细菌平板计数法
平板菌落计数法
平板菌落计数法农资101 1031240125 周瑶实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验方法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml 无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。
放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不准确，结果误差较大。
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
平板菌落计数法测定菌落总数的原理
平板菌落计数法测定菌落总数的原理1.准备琼脂培养基：将琼脂溶解在适当的营养液中，调整pH值，加热使其融化，然后冷却到约45-50℃。
2.预培养：将培养物从深层培养基中接种到含有一定营养液的试管中预培养，为后续培养做准备。
3.稀释：将预培养液根据菌落数量的预估结果进行适当稀释，使菌落分散。
4.接种：取适量稀释液，均匀地倒入装有琼脂的培养皿中，使培养基均匀铺满。
5.均匀涂布：将接种液均匀涂布于琼脂表面，避免产生气泡和划痕。
6.培养：将培养皿倒置，放在恒温箱中适当温度下培养一定时间，通常为24-48小时。
7.计数：在培养后的琼脂表面，用裸眼或放大镜观察并计数菌落，然后根据稀释倍数计算出原始菌落的总数。
1.琼脂培养基：通过熔化琼脂和添加适当的营养物，可以提供菌落生长所需的碳源、氮源等营养物质，以及适当的pH值和培养温度，使菌落能够在琼脂表面生长。
3.琼脂的稀释：通过适当的预估或实际试验，将预培养液稀释到合适的程度，使得在琼脂表面上的每个菌落之间有足够的距离，以防止菌落间的交叉叠加。
4.菌落计数：在培养后的琼脂表面，可以用裸眼或放大镜观察，计算出每个培养皿上的菌落数量。
根据稀释倍数，可以推算出原始菌落的总数。
1.简单易操作：操作方便，不需要复杂的设备和技术。
2.适用范围广：可用于测定各种微生物菌落总数，如细菌、真菌等。
3.直观准确：直接观察和计数菌落，结果客观准确。
4.含量测定：可以用于测定菌落的含量，有助于了解微生物的数量变化。
然而，平板菌落计数法也存在一些限制和注意事项：1.培养条件：受到琼脂培养基成分和条件的限制，一些微生物可能无法在琼脂表面生长。
2.杂菌干扰：在一些情况下，培养基表面可能有一些自然存在的杂菌或非细菌生物，这些杂菌可能会干扰菌落计数结果的准确性。
3.受限于稀释倍数：琼脂培养基的稀释倍数对菌落数量的计算有一定影响，过高或过低的稀释倍数可能会导致计数结果的误差。
4.菌落大小：一些微生物菌落较小或较大，可能会对计数结果产生一定的影响，需要注意估算和计数的准确性。
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，用于测定样品中微生物的数量。
下面将对每个步骤进行详细的名词解释：
1. 样品处理：在进行平板菌落计数前，需要对样品进行处理。
样品处理包括对样品的粉碎、研磨、匀浆等操作，以使样品中的微生物充分分散。
2. 培养基制备：平板菌落计数需要使用特殊的培养基，以便为微生物提供适宜的生长环境。
培养基制备包括按照一定的配方和比例将各种成分混合在一起，制备出适合微生物生长的培养基。
3. 接种：将处理过的样品接种到培养基上，以便使样品中的微生物在培养基上生长繁殖。
接种时需要保证样品均匀地分布在培养基上，并确保无菌操作以避免污染。
4. 培养：将接种后的培养基放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
在培养过程中，微生物会在培养基上生长繁殖，形成肉眼可见的菌落。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数。
计数时需要注意区分不同种类的菌落，并根据菌落的形态、大小、颜色等因素进行分类和统计。
6. 计算：最后，根据统计的菌落数量和稀释倍数，计算出样品中微生物的数量。
通过以上步骤，可以准确地测定样品中微生物的数量。
平板菌落计数法广泛应用于食品、药品、环境等领域的质量控制和卫生检测等方面。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
几种常用的细菌计数方法
几种常用的细菌计数方法常用的细菌计数方法主要有显微镜计数法、平板计数法、膜过滤法和浑浊度法等。
下面将逐一介绍这些方法。
显微镜计数法是最基本的细菌计数方法之一、将细菌培养液取少量放在显微镜载玻片上，用显微镜观察并计数细菌个数。
这种方法需要操作技巧熟练，适用于较稀疏的细菌培养液，但不适用于高密度的细菌培养液，并且仅能得到一个粗略的细菌数量。
平板计数法是一种较为常用的细菌计数方法。
将稀释后的细菌培养液均匀涂在含有培养基的平板上，经过一段时间的培养后，可以通过数独落在平板上形成的菌落数量来估计初始细菌数量。
通常将膨胀菌落数乘以相应的稀释倍数从而得到细菌的数量。
平板计数法的优点是简单易行，适用于大量细菌的计数，但该方法只适用于能够在固体培养基上生长的细菌。
膜过滤法是一种通过滤除细菌并计数膜上细菌数量的方法。
将细菌培养液通过微孔膜过滤器，在膜上滤除细菌，然后将膜放在富含营养物的培养基上进行培养，形成菌落后进行计数。
与平板计数法相比，膜过滤法更适用于含有颗粒物的液体或空气中的细菌计数。
膜过滤法的优点是操作相对简单，适用于含有较多颗粒物或固体物质的液体的细菌计数，但该方法仅适用于能够通过过滤的培养液。
浑浊度法是一种通过测量培养液的浑浊度来估计细菌数量的方法。
