细菌DNA的提取方法
细菌dna提取方法
细菌dna提取方法细菌DNA提取方法引言：细菌DNA提取是一项关键技术，它是分子生物学、遗传学和生物工程等领域的基础工作。
准确、高效地提取细菌DNA对于后续的实验和研究具有重要意义。
本文将介绍几种常用的细菌DNA提取方法，旨在提供一些参考，以帮助科研工作者更好地进行相关实验。
一、传统提取方法1. 酚-氯仿法酚-氯仿法是最常用的细菌DNA提取方法之一。
其原理是通过酚和氯仿的不同溶解度，将DNA从其他细胞组分中分离出来。
具体步骤如下：（1）收获培养基中的细菌样本并离心；（2）用生理盐水洗涤细菌样本，去除培养基残留；（3）加入酚-氯仿混合液，破坏细胞膜，使DNA释放到溶液中；（4）离心分离上层的水相和下层的有机相；（5）将DNA从有机相中析出，并用乙醇沉淀。
2. 碱裂解法碱裂解法是一种简单快速的DNA提取方法。
其原理是利用碱性溶液将细胞膜溶解，使DNA释放到溶液中。
具体步骤如下：（1）收获培养基中的细菌样本并离心；（2）用生理盐水洗涤细菌样本，去除培养基残留；（3）加入碱性裂解液，使细胞膜溶解，释放DNA；（4）中和碱性液体，并用乙醇沉淀DNA。
二、商业试剂盒提取方法1. 酶联免疫吸附法（ELISA法）ELISA法是一种基于酶标记的免疫学技术，也可以用于细菌DNA的提取。
该方法利用特异抗体与DNA结合，并通过酶标记的二抗进行检测。
具体步骤如下：（1）将细菌样本孵育在含有特异抗体的孔板上；（2）洗涤孔板以去除非特异性结合物；（3）加入酶标记的二抗，与细菌DNA结合；（4）加入底物并测定酶标记物的活性。
2. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的细菌DNA提取方法。
其原理是利用磁性珠子表面固定的DNA结合剂与DNA结合，通过磁场的作用将DNA从样本中分离出来。
具体步骤如下：（1）将细菌样本与磁性珠子和DNA结合剂混合；（2）使用磁力架将磁性珠子与DNA结合剂捕获；（3）洗涤磁性珠子以去除非特异性结合物；（4）用洗脱缓冲液将DNA从磁性珠子上洗脱。
菌dna提取方法
菌dna提取方法
菌DNA提取方法主要有以下几种常用的方法：
1. 热裂解法：将菌株经过培养后，取一部分菌体加入到含有蛋白酶K和SDS等裂解液的管内，经过高温加热和高速离心等步骤，将细胞裂解，使DNA释放到溶液中。
2. 真菌细胞壁裂解法：对于真菌等含有较坚硬的细胞壁的菌株，可以先用混合酶或纤维素酶等酶解细胞壁，然后再用热裂解法或理化方法提取DNA。
3. CTAB方法：CTAB（盐基洗脱法）常用于提取高质量的食管菌和黄杆菌等高GC含量的菌株DNA。
首先，将菌体经过裂解后，使用CTAB裂解液中的盐离子与DNA结合形成沉淀，然后通过洗脱步骤将DNA纯化。
4. 醋酸盐方法：醋酸盐方法适用于提取低GC含量的菌株DNA。
将菌体经过裂解后，通过添加醋酸盐裂解液，使DNA与醋酸和盐结合成为可溶性复合物，后续通过酒精沉淀等步骤将DNA沉淀出来。
5. 商业化基因提取试剂盒：市面上还有许多商业化的基因提取试剂盒，这些试剂盒提供了一套完整的操作流程和试剂，能够方便快速地提取和纯化菌DNA。
不同的菌株和研究目的可能需要使用不同的提取方法，因此在选择提取方法时需
要根据具体情况进行选择。
DNA提取方法总结
对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiCl4.DEPC-water（抑制RNA酶活性）5. 3M NaAc (pH5.2)6. 96% 乙醇7. 70% 乙醇步骤：1.抽提缓冲液65℃预热；2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；3. 加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，离心12,000rpm，10min；4.取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，离心12,000rpm，10min；5. 取上清，重复4步骤；6. 加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C沉淀；11. 离心12,000rpm，10min；12. 弃上清，70％乙醇洗，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
(二)（我们常用的方法，但是有时有些细菌特别不好提，就用上面的方法）1. 将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混匀，再加入80ul CTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．真菌DNA的提取：（一）1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入4mL提取液，快速振荡混匀3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）4.1000rpm，4℃，5min5.上清用体积的氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）6.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 minulTE中 7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 8.加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr9.用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上11.沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存备用DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS，3M NaAc（二）1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min4．等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 minL 6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 TE 中7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr8．用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存备用。
