基因工程凝乳酶

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二 基因工程凝乳酶
★基因工程凝乳酶：采用基因工程技术,可将动物凝 乳酶基因、植物凝乳酶基因等各类基因转入微生 物中表达,获得外源表达凝乳酶。 ★ 在1990年美国FDA已批准基因工程凝乳酶在乳酪生产 中使用,FDA认可了3种凝乳酶产品:克氏乳酸菌凝 乳酶,黑曲霉菌凝乳酶,大肠杆菌K- 12凝乳酶。 ★ • 目前,可作为基因工程表达的宿主菌株主要为酵母 菌、米曲毛霉、大肠杆菌。
2016/4/25
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凝乳酶按其来源可以分为动物凝乳酶、植物凝乳酶、微生物凝乳酶
植物凝乳酶：包括木瓜蛋白酶、 无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、生 姜蛋白酶、合欢蛋白酶，蔬菜凝 乳酶
动物凝乳酶：小牛 皱胃酶，猪胃蛋白酶 ，羔羊胃蛋白酶，水牛和骆驼的 幼仔皱胃酶。
微生物凝乳酶：野生菌株产凝乳 酶（放线菌，真菌，细菌，酒曲 中分离出的根霉和曲霉）和基因 工程菌产凝乳酶。
甲醇营养型巴斯德毕赤酵母 宿主菌
胞外分泌目的蛋白 （培养基上清液）
液态发酵
基因工程凝乳酶
汇报人：乔美玲 组员：李文玉，崔蓬勃，孙浩
一 凝乳酶简介
凝乳酶是一种最早在未断奶的 小牛胃液中发现的天门冬氨酸蛋白 酶,可专一地切割Fra Baidu bibliotek中κ-酪蛋白的 Phe105-Met106之间的肽键，破坏 酪蛋白胶束使牛奶凝结。
凝乳酶不仅可以凝乳，其在干酪成 熟过程中也可起增加风味,改善营 养等作用。
原核生物，其表达的凝乳 酶以包涵体形式存在，增 加了分离提纯的难度。
2016/4/25
真核生物，目的蛋白 分泌到胞外，表达量 高，提取方便，易于 规模化生产。
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基因工程凝乳酶
提纯（硫酸铵 盐析沉淀、离子交换柱、葡聚 糖分子筛提纯）
离心除去菌体（粗酶液）
表达率高，（十倍 甚至上百倍）；可 自行修饰目的蛋白 （对信号肽进行剪 接，形成二硫键， 适度糖基化）；成 本低，易于商业化 生产；不产生毒素， 安全性高；