利用光密度计或比色计测量细菌培养液的吸光度或浑浊度，并通过细菌密度与浑浊度之间的关系来计算细菌数量。
这种方法不需要进行涂片或过滤步骤，适用于细菌数量较多的情况。
然而，浑浊度法有一定的局限性，因为细菌的大小、形状和组成可能对浑浊度产生影响，而且需要事先建立浑浊度和细菌数量间的校准曲线。
除了以上介绍的方法，还有一些其他的细菌计数方法，如Flow cytometry（流式细胞仪）、Most probable number（最可能数）等，这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行细菌计数。
细菌计数方法的选择应根据实验的目的、样品性质和操作条件等因素来确定。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
细菌数量测定---标准平板计数法
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样 接种量即可换算出样品中的含菌数。由 于待测样品往往不易完全分散成单个细 胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。 现在常使用菌落形成单位。
三、实训仪器和材料
1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，
电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、 试管架、酒精灯 2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培 养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐 酸、氢氧化钠、蒸馏水
2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷 却至50℃左右的琼脂培养基约15~20 mL，置 水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃ 培养箱中倒置培养24h。
（五）计数
取出平皿，观察并计算菌落数。一般 选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度 计算每毫升的菌落数最合适。
算出同一稀释度2个平皿上的菌落平 均数，并按下列公式计算： 活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上 的菌落平均数×稀释倍数×5
检验结果
稀释度
10-4
1 2 平均 1
10-5
2 平均 1
10-6
2 平均Biblioteka 菌落数活菌数 /mL
活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5
在上述平皿中倒入熔化并冷却至50左右的琼脂培养基约1520ml置水平位置迅速旋动混匀待凝固后于37培养箱中倒置培养24h
细菌数量测定---标准 平板计数法
一、实训目的
1、掌握菌液稀释的方法和步骤。
2、掌握浇混接种的操作步骤。 3、掌握菌落计数的原理与方法
二、实训原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当 稀释后，其中的微生物充分分散为单个 细胞，取一定量的稀释液接种到平板上， 经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形 成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中 的一个单细胞。
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告摘要：平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，用于测定液体样品或表面样品中微生物的数量。
本实验旨在通过平板菌落计数法确定给定液体样品中的微生物菌落的数量。
实验过程包括制备不同稀释度的样品，将样品平铺在琼脂平板上，培养并计数菌落数量。
实验结果显示不同稀释度的样品中菌落的数量，从而计算出原液中微生物的浓度。
材料和方法：1. 试剂和设备：-细菌液体培养物-无菌琼脂平板-灭菌吸管和培养皿-酒精灯或火柴-恒温培养箱-显微镜和计数室-秤量器具2. 实验步骤：1. 准备一系列不同浓度的样品，通过逐步稀释原液来获得不同稀释度的样品。
2. 取一块无菌琼脂平板，将其置于消毒柜中加热至溶化状态。
3. 将一份稀释液均匀地倒入平板上，并轻轻旋转平板，使液体均匀覆盖整个平板表面。
4. 等待琼脂凝固，将平板盖上，反转后放置在恒温培养箱中。
5. 在适当的培养温度下培养一段时间（通常为24至48小时）。
6. 取出培养好的平板，使用显微镜和计数室对菌落进行计数。
7. 根据计数结果和稀释倍数计算原液中的菌落数量和浓度。
结果：以下是实验结果的示例表格：讨论：通过平板菌落计数法，我们成功确定了给定液体样品中的微生物菌落的数量。
实验结果表明，随着稀释倍数的增加，菌落数量逐渐减少，原液中的微生物浓度也相应减少。
这种计数方法的优点是简单易行，但也存在一些限制，例如某些微生物可能不适合在琼脂平板上生长，或者某些微生物形成聚集菌落，使得计数困难。
结论：平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过稀释液体样品、平铺在琼脂平板上、培养和计数菌落数量，可以确定原液中微生物的浓度。
