临床检验基础尿液化学检验(1)

操作简便、快速。与清蛋白、球蛋白、本周蛋白均可发生反 应。灵敏度高，为0.05-0.10g/L，因而有一定的假阳性。作 为干化学法检测尿蛋白的参考方法，手工法尿蛋白定性试验 的过筛试验
本法既可肉眼观察，又可用于尿液自动分析仪。对清蛋白灵敏，对 球蛋白的灵敏度仅为清蛋白的1/100-1/50，与血红蛋白、肌红蛋白、 本周蛋白基本不反应。本法快速、简便、易于标准化，适用于健康 普查，尤其是肾脏疾病的筛检，但不适用于其疗效观察和判断预后。
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尿蛋白定量试验
1.比色法（双缩脲法）
钨酸可沉淀尿液中的蛋白质，后者复溶于双缩脲试剂 中，其碱性的Cu 2+与蛋白质的肽键形成紫色的复合 物，呈色的深浅与尿蛋白的含量成正比。
双缩脲法是测定尿蛋白总量的常规参考方法。显色稳 定、重复性好，对白、球蛋白的反应灵敏度较一致 （100~150mg/l），但灵敏度低。
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常用尿液化学检验
酸碱度 蛋白质 葡萄糖 酮体 胆红素
尿胆原和尿胆素 隐血 亚硝酸盐 白细胞 维生素C
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一、尿液酸碱度（PH）
—反映肾脏调节体液酸碱平衡的能力
尿液PH值主要由肾小管泌H+、铵的形成、HCO3-的重吸 收、酸性和碱性磷酸盐相对含量决定。
【参考值】 ➢晨尿 5.5-6.5 ➢随机尿 4.5-8.0 存放时间过长因细菌分解尿素可使PH偏高
尿蛋白定性试验
——过筛试验 ⒈加热乙酸法 ⒉磺基水杨酸法 ⒊干化学试带法
尿蛋白定量试验
⒈沉淀法 ⒉比浊法 ⒊比色法 ⒋染料结合法 ⒌免疫测定法 ⒍尿蛋白电泳法
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尿蛋白定性试验
1.加热乙酸法--------传统经典方法，蛋白定性的确证实验
【原理】 加热煮沸使蛋白变性凝固，加酸使尿pH接近蛋 白质等电点（pH4.7），在含有适量无机盐状况下，蛋白 质更易于变性下沉，同时可消除因加热引起的某些磷酸盐 和碳酸盐析出造成的浑浊干扰。
6.5
比重 1.015 1.015 1.015
7.0 1.011
8.0
9.0
1.010 1.009
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二、尿液蛋白质检查
正常人尿液浓缩后再经免疫电泳，可按蛋白质的相对 分子量大小分3组：
①高相对分子量蛋白：分子量＞9万，含量极微，包
括T-H糖蛋白、分泌型IgA等；
②中相对分子量蛋白：分子量4-9万，以白蛋白为主，
具有更高的灵敏度和特异性，临床普遍采用的新技术
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【临床意义】
1、生理性蛋白尿：
功能性、直立性、摄入性、偶然性、老年性、 妊娠性蛋白尿
2．病理性蛋白尿：
可分为肾前性、肾性及肾后性蛋白尿
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【临床意义】
（1）肾前性蛋白尿：
尿蛋白种类
病因
本周蛋白
浆细胞病
常见疾病
多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、 浆细胞白血病
【质量控制】1.尿液标本必须新鲜。混有生殖系统分泌物时 可致假阳性。
2.如加酸过少、过多，致远离蛋白质等电点，可使阳性程度 减弱。因此实验前需调整尿液pH至5~6。
3.如尿中盐类离子浓度过低，可致假阴性，限盐或无盐饮食 的患者可加饱和氯化钠溶液1~2滴再检查。
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尿蛋白定性试验
2.磺基水杨酸法(SSA)
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【临床意义】
肾小管性蛋白尿
肾小管间质病变：如间质性肾炎、肾盂肾炎、Fanconi
综合征、肾小管性酸中毒
重金属中毒：汞、镉、铋、砷、铀
药物中毒：抗生素类 庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素
？
蛋白尿 20
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2、肾小管性蛋白尿(Tubular proteinuria)
近曲小管损伤，重吸收功能降低，产生的蛋白尿。 尿蛋白组分以小分子量蛋白（ β2-MG 、溶菌酶）为主。 尿蛋白定性“+～++”
临床意义
①间质性肾炎 ②中毒性肾间质损害：重金属
有机溶剂 抗生素 ③器官移植排斥反应
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3、混合性蛋白尿(mixed proteinuria)
•肾脏疾病同时累及肾小球和肾小管所产生的蛋白尿 •中分子量的清蛋白及低分子量的β2-M同时增多为主
临床意义
① 肾小球肾炎晚期 ② 肾盂肾炎后期 ③ 全身性疾病侵犯肾小球和肾小管
