件7化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法Determination of L-Ascorbic acid2-phosphate magnesium ester and other ten components incosmetics1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸、凝血酸（氨甲环酸）11种成分的含量。
本方法第一部分适用于化妆品水剂类、乳液类、凝胶类、贴面面膜类、膏霜类和粉底类化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸含量的测定。
本方法第二部分适用于水剂类、乳液类、凝胶类、贴面面膜类、膏霜类化妆品中凝血酸（氨甲环酸）含量的测定。
第一部分化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的检测2方法提要样品经甲醇水溶液（或添加少量二氯甲烷促溶解）超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，二极管阵列检测器（DAD）检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。
本方法10种原料的检出限、定量下限及取样量为0.5g时检出浓度和最低定量浓度见表1。
表110种原料的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号成分检出限（ng）定量下限（ng）检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）1抗坏血酸磷酸酯镁0.4 1.30.8 2.6 2抗坏血酸葡糖苷 1.0 3.1 2.0 6.2 3苯乙基间苯二酚 4.68.79.217.4 44-丁基间苯二酚 2.7 4.9 5.49.8 54-甲氧基水杨酸钾0.4 1.00.8 2.0 6阿魏酸0.5 1.2 1.0 2.4 7烟酰胺 1.0 3.3 2.0 6.6 8曲酸 1.1 2.1 2.2 4.2 93-邻-乙基抗坏血酸 1.4 2.7 2.8 5.4 10鞣花酸 2.7 6.1 5.412.23试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量
ＨＰＬＣ法测定盐酸二甲双胍片的含量目的：用HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量。
方法：采用Diamond C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L高氯酸（pH3.0）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：218 nm，以峰面积计算。
结果：在0.1~0.3 mg/ml范围内盐酸二甲双胍片的峰面积和浓度呈良好的线性关系，r=0.999 4。
结论：本法简便、快捷、灵敏，可作为盐酸二甲双胍片质量控制的有效方法。
[Abstract]Objective:To establish an HPLC method for the content determination of Metformin Hydrochloride Tables. Methods:Analytical column was Diamond C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid, the flow rate was 1.0 ml/min,UV detection was set at 218 nm and the peak area was calculated.Results:The linear range of metformin hydrochloride was 0.1~0.3 mg/ml,r=0.999 4.Conclusion:The method is simple，rapid and accurate.It can be used for the quality control of Metformin Hydrochloride Tablets.[Key words]HPLC;Metformin hydrochloride;Content determination盐酸二甲双胍是一种双胍类口服降糖药，用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。
饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定
饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定邓虹;雷燕【摘要】试验建立了利用高效液相色谱同时测定饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸含量的方法,并采用Sepax GP-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)进行分析,流动相为pH为3.5的磷酸二氢钾水溶液,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为214 nm,柱温30℃.试验结果表明,在此色谱条件下,6种有机酸分离良好,平均回收率均>95％,RSD<4％.检测结果表明,该方法操作简便易行,准确可靠,可以快速检测饲用酸度调节剂的有机酸含量.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】5页(P8-12)【关键词】酸度调节剂;含量测定;高效液相色谱法【作者】邓虹;雷燕【作者单位】成都大帝汉克生物科技有限公司,成都 611130;成都大帝汉克生物科技有限公司,成都 611130【正文语种】中文【中图分类】S816.7;S815饲用酸度调节剂亦称pH调节剂，是指能够酸化饲料的一类物质。
可降低饲料在消化道中的pH，为动物提供最适消化道环境，已在国内外得到广泛应用。
是继抗生素之后，与益生素、酶制剂、微生态制剂等并列的重要添加剂，是一种无残留、无抗药性、无毒害作用的环保型添加剂。
能保证有益菌群合理生长，病原微生物受到有效抑制，从而达到提高动物生长性能和饲料利用率、增强机体抗病能力的效果[1-3]。
目前酸度调节剂不仅应用在仔猪生产中，在家禽、反刍动物上也有积极的效果，市场也出现了各种类型的酸度调节剂。
国内外报道的有机酸的检测方法主要有电位滴定法、毛细管电泳法、气相色谱法、液相色谱法等[4-10]。
但对苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同时检测分析还未见报道，本试验建立了高效液相色谱同时测定酸度调节剂中的6种有机酸的方法。
1 材料与方法1.1 试验试剂本测定方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682中规定的二级水。
离子色谱法测定磷酸二氢钾的纯度及F-、Cl-的含量
离子色谱法测定磷酸二氢钾的纯度及F-、Cl-的含量刘鹏;张敏;王娜【摘要】建立了离子色谱法同时测定磷酸二氢钾中PO2-、Cl-、F-的方法,在12 min内实现对3种阴离子的分离及同时测定,实验过程通过PO43-的含量计算磷酸二氢钾的纯度.在最佳实验条件下,建立3种离子的标准曲线,其r为0.999 2～0.999 9,检出限为0.051～0.30 μg/mL,样品平均加标回收率为95.6％～104.5％,相对标准偏差为3.1％～4.9％.将测定结果与HG2321-1992《磷酸二氢钾》所规定的方法进行差异性分析,结果表明,实验所建立的方法与标准方法无显著性差异.该方法具有简单、快速、重现性好的优点,适用于磷酸二氢钾生产过程的工艺控制.【期刊名称】《无机盐工业》【年(卷),期】2014(046)002【总页数】3页(P68-70)【关键词】离子色谱法;磷酸二氢钾;纯度;氟离子;氯离子【作者】刘鹏;张敏;王娜【作者单位】金正大生态工程股份有限公司,山东临沭276700;金正大生态工程股份有限公司,山东临沭276700;金正大生态工程股份有限公司,山东临沭276700【正文语种】中文【中图分类】TQ126.34磷酸二氢钾在农业、现代医学、化学工业及食品行业中具有广泛的应用，HG2321—1992《磷酸二氢钾》［1］规定了磷酸二氢钾的纯度及 Cl-、F-含量的测定方法。
标准方法尽管具有较高的准确度和精密度，但操作繁琐、耗费时间，不能满足生产过程中快速检测的需要。
离子色谱法（IC）是20世纪70年代发展起来的新的分析技术，具有灵敏度高，分析速率快，试剂用量少，能同时进行多种离子分析的特点［2］。
因此，笔者采用离子色谱法在12 min内同时完成磷酸二氢钾的纯度及Cl-、F-的含量的测定与分析。
所建立的方具有操作简单、准确可靠、重现性好等优点且自动化程度高，大大提高了工作效率。
1 实验部分1.1 试剂与仪器试剂：磷酸二氢钾（优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司）、氯化钾［指定基准试剂（PT），天津科密欧化学试剂有限公司］、氟化钾［指定基准试剂（PT），天津科密欧化学试剂有限公司］。
HPLC法测定硫化促进剂DM的含量
第!"卷#第$期光谱实验室%&’(!"#)&($!""*年$月+,-./0/1234.562789/:;420:29<=5>245;24<?@A B @C D EE E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E #!""*FGHI 法测定硫化促进剂JK 的含量L 联系人#电话M N "!O P Q !!$R S $"N 办P T N "!O P !O $U **"$N 宅P T V W X @Y ’M X Z ’[\X @Y ’(]D (’A (^A作者简介M 李娜然N $U Q O _P #女#沈阳市人#讲师#研究方向为药物以及药物中间体的合成与分析‘收稿日期M !""!W "a W !S 李娜然L孟祥军N 沈阳医学院基础部药物研究室沈阳市$$""*$P 摘要本文应用高效液相色谱法测定硫化促进剂b c 的含量‘采用d D e f C ]Y ’g b h W i$a 色谱柱#流动相为磷酸二氢钾溶液N "($X &’j k P l 乙腈m!l*#检测波长为!R O A X ‘测定线性范围为"($Q _$(O n o‘关键词硫化促进剂b c #高效液相色谱‘中图分类号M p QR S (S q !