这种方法可以应用于食品、环境和医药等领域的微生物数量测定，为微生物研究和质量控制提供了重要的手段。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。
这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。
2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。
经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。
3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。
经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。
4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。
经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。
5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。
这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。
需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。
此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。
医学：实验土壤中细菌总数的测定-平板计数
本实验的应用前景
本实验所采用的平板计数法具有广泛的应用前景，可 用于研究不同环境条件下土壤中细菌总数的变化规律。
通过深入探究土壤中细菌总数与环境因素之间的关系， 可以为农业生产、土壤保护和土地资源可持续利用提 供科学依据。
实验误差分析
随机误差
由于随机因素引起的误差，如取样不均匀、计数 误差等。
系统误差
由于实验方法、仪器或操作不当引起的误差，如 培养基质量、培养条件等。
误差来源分析
分析误差的来源，提出相应的改进措施，以提高 实验的准确性和可靠性。
结果可靠性评价
重复性检验
通过重复实验，比较实验结果的一致性和稳定性。
可信度评估
03
CHAPTER
实验步骤
土壤样品的采集与处理
1
ห้องสมุดไป่ตู้
采集具有代表性的土壤样品，并记录采样点的环 境信息。
2
将采集的土壤样品进行筛选和研磨，去除其中的 石块和杂质。
3
将处理后的土壤样品进行称重，记录其质量。
土壤样品的稀释与接种
根据土壤样品的质量， 计算所需的稀释液量。
将稀释后的土壤样品 接种到培养基中，确 保均匀分布。
制备菌悬液
将处理后的土壤样品与无 菌水混合，制备成菌悬液。
稀释菌悬液
将菌悬液进行适当稀释， 使每个菌落来源于一个细 菌。
接种培养
将稀释后的菌悬液接种到 培养基上，放入恒温培养 箱中培养。
掌握平板计数法测定土壤中细菌总数的操作步骤
计数菌落
培养一定时间后，观察并计数培养基 上的菌落数。
结果计算
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
MPN法和平板计数法是微生物检测中常用的方法，用于对水样或
其他样品中的微生物数量进行估算。
这两种方法都是基于微生物在特
定条件下的繁殖规律而设计的。
MPN法（Most Probable Number）是一种间接计数法，适用于微
生物含量较低的样品。
它基于微生物在液体培养基中的繁殖规律，通
过观察培养液的变化来估算微生物的数量。
具体操作时，样品通过稀
释系列，分别接种到多个培养管中，并根据培养管内是否有微生物生
长来判断MPN。
平板计数法是一种直接计数法，适用于微生物含量较高的样品。
它通过将样品均匀地涂布在含有固体培养基的平板上，使其中的微生
物形成可见的菌落。
然后，通过数个平板上的菌落数量，可以估算样
品中微生物的数量。
这种方法的优点是操作简单，但对于微生物数量
较低的样品不太适用。
MPN法和平板计数法的适用范围略有不同。
MPN法通常用于对含
有微生物数量较低的样品进行估算，例如食品、饮用水等。
平板计数
法则常用于对微生物含量较高的样品进行计数，例如污水、土壤等。
选择合适的方法取决于待测试样品的特性以及所需的灵敏度和准确性。
综上所述，MPN法和平板计数法是常用的微生物检测方法，通过
对微生物繁殖规律的研究来估算样品中微生物的数量。
两种方法各有
优势，适用范围有所不同，应根据实际需要选择合适的方法进行微生
物检测。
平板菌落计数法计算公式 例题
平板菌落计数法计算公式例题平板菌落计数法计算公式例题一、引言平板菌落计数法是微生物学实验室中常用的一种微生物计数方法，通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的形成情况来进行微生物数量的估算。
在本文中，我将介绍平板菌落计数法的计算公式，并通过一个具体的例题来加深理解。
二、平板菌落计数法的计算公式在进行平板菌落计数法时，通常使用以下计算公式来计算微生物的数量：N = n/d * 1/V其中，N 代表菌落总数（CFU/g或CFU/mL）n 代表在某一平板中被计数的菌落数d 代表对数稀释倍数V 代表每次接种的体积（mL）这个计算公式是通过对每个平板上的菌落数进行统计，并根据稀释倍数和接种体积来进行微生物数量的推算。
三、例题分析假设我们在实验室中进行了一次细菌计数实验，以确定某一食品样品中的细菌数量。
我们首先进行了系列的稀释，并将不同稀释倍数的样品接种在琼脂平板上。