4、溢出性蛋白尿(overflow proteinuria)
•血循环中出现本周蛋白、游离血红蛋白、肌红蛋白等
•尿蛋白定性： + ~ ++，一般不伴有肾脏损伤
-------过筛实验，干化学法检测尿蛋白的参考方法
【原理】在略低于蛋白质等电点的酸性环境中，尿蛋白氨基带正电荷，与 带负电荷的磺基水杨酸根相结合，形成不溶性蛋白盐沉淀，沉淀生成 的程度可反映蛋白质含量。
【质量控制】 1.尿液标本必须新鲜。混有生殖系统分泌物时可致假阳性。 2.应用青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、PAS及含碘造影剂等，或高浓度尿
定性一般不超过（+） 多见于青少年，常为一过性，蛋白尿随诱发因素的
消失而消失。来自百度文库
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2、体位性蛋白尿——又称直立性蛋白尿
可能与直立时前突的脊柱压迫肾 静脉；或直立过久时肾脏下移， 肾静脉扭曲造成肾脏瘀血，淋巴、 血流受阻有关。
卧位时尿蛋白阴性，起床活动或 站立过久后可出现阳性，而平卧 后又转成阴性。常见于青少年， 可随年龄增长而消失。定性一般 ++～+++。
占尿蛋白总量的1/2-2/3；
③低相对分子量蛋白：分子量＜4万，绝大多数在肾
小管重吸收，故尿中含量极少，如免疫球蛋白FC片段、 游离轻链、微球蛋白等。
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蛋白尿形成
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蛋白尿（proteinuria）
【定义】 当尿蛋白排出量＞150mg/24h或尿中蛋
白浓度＞100mg/L时，常规化学定性 试验呈阳性，称为蛋白尿。
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尿液酸碱度（PH）检测方法
采用甲基红（pH4.6～6.2）与溴麝香草酚蓝（pH6.0～7.6）适量配合 制成pH试纸垫，是目前最广泛应用的筛查方法。以仪器自动化检测 来反映尿pH5～9的变异范围，基本满足临床需要。
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【临床意义】
（一）生理变化 1. 饮食种类的影响 蛋白质↑， 尿PH↓
蔬菜水果↑,尿PH↑ 2.碱潮 进食后尿PH↑ 3.其他 如运动、饥饿等生理活动时体内酸性代
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尿蛋白定性试验
3.干化学试带法-------健康普查
【原理】利用pH指示剂的蛋白质误差（protein error）原理——在一 定条件下（pH 3.2），指示剂阴离子与蛋白质结合生成复合物，引起 指示剂的进一步电离，超过尿液的缓冲能力而发生颜色变化。颜色的 变化与蛋白质含量成正比。
【质量控制】 1.尿液标本必须新鲜，变质的尿液会影响尿pH；大剂量青霉素可呈假阴性；
血红蛋白
血管内溶血性疾病 阵发性血红蛋白尿
肌红蛋白
溶菌酶 淀粉酶
大面积肌肉损伤 酶类增高
挤压综合征、电灼伤、多发性 肌炎、进行性肌肉萎缩 急性单核细胞白血病 胰腺炎
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【临床意义】 （2）肾性蛋白尿：
肾小球性蛋白尿 肾小管性蛋白尿
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【临床意义】
类型
选择性 蛋白尿 非选择 性蛋白 尿
肾小球性蛋白尿常见疾病
大剂量洗必泰可呈假阳性。 2.反应时间和标本量严格按照试带法的操作说明来进行，并强调使用标准
化的试带。 3.对清蛋白灵敏，对球蛋白的灵敏度仅为清蛋白的1/100-1/50，与血红
蛋白、肌红蛋白、本周蛋白基本不反应。
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不同PH值尿液，尿蛋白结果
PH
3.0 5.0 7.0 8.0 9.0
白蛋白 70 100 100 100 200
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一、生理性蛋白尿
指在人体机能正常情况下出现的短暂性蛋白尿，一 般不具有病理意义，可分为
1、功能性蛋白尿 2、体位性蛋白尿 3、其他（摄入性、偶然性、老年性、妊娠性）
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1、功能性蛋白尿
指机体在剧烈运动、发热、精神紧张等造成肾血管 痉挛或充血而使肾小球毛细血管壁的通透性增加所 致的暂时性、轻度的蛋白尿。
⑵酸性尿也可预防细菌的生长，减少泌尿系统的感染。
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（四）做尿干化学分析的质控
PH对尿蛋白和比重的影响
不同PH值尿液，尿蛋白结果
PH
3.0 5.0 7.0 8.0 9.0
白蛋白 70 100 100 100 200
注：双缩脲法定值100mg/dL
不同PH值尿液,尿液比重变化
PH 5.0
6.0