文献标识码M g 文章编号M $""O W a $*a N !""*P "$W ""a R W "*$前言硫化促进剂b c N r s Y &t Y u f P 化学名为二硫化二苯并噻唑N !#!v W u Y w f A x &y s Y @x D Y #u Y ]B ’t Y u f P #由于其硫化临界温度较促进剂c 高#操作相对安全#广泛使用于橡胶工业‘近年来#本品在合成头孢类半合成抗菌素时被作为重要的中间体z ${#例如头孢曲松等‘目前#我国已经具有硫化促进剂b c 的国家标准z !{#本标准是针对橡胶上使用的硫化促进剂而制订的#其对质量的控制达不到药用中间体的要求#由于本品没有具体的控制方法#在药物生产过程中经常导致产品的质量和收率不稳定‘我们参考国内外的有关文献z *#O {#使用高效液相色谱法测定本品含量#具有操作快速|结果可靠|重现性好的特点‘!实验部分}(~仪器与试药仪器M 大连依利特科学仪器有限公司产的!!"""型高效液相色谱仪T #%!"""型紫外检测器T V ^s C &X U a 双通道色谱工作站#d D e f C ]Y ’g b h W i $a色谱柱N !""$O (Q X X #R n X P ‘试剂M 乙腈N 色谱纯#天津市四友生物医学技术有限公司P T 磷酸二氢钾N 分析纯P ‘样品M 硫化促进剂b c N沈阳市六环化学研究所P #批号!""$"Q "$#!""$"Q "!#!""$"Q "*‘标准品的制备M 抚顺有机化工一厂生产的精制硫化促进剂b c #使用甲苯进行二次重结晶#批号为!""$"Q ""‘}(}系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂#磷酸二氢钾溶液N "($X &’j kP l 乙腈m!l*为流动相#检测波长为!R O A X #流速$("X k j X Y A #柱温!R _*"%#进样量!"n k #理论板数按硫化促进剂b c 计应不低于*"""‘*结果与讨论万方数据!"#进样量与峰面积关系试验精密称取硫化促进剂$%对照品&’()*置于+,’(-量瓶中*加.’’(-四氢呋喃溶解后*再使用流动相稀释至刻度*摇匀/精密分取.010,0&02(-分别加流动相稀释至+,(-*摇匀备用/精密量取+’3-注入液相色谱仪中*记录色谱图*测量峰面积*以峰面积为纵坐标*进样量为横坐标*进行线性回归*回归方程为4567"289.’1:+";279.’8<*=5’"2222*进样量按硫化促进剂$%计为’".8>.";3)*线性关系良好/!"?精密度试验精密称取硫化促进剂$%对照品&’()*一共8份*分别加入.’’(-四氢呋喃使之溶解*用流动相稀释到+,’(-/精密分取."’(-*分别加入流动相稀释到+,(-*摇匀*分别进样*每个样品+’3-*测定平均结果为22"8@*A B$5’"2,@/精密称取硫化促进剂$%对照品&’()*加入.’’(-四氢呋喃使之溶解*用流动相稀释到+,’(-/精密分取."’(-*分别加流动相稀释到+,(-*摇匀*进样8次*每个样品+’3-*测定平均结果为27"2@*A B$5."’1@/结果表明*本法精密度较好/!"!溶液稳定性试验取同一样品溶液放置’0.010,0&C后测定*A B$为’"81@/!"D含量测定精密称取硫化促进剂$%样品&’()*加入.’’(-四氢呋喃使之溶解*用流动相稀释到+,’(-/精密分取."’(-*分别加流动相稀释到+,(-*摇匀*按照高效液相色谱法E;F*取+’3-注入液相色谱仪中*记录色谱图/另外精密称取于.’,G干燥至恒重的硫化促进剂$%对照品&’()*同上测定/按外标法以峰面积计算*1批样品测定结果分别为22"1@022"8@022",@/;结论精制硫化促进剂$%的主要杂质为合成过程中使用的原料硫化促进剂%*因此*色谱条件的选择应将二者分离*在我们的试验条件下二者得到了良好的分离*见图./硫化促进剂$%不溶于水*也很难溶于一般的有机溶剂*我们参考日本专利使用四氢呋喃进行溶解*但是日本专利使用凝卷万方数据可靠!重现性好的特点"可以作为药品生产过程中控制本品质量的重要手段#参考文献$%&’()*+,-./01234,55632-7,12,8.2.-93:36;,<=:-,2>,?9.-,5@5,6A /9:-7,B C :-7,59536D ,87./358329:5$E &0F G +H I J ’H K H I L E K H I G HM "N O M "O %O "%N N N P Q R P S %0$T &中华人民共和国国家标准汇编0硫化促进剂U V $’&0W X %%O Q Y P %%O Q R P R N 0北京Z 中国标准出版社"%N N Q 0$S &日本岛津制作所0硫化促进剂U V 的[E \]分析$E &0尾野成树0日本专利0特开平M P ^Q Y S Y 0$O &中华人民共和国药典委员会0中华人民共和国药典Z 二部0附录_U $V &0北京Z 化学工业出版社"T Q Q Q 0S T 0‘a b a c d e f g b e h fh i j k e h i e l a ‘m n o p e q kr a c i h c d g f s at e u v e lw k c h d g b h q c g x k o\y z K P {K G V |z W }+K G )P ~!G"#,8.2->,:-36$,?949:,"B 7,:C .:%$,?94./D 3//,%,"B 7,:C .:%%%Q Q S O "10&0D 79:.’