在我们观察到的一张平板上，我们发现了以下菌落数：- 在1:10稀释倍数下，菌落数为30- 在1:100稀释倍数下，菌落数为18- 在1:1000稀释倍数下，菌落数为5假设每次接种的体积为1mL，则根据上述数据，我们可以进行如下的计算：N = (30/10) * 1/1 + (18/100) * 1/1 + (5/1000) * 1/1= 3 + 0.18 + 0.005= 3.185根据计算，我们可以认为在此食品样品中的细菌数量为3.185 CFU/mL。
四、总结与回顾通过这个例题的分析，我们加深了对平板菌落计数法的理解。
通过对不同稀释倍数下的菌落数进行计数，并根据计算公式进行推算，我们可以较为准确地确定样品中微生物的数量。
在实际操作中，我们需要注意稀释倍数和接种体积的准确控制，以避免出现较大误差。
五、个人观点和理解平板菌落计数法作为一种常用的微生物计数方法，在实验室中具有重要的应用价值。
通过对菌落的形态和数量进行观察，我们可以快速、准确地了解样品中微生物的数量，为食品安全、药品生产等领域提供了有力的数据支持。
教你一招丨标准平板菌落计数法
教你一招丨标准平板菌落计数法检测食品中微生物数量，一般采用标准平板菌落计数法(SPC)对食品中的活的微生物进行菌落形成单位(CFU)数量的检测，即将部分样品取出混合均匀，用适当的稀释液进行梯度稀释，取一定量的稀释液涂布或倾注琼脂平板，在合适的温度下培养一定的时间，然后通过肉眼观察或电子计数器对所有可见菌落进行计数。
虽然日常检测大多采用倾注平板的方法，但是涂布法在检测热敏性菌体方面更有优势，能取得更好的计数结果，而且更适合于严格好氧菌。
涂布法的缺点是涂布时琼脂表面不干燥和培养后菌落蔓延导致无法计数。
(一)菌落计数器平板上的菌落个数可用肉眼直接观察进行计数，也可以借助仪器进行。
菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。
由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计， LED数码管显示，字高13mm,清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。
黑色背景式计数池内，荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。
菌落计数器分手动、半自动和全自动三种类型，可根据对精确度的要求，选择不同的计数器。
使用方法： (1)接通电源，平板去盖，皿底朝下放入计数器后开始计数，从平板的顶部开始计数，用方格线标记防止重复计数，利用这种机械式手动计数器，计数每一个菌落，无论多小或不典型。
(2)将探笔插入仪器上的探笔插孔内。
打开计数器，接通电源，计数池也内灯亮，并且显示窗内显示明亮，可以进行计数。
把待检的培养皿皿底朝上放入计数池内，并用探笔在培养皿底面对菌落进行计数，点到的菌落处被标上颜色，显示窗内数字会自动累加。
用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏后，显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。
使用注意事项：仪器要放在平整牢固的试验台上，点数时，探笔不要过于倾斜，轻点至有弹跳感，数字即可显示。
仪器应防尘，放大镜表面的灰尘，要用纯化水清洗后，再用镜头纸擦拭干净即可，另外还应防潮、防剧烈震动、防日光曝晒、防酸碱等，使用完后加防护罩。
微生物的平板菌落计数法
<实验十三微生物的平板菌落计数法>一、实验目的学习微生物的平板计数法。
二、原理概述微生物的稀释平板计数是根据在固体培养基上所形成的一个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体这一生理及培养特征进行的。
也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散开来，使成单个细胞存在( 否则一个菌落就不只是代表一个菌 ) ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，一般用于某些成品检定 ( 如食品等 ) 、生物制品检定、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检定。
三、实验器材1 、待测样品、所需各类培养基2 、天平、称样瓶、记号笔、容量瓶、无菌生理盐水、 1ml 和 5ml 无菌移液管、无菌平板、无菌试管四、操作步骤和内容1 、样品稀释液的制备准确称取待测样品 10g 或 10ml ，放入装有 90ml 无菌水并放有小玻璃珠的 250mL 三角瓶中，用手或置摇床上振荡 20min ，使微生物细胞分散，静置约 20-30s ，即成 10 -1 稀释液；再用 1ml 无菌吸管，吸取 10 -1 稀释液 1ml 移入装有 9ml 无菌水的试管中，吹吸 3 次，让菌液混合均匀，即成 10 -2 稀释液；再换一支无菌吸管吸取 10 -2 菌液 1mL 移入装有 9ml 无菌水试管中，即成 10 -3 稀释液；以此类推，一定要每次更换吸管，连续稀释，制成 10 -4 、 10 -5 、 10 -6 、 10 -7 、 10 -8 等一系列稀释度的菌液，供平板计数使用 ( 如图 13 － 1) 。
图 13 － 1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
平板菌落记数法的原理
平板菌落记数法的原理平板菌落记数法（Pour Plate Method）是一种常用的微生物计数方法，它通过将待测菌液与固化培养基混合后倒入平板中，使菌落在培养基中均匀分布并生长，最终通过对菌落数量的计数来估算原液中的微生物数量。
该方法广泛应用于微生物学研究、食品卫生检验、环境监测等领域。
平板菌落记数法的原理基于菌落的自主生长特性。