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二、病理性蛋白尿
1、肾小球性蛋白尿（glomerular proteinuria）
炎症、毒素等损害使肾小球毛细血管壁通透性增加或 电荷屏障作用受损，滤出较多的血浆蛋白，超过了肾 小管重吸收能力形成蛋白尿。
尿蛋白定性：+++ ~ ++++
•根据滤过膜损伤的程度和蛋白尿的组分分为2种：
什么是
选择性蛋白尿 非选择性
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尿液蛋白质定量检验的方法学评价
方法
评价
沉淀法
比浊法
比色法
染料结合 法 免疫法及
电泳法
费时、准确性差，已淘汰
操作简便，对清蛋白、球蛋白有相同的灵敏度，但线性 范围窄，影响因素多（温度、pH、时间、混匀方式等）， 因而精密度低
双缩脲比色法为蛋白质定量测定的经典方法
考马斯亮蓝法和邻苯三酚红钼酸络合法灵敏度高、操作 简便快速、呈色稳定、干扰因素少，但易污染。丽春红 S法需用三氯乙酸沉淀，操作繁琐，离心沉淀不完全也 影响结果
尿液化学检验
常用尿液化学检验
酸碱度 蛋白质 葡萄糖 酮体 亚硝酸盐 隐血 白细胞 胆红素 尿胆原和尿胆素 维生素C
尿液化学其他检验
微量清蛋白 本周蛋白 肌红蛋白 α1、β2-微球蛋白 纤维蛋白降解产物 尿含铁血红素 尿NAG酶 尿淀粉酶 人绒毛膜促性腺激素（HCG） 乳糜尿测定 其他
谢产物增多可使尿PH↓；尿中有脓、血或细菌污
染等使尿液碱化。药物的影响。
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（二）病理变化 1．尿pH↓：酸中毒、慢性肾小球肾炎、痛风、糖尿病、
低血钾性碱中毒等排酸增加；呼吸性酸中毒。
2．尿pH↑：碱中毒、严重呕吐、尿路感染、肾小管性酸
中毒。
（三）指导临床用药
⑴根据尿液pH变化指导临床用药，预防肾结石的形成和复 发。
临床意义
① 多发性骨髓瘤、轻链病、原发性巨球蛋白血症 ② 急性血管内溶血 ③急性肌肉损伤
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5、组织性蛋白尿(histic proteinuria)
来源于肾小管代谢、组织破坏、炎症或药物刺激泌尿系 统产生的蛋白质进入尿液形成 成分以T-H蛋白为主，常见于尿路感染 尿蛋白定性：± ~ +
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（二）尿蛋白测定方法：
特殊体位尿——清晨 起床后（不可有任何 活动）立即留第一次 尿液，然后站立 15min （双脚并拢， 足跟离墙15cm，枕 部和双肩靠墙）,再立 位30-60min后留第 二次尿液
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3、假性蛋白尿(false proteinuria)
混有血、脓、粘液等，不伴随肾脏本身的损害，常 见于泌尿道炎症、出血及尿中混入生殖系统分泌物 等，又称偶然性蛋白尿。
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尿液酸碱度（PH）检测方法
指示剂法 酸碱指示剂原理如溴麝香草酚蓝溶液。
滴定法 酸碱中和反应原理。
干化学试带法 采用甲基红（pH4.6～6.2）与溴麝香草酚蓝
（pH6.0～7.6）适量配合制成pH试纸
pH计法
垫，是目前最广泛应用的筛查方法。以仪
器自动化检测来反映尿pH5～9的变异范
围，基本满足临床需要。
病因
尿蛋白类型
定性试 定量试验 验 （g/d）
肾病综合 征
相对分子量4-9 +++～ 3.5 ～ 10 万（清蛋白为主） ++++
原发性肾 小球疾病
继发性肾 小球疾病
急慢性肾炎 膜性肾炎 肾功能衰竭
糖尿病肾病 狼疮肾病
大中分子量蛋白 质同时存在（清 蛋白、免疫清蛋 白）
+～
0.5 ～3.0
++++
妊娠中毒症
注：双缩脲法定值100mg/dL
尿液过酸（PH<4）或过碱（PH>8）， 超过试纸缓冲能力，可出现假阴性或假阳 性
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青霉素对尿蛋白干化学法的干扰
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尿液蛋白质定性检验的方法学评价
方法
评价
加热乙酸 法
磺基水杨 酸法
干化学法
尿液蛋白质检验的经典方法。特异性高、干扰因素少，灵敏 度较低为0.15g/L。能使所有蛋白质发生沉淀反应，虽操作繁 琐，但结果准确。常作为确证试验
酸、草酸盐、粘蛋白等作用下可呈假阳性反应，但加热煮沸后消失。 3.如PH>9或<3可致假阴性，需调整尿液pH至5~6。
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【结果判断】
阴性（－）：不显混浊，尿液外观仍清晰透明。 可疑（±）：轻微混浊，隐约可见，含蛋白量约为0.05-0.20g/L。 阳性（＋）：明显白色混浊，但无颗粒出现，含蛋白量约为0.30g/L。 （2＋）：稀薄乳样混浊，出现颗粒，含蛋白量约为1.0g/L。 （3＋）：乳浊，有絮片状沉淀，含蛋白量约为3.0g/L。 （4＋）：絮状混浊，有大凝块下沉，含蛋白量≥5.0g/L。