(n )b c g s b*[E \]+I H ,(J(-J I H I .++G +G )H ,I /(G H I G H L (-H ,+(-+J I+L 0.(0(L I J 01,IK G K *2H +/K */(*!+G3K L 0K /4I J 3+H ,4.(+K L +*]%R M5T Q Q ++6O 0^++01,I +(7+*I 0,K L I /(G L +L H I J(-8[T E 9O "Q 0%+(*:\’K G J][S ]z "T ;S ’01,I J I H I /H +(G 3K <I *I G )H ,3K L L I H K H T M O G +01,I /K *+7.K H +(G /!.<I +L*+G I K .7I H 3I I G Q 0%^=%0O 5)(-H ,+(-+J I0>a o ?h c l )1,+(-+J I U V "[E \]@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@A A A A 0欢迎您到邮局订阅中国科学院主管中国科学核心期刊出版国内外公开发行保质!高效的期刊B 光谱实验室C 邮发代号Z D E P D F GY R 第%期李娜然等Z [E \]法测定硫化促进剂U V 的含量万方数据。
高效液相色谱法测定磷酸吡哆醛中维生素B6及其有关物质
^w iy tB s s-iy^m PTCA(PART B: CHEM. ANAL.)4M 知识与经验D01：10.11973/lh jy-h\202104014高效液相色谱法测定磷酸吡哆醛中维生素B6及其有关物质陈健、陈突飞、王莉1，盛力1,沈大冬\韩忠耀(1.浙江医药股份有限公司研究院.绍兴312500; 2.黔南民族医学高等专科学校，都匀558000)中图分类号：0657.7 文献标志码： B 文章编号：1001-4020(2021)04-0362-04磷酸吡哆醛（PLP)是维生素B6(VB S)的主要辅酶活性形式，参与多种氨基酸代谢转化[1_2]，其结构式见图1。
其中，涉及氨基酸多种反应，在代谢转换、物质合成中发挥着极为重要的作用[3]。
P L P既 可以作为药物用于临床，促进转氨作用提高体内多巴胺的含量[4]，进而用于治疗帕金森综合征[5];也可 以作为其他原料药的起始物料，用于合成羰基酰胺类药物等研究[6]。
〇图1P L P的结构式Fig. 1S tructural form ula of PLPP L P—般以VB6为原料合成，因此，在PIJP 质量研究中，VB6(已知杂质）和其有关物质（未知杂 质）的含量测定具有十分重要的意义。
长久以来，起 始物料的质量控制在原料药注册技术要求中一直有着举足轻重的地位，人用药品注册技术要求国际协调会议（IC H)及各国药审监督机构相继出台相关技术要求予以规范。
目前，对于P L P的研究，主要以 合成工艺改进、生物代谢转化[9〜]及临床治疗[n 12]居多，对于其质量控制的相关研究鲜有报道。
本工作应用高效液相色谱法（HPLC)建立了P L P中VB6及其有关物质含量测定的方法，为PLP 质量标准的建立，提供更为科学的试验依据和方法参考。
收稿日期：2020-04-26* 通信联系人。
317230913@ 1试验部分l.i仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪，配紫外检测器（VWD)、二极管阵列检测器（DAD)和Agilent OpenLab CDS2.3色谱工作站；XS205型分析天平；S220 型 pH 计。
HPLC法测定人血浆中万古霉素的血药浓度
HPLC法测定人血浆中万古霉素的血药浓度目的建立一种快速、灵敏且检测范围广的HPLC法测定人血浆中万古霉素的浓度，为临床万古霉素血药浓度监测、个体化给药及指导用药提供依剧。
方法在不同流动相配比、沉淀剂及柱温条件下，高效液相色谱法测定人血浆中万古霉素，确定最佳的色谱条件和操作方法。
采用外标法定量，色谱柱：Agilent TC-C18 5u(150mm*4.6mm)；流动相：9%乙腈-91%磷酸二氢钾（PH3.2）；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：236nm；进样量：20ul。
结果分析方法的线性范围为4.69~300.16mg/L，回归方程为Y=10526X-10533（r=0.9998，n=6），万古霉素的低、中、高（9.38、37.52、150.08mg/L）3种浓度的提取回收率介于90%~110%之间，日内及日间精密度的RSD均小于6%。
结论本方法操作简便、快速、准确灵敏，适用于临床万古霉素的血药浓度监测。