在实验开始前，需要将培养基熔化并冷却至适宜温度，然后将待测菌液与培养基混合均匀。
接下来，将混合液倒入一个平板中，使其均匀分布在平板表面。
平板固化后，菌落会从混合液中生长出来。
由于平板上的培养基已经凝固，菌落只能生长在表面或凝胶内部，不会在培养基溶液中游动。
这样，每个菌落都代表着一个独立的细胞或细菌群体。
为了确保菌落的均匀分布，通常会使用稀释液稀释待测菌液，使得每个平板上的菌落数量在一定范围内。
此外，在实验过程中，还需要进行负对照组，即使用无菌的培养基进行平板制备，以排除培养基本身的菌落生长。
在菌落生长完成后，通常需要对菌落进行计数。
这可以通过目视计数或借助计数室等设备进行。
为了准确计数，通常会选择具有明显特征且不重叠的菌落进行计数。
此外，还需要注意对大菌落进行适当的稀释，以避免计数时的重叠。
根据平板上菌落的数量，可以通过乘以相应的稀释倍数来估算原液中的微生物数量。
例如，如果在稀释液10^-4倍稀释后的平板上计数到100个菌落，那么原液中的菌落数量就是100 × 10^4 CFU/mL（CFU：菌落形成单位）。
平板菌落记数法的优点在于操作简单、结果直观。
同时，由于每个菌落代表一个独立的细胞或细菌群体，因此可以得到较为准确的微生物数量。
此外，通过调整菌液的稀释倍数，还可以适应不同菌落数量的计数要求。
然而，平板菌落记数法也存在一些局限性。
首先，对于菌落数量较多的情况，可能会出现菌落过于密集而无法准确计数的问题。
此外，对于某些特殊菌株，可能会存在菌落形态相似或重叠的情况，从而影响计数的准确性。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法细菌总数测定是微生物检测领域中的一项基本技术，它对于保障食品、药品和环境安全具有重要意义。
通过测定细菌总数，可以评估产品的卫生状况及污染程度，进而采取相应的控制措施。
本文将介绍几种常见的细菌总数测定方法。
平板计数法平板计数法是最传统也是最常用的一种细菌总数测定方法。
该方法通过将样品稀释液均匀涂布在含有营养培养基的平板上，经过一定时间的培养，根据生长出的菌落数量来估算样品中的细菌总数。
具体步骤包括：1. 制备适宜的稀释液。
2. 将稀释液接种到含有固体营养培养基的平板上。
3. 在恒温条件下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. 对形成的菌落进行计数，并乘以相应的稀释倍数得出细菌总数。
膜过滤法膜过滤法适用于液体样品中细菌数量较少的情况。
通过使用特定孔径的滤膜过滤样品，将细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放置在营养培养基上培养，最后统计菌落数量。
此方法的优点是可以检测到比平板计数法更低浓度的细菌。
直接计数法直接计数法通过显微镜直接观察和计数样品中的细菌。
常用的有活菌计数和死菌计数两种。
活菌计数通常使用荧光染色剂，如吖啶橙或DAPI，使细菌细胞发出荧光，然后在荧光显微镜下进行计数。
而死菌计数则需使用特定的染色剂，如碘化丙啶(PI)，标记死亡的细菌细胞。
流式细胞术流式细胞术是一种高速分析单个细胞的技术，能够对大量细胞进行快速计数和分类。
在细菌总数测定中，流式细胞术可以通过特定的荧光标记物识别和计数细菌细胞。
这种方法速度快，精度高，但设备成本较高。
分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，基于PCR的方法也被用于细菌总数的测定。
通过对细菌的特定基因序列进行扩增和定量分析，可以实现对细菌总数的准确测定。
这种方法灵敏度高，特异性强，但需要专业的实验操作和分析技能。
总结而言，不同的细菌总数测定方法各有优缺点，选择合适的方法需根据样品特性、实验条件和测定目的综合考虑。
无论采用哪种方法，都必须严格遵守无菌操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
平板菌落计数法
平板菌落计数法(一)目得要求学习平板菌落计数得基本原理与方法。
(二)基本原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后,其中得微生物充分分散成单个细胞,取一定量得稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落,即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞、统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。
但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成得一个单菌落也可来自样品中得2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数得结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数得结果,现在已倾向使用菌落形成单位(cｏlony－ｆormiｎg uｎits,ｃfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素得影响,但就是,由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料与水(包括水源水)等得含菌指数或污染程度得检测、(三)器材1.菌种大肠杆菌菌悬液、2、培养基牛肉膏蛋白陈培养基、３.仪器或其她用具１mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水得试管,试管架,恒温培养箱等、(四)操作步骤ｌ.编号取无菌平皿9套,分别用记号笔标明10—4、10—5、10－6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4。