细菌基因组dna提取原理
细菌基因组dna提取原理
细菌基因组DNA提取是通过一系列化学和物理方法将细菌细
胞中的DNA分离出来的过程。
以下是细菌基因组DNA提取
的原理：
1. 细胞破碎：首先，细菌细胞需要被破碎以释放DNA。
这可
以通过物理方法（如超声波处理或振荡器震荡）或化学方法（如细菌细胞壁消化酶的作用）来实现。
2. DNA溶解：破碎的细胞中，DNA需要被从其他细胞组分
（如蛋白质、RNA等）中分离出来。
加入适当的缓冲液可以
帮助DNA在水中溶解，并防止其被降解。
3. 蛋白质去除：细胞溶液中的蛋白质可通过加入蛋白酶K等
蛋白酶来消化。
蛋白酶可以将蛋白质分解为小片段，使其易于去除。
4. RNA去除：通过加入DNase酶，可将RNA降解为核苷酸
单元，并与其配体结合。
随后，加入酸性酚和氯仿，RNA可
在其中分配到的有机相中离心沉淀，从而与DNA分开。
5. DNA沉淀：通过加入醇（如乙醇或异丙醇）和盐（如乙酸
钠或氯化钠），DNA可以沉淀出来。
醇可以使DNA不溶于溶液中，盐可以中和溶液中的带电颗粒，如离子。
6. 洗涤：沉淀的DNA需要被洗涤以去除残留的盐和其他杂质。
这可以通过使用酒精洗涤和离心步骤来实现。
7. 重溶：最后，沉淀的DNA会在某种缓冲液中重溶，以便进行后续的实验操作，如PCR扩增、测序等。
通过以上步骤，我们可以从细菌中高纯度地提取出基因组DNA，为后续分子生物学研究提供基础。
细菌DNA的提取,不用试剂盒的方法
DNA的提取：
（1）从平板上挑一个单菌落至3 ml含相应抗生素的TY液体中28︒C培养至稳定期；
（2）取1 ml菌液14,000 rpm离心2 min，用1 ml无菌水重悬菌体并洗涤两次，再次14,000 rpm离心菌体2 min，用270 μl TE重悬菌体（RNAse）；
（3）加入10 mg/ml的溶菌酶 15 μl，0︒C水浴30 min，再依次加入15 μl 10%的SDS和10 μl 100 mg/ml的蛋白酶K并混匀，65︒C水浴30 min；
（4）加入200 μl 5 M NaCl（4︒C）剧烈振荡，加入500 μl 25: 24: 1的酚：氯仿：异戊醇后涡旋振荡混匀，10,000 rpm离心10 min，取上清液至1.5 ml离心管中，重复抽提直至在分界面看不到明显的白色絮状物（至少3次）；
（5）将上清液转移至1.5 ml离心管，用500 μl氯仿再抽提一次，取上清液，加入500 μl异丙醇沉淀（应该立即能看到白色絮状物），冰浴10 min，14,000 rpm离心10 min，用预冷的70%乙醇洗三次，自然吹干，用50 μl TE 溶解；
（6）将抽提产物取5 μl直接进行1.0％的琼脂糖凝胶电泳检测。
试剂的配制：
10×TE缓冲液（pH 8.0）：100 mmol/L Tris-HCl, 10 mmol/L EDTA
配制：1000ml
1 mol/LTris-HCl 缓冲液(pH 8.0) 100ml
500 mmol/L EDTA (pH8.0) 20 ml
苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)：将量取25 ml Tris-HCl（pH8.0）平衡苯酚，加入24 ml 氯仿和 1 ml 异戊醇，充分混合后，移入棕色玻璃瓶中，4℃保存。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
细菌基因组DNA的提取
四、注意事项——核酸分离、纯化
四、注意事项——核酸沉淀、溶解
当沉淀时间有限时，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀，沉淀会更充分 沉淀时加入1/10体积的NaAc（pH5.2，3M），有利于充分沉淀 沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等 晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥） 若长期储存建议使用TE缓冲液溶解 TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase pH值为8.0，可防止DNA发生酸解
原因
02
材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融
尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌 将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融
01
小心吸出上清液转入新的eppendorf管，用预冷的两倍体积的无水乙醇沉淀，放置－20℃冰箱30min，然后13000rpm离心15min，可见白色丝状沉淀物。
02
小心吸出液体，弃上清液，用预冷的400µl 70％乙醇洗涤2次，室温干燥后，用50µlTE （含20µg/ml的Rnase）溶解DNA，－20℃冰箱放置备用。
核酸制备的步骤： 破碎细胞
01
一、实验原理
核酸酶的抑制和抑制剂 降低温度，改变pH及盐的浓度，都利于对核酸酶活性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然，几个条件并用更好。 对于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止机械张力拉断则更重要。 对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑制RNase活力较难，故在RNA提取中设法抑制RNase更重要。
(一)细菌基因组DNA的提取
（一）细菌基因组DNA的提取1.试剂1）CTAB/NaCl溶液：4.1g NaCl溶解于80mL H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100mL。
