科研指标测定方法

指标：1、品质指标

硬度、色泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放率、可滴定酸、Vc

2、抗性指标

抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA 原果胶（可溶性果胶）

抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL总酚类黄酮木质素

3、测定方法：

褐变指数

色泽

失重率

腐烂率

呼吸强度

乙烯释放率

硬度

可溶性固型物

可滴定酸：

试剂：0.1mol/L NaOH(4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定) 1%酚酞试剂（1g酚酞加入到100ml50%的乙醇溶液中溶解）

方法：1、NaOH的标定：准确称取105℃下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g ，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%酚酞指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红色。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。

2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%酚酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉色并30秒内不退色为终点（PH8.1-8.3）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度*（滴定滤液消耗的氢氧化钠体积—滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/（滴定时所取滤液体积*样品质量）

Vc：

试剂：5%钼酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA 溶液（称取 6.3g草酸和0.75g EDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）5%H2SO4(体积分数) 偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48ml，溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取Vc100mg，置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用（如果纯度不够应进行标定））提取及测定：1、制作标准曲线： 7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂

试剂试管号

1 2 3 4 5 6 7

Vc标准液/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 草酸EDTA溶液/ml 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 偏磷酸-乙酸溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:19H2SO4/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5%钼酸铵/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 Vc含量/mg 0 10 20 40 60 80 100 加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用1

号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以Vc含量为横坐标，吸光

度为纵坐标，绘制标准曲线。

2、提取及测定：称取5g果蔬组织，加5ml草酸-EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细

转入25ml容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵，冲洗液一并倒入容量瓶中。取一

部分匀浆液经3000g离心10min后，取1ml上清液与标准管同法测定，若样品显

色液中出现沉淀，可过滤后进行比色，不影响测定结果。

计算公式：Vc含量（mg*100g-1FW）=标准曲线上查的的Vc的量*样品提取液总

体积/(测定时所用样品液体积*样品鲜重)注意：显色温度和加入显色剂后的时间要一致。

GSH：

试剂：50g/L三氯乙酸（5g三氯乙酸和蒸馏水溶解稀释至100ml，再加入186mg EDTA-Na2.2H2O）0.1mol/LPH7.7磷酸钠缓冲液和0.1mol/LPH6.8磷酸钠缓

冲液4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（15.8mg DTNB，用0.1mol/L、PH6.8磷酸缓冲

液溶解，定容至10ml，摇匀，4℃保存）100umol/L还原性谷胱甘肽标准液（3g

还原型谷胱甘肽加入少量无水乙醇用蒸馏水定容至100ml）

实验步骤：1、标准曲线制作：

取六只试管编号，按下表加入各种试剂，混匀，于25℃保温反应10min，以0

号管为参比调零，测定显色液在波长412nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，还原型谷胱甘肽为横坐标，绘制标准曲线。

项目管号

0 1 2 3 4 5 还原型谷胱甘肽标液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 PH7.7磷酸缓冲液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 DTNB试剂/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 相当于还原型谷胱甘肽物质的量/umol 0 20 40 60 80 100 2、提取和测定：5g果实加入经预冷的三氯乙酸，在冰浴下研磨匀浆，于4℃、12000xg离心20min，收集上清液测定。取一只试管，依次加入1ml蒸馏水、

1mlPH7.7磷酸缓冲液和0.5mlDTNB，混匀即为绘制标准曲线的0号管溶液，此液

作为参比调零。另取两支试管，分别加入1ml上清液、1mlPH7.7磷酸缓冲液，

然后向一只管中加入0.5mlDTNB，向另一支管中加入0.5mlPH6.8磷酸缓冲液。

将两只管置于25℃下保温反应10min，迅速测定显色液在波长412nm下的吸光度值，分别记作ODs和ODc。重复三次。

根据ODs-ODc的差值从标准曲线上查的还原型谷胱甘肽含量，计算每克果实中还

原型谷胱甘肽的含量：还原型谷胱甘肽含量=（标准曲线上查得的值*样品提取液

总体积）/（吸取样品液体积*样品质量）注意：先做样品本底对照。