5mL无菌水得试管,依次标就是１０-1、10-2、10－3、10－４、10—5、1０—6。
2.稀释用lmL无菌吸管吸取ｌmL已充分混匀得大肠杆菌菌县液(待测样品),精确地放０、5mL至10-1得试管中,此即为1０倍稀释。
将多余得菌液放回原菌液中。
将10－1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀。
另取一支ｌmｌ吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次,进一步将菌体分散、混匀、吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时离开液面,以免将吸管中得过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过平板菌落计数法，对某一样本中的细菌菌落进行计数，从而了解样本中细菌的数量及种类，为后续的实验研究提供数据支持。
二、实验原理。
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，其原理是将待测样品均匀涂布在富含营养物质的琼脂平板上，培养一定时间后，观察并计数菌落形成的数量，进而推算出原始样品中微生物的数量。
三、实验步骤。
1. 准备工作，将琼脂平板均匀加热至液态，然后冷却至45-50摄氏度；2. 取样，使用无菌技术取得待测样本；3. 涂布，将待测样本均匀涂布在琼脂平板表面；4. 培养，将涂布好的琼脂平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度和时间进行培养；5. 计数，观察培养后的琼脂平板上的菌落情况，使用计数器进行菌落计数；6. 结果记录，记录菌落数量，并进行数据统计和分析。
四、实验数据。
经过实验观察和计数，得出样本中细菌菌落数量为XXX个/平板。
五、实验结果分析。
通过本次实验，我们得出了样本中细菌菌落的数量，这将有助于我们对该样本的微生物特性进行进一步研究。
同时，通过对不同样本进行平板菌落计数法的比较，还可以了解不同样本中微生物的差异，为微生物学研究提供更多的数据支持。
六、实验注意事项。
1. 实验过程中需严格遵守无菌操作规范，以避免外部细菌的污染；2. 涂布样本时，需确保样本的均匀涂布，避免出现局部过多或过少的情况；3. 培养过程中，需保持恒温箱的恒温和湿度，避免对细菌生长的影响；4. 实验结束后，需对实验器材进行消毒处理，以防止实验后的交叉污染。
七、实验结论。
通过本次实验，我们成功地利用平板菌落计数法对样本中的细菌菌落进行了计数，并得出了相应的数据结果。
这为我们后续的微生物学研究提供了重要的数据支持，也为我们对样本中微生物特性的了解提供了有力的依据。
八、参考文献。
1. XXX，XXX. 微生物学实验指导. 北京，科学出版社，20XX.2. XXX，XXX. 微生物学实验技术手册. 上海，上海科学技术出版社，20XX.以上就是本次实验的实验报告，谢谢阅读。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
操作步骤
l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5ml 至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支lml吸管插入10- 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释。
……其余依次类推。
放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。
3.取样用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mL。
不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼，这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操作误差。
4．倒平板．尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15毫升/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。
由于细菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培养皿后，应尽快倒入融化并于已冷却至45℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起，影响计数。
待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。
5．计数培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算，每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5。
一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。
同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，否则表示试验不精确。