2）其它试剂：氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶K (20mg/mL或粉剂)，5mol/L NaCl。
2.操作步骤：1）100mL 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。
2）加9.5mL TE悬浮沉淀, 并加0.5 mL 10% SDS, 50 μL 20mg/mL(或1mg干粉)蛋白酶K, 混匀, 37℃保温1小时。
3）加1.5mL 5mol/L NaCl, 混匀。
4）加1.5mL CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。
5）用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。
6）用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。
7）加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。
8）用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1mL TE, -20℃保存。
如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。
（二）细胞基因组DNA的提取Each sample + TNES buffer 500 μL +proteinase K 25 μL → 55 °C, 750 rpm, 2hr →+150 μL 6M NaCl, vortex → spin 5 min, Max, romm temperature (RT) →isolate supernatant + 600 μL cold ethanol (95%), vortex → spin 5 min, Max, RT→ precipitation + 75% ethanol, RT, Vortex → spin 5 min, Max, RT →precipitation+50 μL TE buffer (10× stock solution), keep in 4 °C.（三）Chelex法抽提DNA1.用无菌棉签取双侧颊粘膜拭子，室温下自然干燥过夜，在无菌容器中保存。
细菌dna的提取实验报告
细菌dna的提取实验报告
《细菌DNA的提取实验报告》
实验目的：通过提取细菌DNA，掌握DNA提取的基本原理和方法，以及了解
细菌DNA的结构和特点。
实验材料：
1. 大肠杆菌样品
2. 细菌培养基
3. 离心管
4. 离心机
5. 离心管架
6. 琼脂糖
7. 蒸馏水
8. 离心管架
9. 乙醇
10. 磷酸缓冲液
11. 离心管架
12. DNA提取试剂盒
实验步骤：
1. 取一支含有大肠杆菌的培养基样品，将其转移到离心管中，并进行离心分离。
2. 将上清液倒掉，留下菌体沉淀。
3. 加入磷酸缓冲液，将菌体彻底悬浮。
4. 加入琼脂糖，将菌体再次离心分离。
5. 倒掉上清液，留下菌体沉淀。
6. 加入DNA提取试剂，彻底溶解菌体。
7. 加入乙醇，使DNA沉淀出来。
8. 用蒸馏水洗涤DNA沉淀，最终得到纯净的细菌DNA。
实验结果：
经过提取实验，成功得到了纯净的细菌DNA。
在电泳实验中，观察到明显的DNA条带，证明提取得到的DNA质量较高。
实验结论：
通过本次实验，我们掌握了细菌DNA提取的基本原理和方法，了解了细菌DNA的结构和特点。
同时，也加深了对DNA提取技术的理解，为今后的实验和研究打下了坚实的基础。
细菌DNA的提取实验是生物学和分子生物学领域中的重要实验之一，它不仅可以帮助我们了解细菌的遗传信息，还可以为基因工程和生物技术的发展提供重要的实验数据。
希望通过这篇实验报告，能够对细菌DNA提取实验有一个更深入的了解，为相关领域的学习和研究提供帮助。
煮沸法提取细菌dna步骤
煮沸法提取细菌dna步骤
煮沸法提取细菌DNA是一种简单有效的DNA提取方法。
要想成功
地进行DNA提取，需要按照以下步骤进行操作：
1. 收集细菌样品。
选择合适的细菌样品并将其培养至对数生长期。
浓缩细菌菌液可获得更高DNA产量。
2. 细胞破碎。
将细菌菌液转移到离心管中，将其离心收集细胞沉淀。
将细胞沉淀加入含有蛋白酶K和SDS的溶液中（如TE缓冲液或海
盐缓冲液），并在60℃条件下煮沸10-15分钟。
3. 去除蛋白质和RNA。
使用苯酚/氯仿混合物或离心柱/载体提取
蛋白质和RNA，留下DNA。
4. 沉淀DNA。
使用无水乙醇沉淀DNA，定量并保存。
5. 纯化DNA。
使用柱过滤、琼脂糖凝胶电泳或商用基因分离试剂
盒等方法纯化DNA，获得更高纯度的DNA。
总的来说，煮沸法提取细菌DNA是一种快速、简单、成本低、适
用于小样品的DNA提取方法。
在进行实验时，需注意样品处理、破碎、离心、沉淀和纯化过程中的每一个细节，才能成功提取到高纯度的DNA 样品。
细菌DNA提取方法
细菌DNＡ提取方案细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如Ｅ．coli，一般有三种可以选择的方法。
一、水煮模板法——主要用于PＣＲ反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线,3７摄氏度培养18-24小时。
２、刮取1～2接种环菌苔加入15０微升三蒸水中，混匀，１00摄氏度煮沸10分钟。
3、12００0转/分钟离心10分钟，取上清,－２0摄氏度保存备用。
操作最简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。
但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。
有人称扩增4ｋｂ以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。
编者建议:此法得到的模版保存时间短,强烈建议每月重新制作一次。
二、CTAB/NaCｌ法１、接种一单菌落于5ｍｌＬB中,30℃培养过夜,２、取１ml种子培养液接入１00ml2%LＢ中,37℃、２20r/min培养16小时；3、5000r／ｍin离心1０分钟,弃去上清。
４、加入10ｍｌTＥ离心洗涤后，用10mｌTE溶解菌体，混匀,－20℃保存备用。