关键词：万古霉素，高效液相色谱法，血药浓度Determination of vancomycin concentration in human plasmaby HPLCObjective: To establish a fast,and sensitive detection of a wide range of HPLC method for the determination of vancomycin in human serum concentration,clinical vancomycin blood drug concentration monitoring,individual to provide the basis for drugs and medication guide. Methods: Chromatographic peaks of serum vancomycin concentration under different mobile phase,precipitant and column temperature were analyzed to find the best chromatographic condition and operation ing the external standard method,column chromatography:Agilent TC-C18 5u(150mm*4.6mm),the mobile phase:9% acetonitrile-91% potassium dihydrogen phosphate(PH3.2),the flow rate:1.0ml/min,the column temperature:25℃,the detection wavelength:236nm,and the amount of sample:20ul. Results: The linear range of quantification of serum vancomycin was 4.69~300.16mg/L.The regress equations was Y=10526X-10533（r=0.9998，n=6）,The extraction recovery of vancomycin in low,medium and high concentrations(9.38、37.52、150.08mg/L)were all between 90%~110%.The inter-day and intra-day relative standard deviations (RSD) were less than 6%. Conclusion: The method is simple,rapid,accurate and sensitive,and suitable for clinical monitoring of blood concentration of voriconazole. Key words: vancomycin;HPLC;blood drug concentration万古霉素（Vancomycin）是一种三环糖肽类抗生素，对革兰阳性球菌有强大的抗菌作用，特别是对于目前临床上较为棘手的严重耐药金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌所致的感染有较好的疗效[1]。
配 制 流 动 相
配制流动相
待测样品：
称取磷酸二氢钾（分析纯） g溶于 ml纯净水中，混匀，用磷酸调PH 值为3.5，将其倒入成有 ml乙腈的1000ml烧杯中，充分混匀。
用0.45um 的有机滤膜过滤，超声溶解，备用
配制时间：月日
配制人：
待测样品：
量取ml乙腈，溶于装有 ml纯净水的1000ml烧杯中，用0.45um有机滤膜过滤，滤后超声溶解，备用。
配制时间：月日
配制人：
待测样品：
称取磷酸二氢钾（分析纯） g溶于 ml纯净水中，混匀，用磷酸调PH 值为3.5，将其倒入成有 ml乙腈的1000ml烧杯中，充分混匀。
用0.45um 的有机滤膜过滤，超声溶解，备用
配制时间：月日
配制人：
待测样品：
量取ml乙腈，溶于装有 ml纯净水的1000ml烧杯中，用0.45um有机滤膜过滤，滤后超声溶解，备用。
配制时间：月日
配制人：。
反相色谱流动相的设计
• 疏水性增强 • 更强保留
• 疏水性减小 • 更弱的保留
• 疏水性增强 • 更强保留
• 疏水性减小 • 更弱的保留
31 分子的离子化状态可以由流动性的pH值决定。因此，流动性的pH值能影响具有 离子化基团的分析物的保留性能
pH值对分析物的影响
32
pH值对分析物保留行为的影响
碱化
H+
酸化
烷烃类键合相 33
这很可能是因为乙腈氰基上pi电子影响了分析物上的pi电子和 固定相苯环上的pi电子之间的作用，而甲醇不会有这样的影响。
甲醇在氢键作用下既是强 的质子给予体又是质子接 受体
乙腈上的氰基会干扰固定 相苯环与分析物分子之间 的pi-pi作用
H3C OH
N
CH3
22
苯基色谱柱溶剂的选择
色谱柱:
流动相: 流速: 化合物:
0
1
2
3
4
min
•整体技术载体 •对生物样品接受度高 •Rs 1&2 = 1.35 •背压 = 86 Bar
•塔板数 = 13800
MWD1 A, Sig=220,8 Ref=off (ZA04061A\STEONYX2.D) mA U
100
Onyx™ C18
80
1
2
60
40
20
1.497 1.567
2.485 2.956
3.617
4 3
Area: 209.386 5
12
0
0
1
2
3
4
min
固定相选择性对分离度的影响回顾5
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1、反相色谱柱选择终极指南画报 2、反相色谱柱选择终极指南画册 3、反相柱筛分工具