实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。
由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。
平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的。
一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在50个左右为好，否则要适当增加或减少稀释度加以调整。
平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式以外，还可以用涂布平板的方式进行。
二者操作基本相同，所不同的是后者先将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃左右的温箱中烘烤30min，或在超静工作台上适当吹干，然后用无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不同稀释度编号的平板上，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20～30min，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置37℃的恒温箱中培养24～48h。
涂布平板用的菌悬液量一般以0.1ml较为适宜，如果过少菌液不易涂布开，过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。
五、实验报告1．结果2．将培养后菌落计数结果填入下表2．思考题(1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板? (2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么? (3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。
(4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里? (5)用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果?
实验一革兰染色法、细菌的特殊染色法
实验目的：掌握细菌革兰染色的原理与方法；掌握细菌芽孢染色的基本原理与方法；熟悉普通光学显微镜的油镜使用与保养方法。
实验材料：菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
试剂：结晶紫、碘液、95%乙醇、番红花红、孔雀绿
实验内容：
1、染色过程：涂片（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）→干燥→固定
→初染（结晶紫染色1min）→媒染（碘1min）→水洗→95%乙
醇脱色（1min）→复染（番红花红染色1min）→干燥→镜检（油
镜）
2、注意事项：（1）菌种应选用对数期的菌种；（2）涂片不易
过厚，涂片薄而均匀为好；（3）脱色不足或脱色过度均会造
成革兰染色的假阳性或假阴性，脱色时间取决于涂片厚度、室
温等。
实验二、芽孢染色芽孢是某些细菌在生长发育的后期在细胞内形成的圆形或椭圆型的抗逆性比较强的休眠体，是细菌的一种特殊构造。
染色过程：涂片（枯草芽孢杆菌）→干燥→固定→初染（孔雀绿染色20-30min）→水洗→复染（番红花红染色1min）→干燥→镜检注意事项：（1）涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，（2）水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。
（3）涂片在干燥过程中，不易在火焰远端加热干燥。
显微镜油镜的使用与保养
（1）在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。
（2）用双眼观察目镜，并慢慢转动粗调节器至出现模糊物象，然后用细调节器至物象清晰为止。
（3）如果不出现物象或者目标不理想要重找。
（4）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许乙醇将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
注意事项：
（1）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。
（2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。
（3）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。
（4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。
放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。
（5）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。
（6）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上外罩，放回实验台柜内。
（7）最后填写使用登记表。
(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放)。