５、取3.5ml菌悬液,加入184μl10%SDS,混匀,加入37μl１0mｇ/ml蛋白酶K,混匀,3７℃温育1小时6、加入7４０μl5ｍol/LＮaＣｌ，再加入５12μlCTAB/ＮaCl,混匀,６5℃温育１0分钟。
７、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/ｍiｎ离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（２5∶24∶１),混匀,100０0r/min离心5分钟，保留上清。
９、加入0.６倍的异丙醇,混匀，１0000ｒ/min离心５分钟,收集DNＡ沉淀,用70%乙醇离心洗涤DＮA沉淀。
１0、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/ｍlＲNａseＡ,4℃保存。
ＣＴAB／NaCl法提取的DNA纯度较高,蛋白杂质较少,保存时间长，编者更喜欢把终浓度为２0μg／ｍl Rnas ｅＡ加在第5步温育的时候，这样最后没有ＲnａsｅA污染。
细菌dna的提取实验报告
细菌dna的提取实验报告细菌DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，携带着生命的基本信息。
对于细菌来说，DNA的提取是研究其遗传特性和进化过程的重要手段。
本实验旨在通过提取细菌DNA，了解其结构和功能。
材料与方法：1. 细菌培养物：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：含有必需营养物质的培养基。
3. 细菌培养器具：培养皿、试管、移液器等。
4. 提取试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇等。
步骤：1. 准备培养基：按照说明书将培养基溶解于适量的蒸馏水中，并灭菌。
2. 培养细菌：将细菌菌株接种于培养基中，放入培养器中，在适宜的温度和湿度下培养一段时间，使细菌繁殖。
3. 收集细菌：将培养皿中的菌落取出，转移到试管中。
4. 细菌裂解：向试管中加入适量的细胞裂解缓冲液，用移液器轻轻混合，使细菌细胞破裂释放DNA。
5. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，使其降解蛋白质，避免在DNA提取过程中的干扰。
6. DNA沉淀：向试管中加入等体积的异丙醇，轻轻摇动试管，使DNA沉淀形成。
7. DNA收集：用移液器将DNA沉淀转移到另一个试管中，去除异丙醇。
8. DNA溶解：加入适量的蒸馏水，轻轻摇动试管，使DNA溶解。
结果与讨论：经过上述步骤，我们成功地提取到了细菌的DNA。
下面将对实验结果进行讨论。
1. DNA的外观：提取得到的DNA呈现为无色透明的溶液状，可以通过肉眼观察到。
2. DNA的浓度：可以通过分光光度计等仪器测量DNA的浓度，以确定提取的DNA量是否足够。
3. DNA的纯度：通过比色法或凝胶电泳等方法，可以评估DNA的纯度，即DNA中是否含有杂质。
4. DNA的稳定性：提取得到的DNA可以在低温下长期保存，以便后续的实验研究。
细菌DNA的提取是研究细菌遗传特性和进化过程的基础。
通过提取DNA，可以进行PCR扩增、测序、基因克隆等实验，进一步了解细菌的基因组结构和功能。
细菌基因组DNA提取方法
细菌基因组DNA提取方法1、取1.5mL菌液于2mL 离心管，12000rpm离心5min，弃上清；2、加入600ul 1xTE 重悬菌体沉淀，4℃ 12000rpm离心5min，弃上清；3、加入450ul 1xTE和50ul 10mg/mL 溶菌酶和10ul 100mg/mL 蜗牛酶，吹吸混匀，37℃孵育1h（或4℃过夜），每隔15min颠倒混匀一次；4、加入600ul TENS裂解液，和与沉淀等体积的玻璃珠，吹吸混匀，涡旋震荡10min 后，再加入30ul 20mg/mL 蛋白酶K，吹吸混匀，55℃孵育1h，每隔15min颠倒混匀一次；5、4℃ 12000rpm离心10min，转移上清至另一个干净的1.5mL 离心管；6、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），充分混匀，-20℃静置2min，4℃ 12000rpm 离心5min；7、转移上清至另一个干净的 1.5mL 离心管，加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），充分混匀，-20℃静置2min，4℃ 12000rpm离心5min；8、转移上清至另一个干净的1.5mL 离心管，加入1/10 体积的3M 醋酸钠，2倍体积（加入醋酸钠后的终体积）预冷的无水乙醇，充分混匀，-20℃沉淀2h。
（或加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，-20℃沉淀2h），4℃ 12000rpm离心10min，弃上清；注：如需得到纯度更高的样品，可先用异丙醇沉淀，无菌水充分溶解后，离心取上清，再用醋酸钠+无水乙醇沉淀一次。
9、加入600ul 预冷的70%乙醇洗涤DNA沉淀，颠倒混匀，4℃ 12000rpm离心5min，弃上清；重复洗涤一次。
10、吸干离心管中的残留液体，待离心管风干后，加入30ul 无菌水和0.5ul 10mg/mL 的RNase A，吹吸混匀，取3ul电泳检测，剩余置于-20℃保存。
附：一、所需仪器恒温水浴锅、高压灭菌锅、高速冷冻离心机、超净工作台、通风橱、电子天平、称量纸、药匙、各种规格移液器及吸头、剪刀、1.5mL离心管、2mL离心管、15mL离心管、50mL离心管、涡旋震荡仪、掌上离心机、4℃及-20℃冰箱、微波炉、电泳仪、凝胶成像仪、Nanodrop微量分光光度计、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、封口膜、橡皮筋。
菌dna提取方法
菌dna提取方法
菌DNA提取方法可以根据不同的菌种和实验目的选择不同的方法。
常见的菌DNA提取方法有以下几种：
1. 热裂解法：将菌落或菌液直接加热至95以上，破坏细胞壁和细胞膜，释放DNA。
然后用离心等方法获取DNA。
2. 高盐法：将菌液经过离心，去除细胞上的多余物质，然后利用高盐浓度溶解细胞膜和蛋白质，释放DNA。
最后用离心等方法将DNA沉淀。
3. 酶解法：将菌液经过离心，去除细胞上的多余物质，然后利用蛋白酶和蛋白酶K等酶类处理细胞膜和蛋白质，使DNA被释放。
最后用离心等方法将DNA 沉淀。
4. 化学法：使用溶解剂如SDS、EDTA、Tris-HCl等，破坏细胞壁和细胞膜，溶解细胞质，释放DNA。
然后用离心等方法将DNA沉淀。
上述方法只是常见的几种，具体如何选择取决于所研究菌种的特性和实验要求。
在操作过程中，需要注意细胞解析液的配制、细胞破碎的时间和条件、DNA沉淀的洗涤和溶解等步骤的控制，以保证提取到高质量的菌DNA。
细菌DNA的提取
先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.，第二天4000rpm离心10min收集菌体，用Washing TE（50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0）洗菌体2次，之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中，先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS，轻轻混匀后50℃放置3h~5h，接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次，氯仿抽提一次后，乙醇沉淀DNA，用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。
DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH 7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。
第二种方法：
试验步骤：3 f' N; ]8 s$ s' t- E3 f7 w! o
1、真菌菌丝0.5-1 g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入3 mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min,期间混匀2-3次。
6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30 min。. u2 {! w0 {6 R& o
7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。
8、加入1 ul RNaseA（10 mg/mL），37℃下处理1 h。
试验步骤：
1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。
3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。
细菌DNA提取方法
细菌DNA提取方案细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。
一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。
2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。
3、12000转/分钟离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。
操作最简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。
但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。
有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。
编者建议：此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作一次。
二、CTAB/NaCl 法1、接种一单菌落于5mlLB中,30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml2%LB中,37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀,-20℃保存备用。
5、取3.5ml菌悬液,加入184μl10%SDS,混匀,加入37μl10mg/ml蛋白酶K,混匀,37℃温育1小时6、加入740μl5mol/LNaCl,再加入512μlCTAB/NaCl,混匀,65℃温育10分钟。
7、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
9、加入0.6倍的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟,收集DNA沉淀,用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。
10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/mlRNaseA,4℃保存。
CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA 加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。
细菌DNA提取的方法
快速提取细菌和酵母菌DNA的方法材料：菌株-革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌；苯酚、氯仿（三氯甲烷）；STE缓冲液（100mM NaCl，10mM Tris/HCl，1mM EDTA，pH 8.0）TE缓冲液(10 mMTris/HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0).RNase: 10mg/mL方法步骤:（1）吸取1mL细菌悬浮液8000rpm 2min (除肺炎双球菌外，13000rpm 10min)；（2）倒去上清液，并用400uL的STE缓冲液洗涤两次；（3）8000rpm离心2min (除肺炎双球菌外，13000g 10min)；（4）倒去上清液，并加入200uL的TE缓冲液是沉淀再次悬浮；（5）吸取100uL的饱和Tris-苯酚于离心管中，涡旋振荡混合60s（酵母菌120-200s）使细胞溶解;（6）接着在4℃的条件下13000rpm 5min离心时水相和有机相分层；（7）从水相中吸取160uL转移至新的1.5mL离心管，并加入40uL的TE缓冲液至200uL；添加100uL氯仿（三氯甲烷）在4℃条件下13000g 离心5min，目的是利用氯仿将溶解产物进行纯化至白色的界面不在出现；重复2-3次；（8）吸取上清液160uL于洁净的1.5mL离心管中，添加40uL TE缓冲液和5uLRNase 37℃培养10min 以消解RNA；（9）然后添加100uL的氯仿混匀，4℃条件下13000rpm 5min;（10）吸取150uL上清液于新的1.5mL离心管中，此时上清液中含有纯化的DNA可直接用于实验或-20℃保存。
该方法的优点：（1）该方法省略了用SDS、溶菌酶和蛋白酶K溶解细菌的步骤，取而代之的是利用苯酚。
（2）省略了4-6次离心；（3）省略了水浴、沉淀、洗脱、和烘干等步骤。
细菌DNA提取方法
细菌DNA提取方案细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如，一般有三种可以选择的方法。
一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。
2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。
3、12000转/分钟离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。
操作最简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、等杂质。
但是作为一般目的的PCR 反应模板已经足够了。
有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。
编者建议：此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作一次。
二、CTAB/NaCl 法1、接种一单菌落于5mlLB中,30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml2%LB中,37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀,-20℃保存备用。
5、取菌悬液,加入184μl10%SDS,混匀,加入37μl10mg/ml蛋白酶K,混匀,37℃温育1小时6、加入740μl5mol/LNaCl,再加入512μlCTAB/NaCl,混匀,65℃温育10分钟。
7、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
9、加入倍的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟,收集DNA沉淀,用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。
10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/mlRNaseA,4℃保存。
CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA 加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。
CTAB法提取细菌DNA
【目的和要求】1. 学会CTAB法提取细菌总DNA。
2. 掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。
【实验原理】DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。
CTAB（溴代十六烷基三甲胺）是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若降低盐浓度，CTAB与核酸的复合物会沉淀出来，而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。
DNA的电泳原理与蛋白质的电泳原理基本相同。
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于DNA分子或DNA片断的分子量差别，电泳后呈现迁移位置的差异。
【实验试剂和器材】（一）试剂：菌株（E.coli）；蛋白酶K（20mg/ml）；琼脂糖；标准DNA水解液1. 10%SDS2．酚/氯仿/异戊醇（1/1/1）3. 异丙醇；70%乙醇4．LB培养基：蛋白胨10g, 酵母粉5g, NaCl 10g加蒸馏水至1升，然后灭菌备用。
5．TE缓冲液：10mM Tris• HCl, 0.1mM EDTA (pH8.0)。
6．CTAB/NaCl溶液(5% w/v)：5g CTAB 溶于100ml 0.5M NaCl溶液中，需要加热到65℃使之溶解，然后室温保存。
7．TAE缓冲液（50×）(pH8.0)：每升溶液中含有242g Tris, 57.1ml 冰乙酸，100ml 0.5mol/L EDTA。
电泳时稀释成1×浓度使用。
8．溴酚兰-甘油指示剂：先配制0.1%溴酚兰水溶液，然后取1份0.1%溴酚兰溶液与等体积的甘油混合即成9．0.5ug/ml 溴乙啶染液：称取5mg溴乙啶，用重蒸水溶解定容到10ml, 取1ml此溶液用1xTAE缓冲液稀释到1升，最终浓度为0.5ug/ml。
（二）器材：锥形瓶（250ml），1.5ml 离心管，水浴锅，离心机，电泳槽，电泳仪，摇床，移液枪，洁净工作台，电磁炉，紫外成像仪【实验方法】（一）细菌总DNA的提取1. 将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
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细菌DNA的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂：抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl25mMEDTA10MLiCl2MLiClDEPC-water（抑制RNA酶活性）3MNaAc96%乙醇70%乙醇试验步骤：1、抽提缓冲液65℃预热。
2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。
3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12,000rpm，离心10min。
4、取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12,000rpm，离心10min。
5、重复再作一次步骤4。
6、加入1/10体积的3M醋酸钠和倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。
7、以2,000rpm，离心10min。
8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
较为常用的细菌DNA提取方法：实验步骤：1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2、取培养物12000rpm离心2min。
3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul10%SDS 和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．真菌DNA提取总结的两种方法：第一种方法：试验步骤：1、取真菌菌丝,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。
3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。
4、以4℃，1000rpm，离心5min。
5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。
以4℃，10,000rpm，离心5min。
6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。
7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。
8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。
9、用酚（）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。
以4℃，10,000rpm，离心5min。
10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc,倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。
11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。
DNA提取液：（），，，1％SDS，3MNaAc。
第二种方法：试验步骤：1、真菌菌丝,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。
3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。
4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）。
5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。
6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。
7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。
8、用酚（）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。
以4℃，10,000rpm，离心5min。
9、取上清，1/10V3MNaAc,体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。
10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。
细菌基因组DNA的提取方法综述，提供了5种方法。
1 快速微量提取法A.取菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min, 丢去上清夜，收集菌体。
B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,）混匀,置于37o C水浴1hr。
C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。
D.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。
E.加两倍体积无水乙醇，1/10体积醋酸钾(3M ,，-20度保存1小时后，13000rpm离心15min，弃上清液，沉淀用70%乙醇洗2次；置于室温干燥后，溶于50ulTE溶液中，置4℃保存备用。
2 蛋白酶/SDS法制备先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.，第二天4000rpm离心10min收集菌体，用Washing TE （50mmol/LTris-HCl ,10mmol/LEDTA ）洗菌体2次，之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中，先后加入5mg/L的蛋白酶、10% SDS，轻轻混匀后50℃放置3h~5h，接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次，氯仿抽提一次后，乙醇沉淀DNA，用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。
31) 细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中，37℃摇床（300rpm）培养过液。
2) 细菌收集：取1ml培养物于EP管中，室温8000rpm离心5min，弃上清，沉淀重新悬浮于1ml TE（）中（用ddH2O也行)。
3) 菌体裂解：加入6μl 50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。
再加2mol/LNaCl50μl，10%SDS 110μl，20mg/ml 的蛋白酶K 3μl，50℃作用3h或37℃过夜。
（此时菌液应为透明粘稠液体）4) 抽提：菌液均分到两个EP管，加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，混匀，室温放置5-10min。
12000rpm离心10min。
抽提两次。
（上清很粘稠，吸取时应小心，最好枪头尖应剪去）5) 沉淀：加倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10min。
1 2000rpm离心10min。
6)洗涤：沉淀用75%的乙醇洗涤。
7) 抽（凉）干后，溶于50μl ddH2O中，取2-5μl电泳。
作PCR模板用。
4. DNA EXTRACTION PROCEDURE - GENERAL1) Grow cells overnight in 500 ml broth medium.2) Pellet cells by centrifugation, and resuspend in 5 ml 50 mM Tris (pH , 50 mM EDTA.3) Freeze cell suspension at -20C4) Add ml 250 mM Tris (pH , 10 mg/ml lysozyme to frozen suspension, and let thaw at room temperature. When thawed, place on ice for 45 min.5) Add 1 ml % SDS, 50 mM Tris (pH , M EDTA, 1 mg/ml proteinase K. Place in 50C water bath for 60 min.6) Extract with 6 ml Tris-equilibrated phenol and centrifuge at 10,000X g for 15 min. Transfer top layer to new tube (avoid interface). Re-do this step if necessary.7) Add vol 3M Na acetate (mix gently), then add 2 vol 95% ethanol (mix by inverting).Spool out DNA and transfer to 5 ml 50 mM Tris (pH , 1 mM EDTA, 200 g/ml RNase. Dissolve overnight by rocking at 4C.8) Extract with equal volume chloroform (mix by inverting) and centrifuge at 10,000X g for 5 min. Transfer top layer to a new tube.9) Add vol 3M Na acetate (mix gently), then add 2 vol 95% ethanol (mix by inverting).10) Spool out DNA and dissolve in 2 ml 50 mM Tris (pH , 1 mM EDTA.11) Check purity of DNA by electrophoresis and spectrophotometric analysis.51) 100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。
2) 加TE悬浮沉淀, 并加10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K, 混匀, 37℃保温1小时。
3) 加5mol/L NaCl, 混匀。
4) 加CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。
5) 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。
6) 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。
7) 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。
8) 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。
如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。
9) 如要除去其中的RNA, 可以按本章第三节中操作步骤处理。
注：1)CTAB/NaCl溶液：NaCl溶解于80ml H2O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。
2)氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶K (20mg/ml 或粉剂)，5mol/L NaCl。
本方法通过SDS裂解细胞，蛋白酶降解蛋白，CTAB去除多糖成分一：仪器：同方法一二：试剂：TE、TAE 缓冲液；10%SDS；５ＭNaCL；20mg/ml蛋白酶Ｋ；CTAB/NaCL溶液(10% CTAB，NaCL 溶于80ml水中，缓慢加入10gCTAB，加热溶解)；25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇；异丙醇；７０％及100%乙醇三：操作对数生长期细菌细胞离心，5000rpm,1min 沉淀溶于500μl TE缓冲液中混匀30μl 10%SDS,3μL 蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1小时100μl NaCL(5M) 混匀80μl的CTAB/NaCL,*混匀；65℃ 10min（可不做）加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心12000rpm,4-5min 取上清，以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。