微生物方法学验证范本
微生物限度检查法方法验证结果报告模板(1)
微生物限度检查法方法验证结果报告一、验证用样品:********片(批号:********)二、验证用菌种(1)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B)63501](2)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )[CMCC(B) 26003](3)大肠杆菌(Escherichia coli)[CMCC(F) 44102](4)白色念珠菌(Candida a lbicans )[CMCC(F )98001](5)黑曲霉菌(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]均为第3代,由山东省药品检验所提供三、方法中国药典2005年版二部附录XⅠ J。
四、培养基制备:(1)营养琼脂培养基批号********称取 32 g,加入 1000 ml蒸馏水(2)改良马丁琼脂培养基批号********称取 42 g,加入 1000 ml蒸馏水(3)MUG培养基批号********称取 23.37 g,加入 1000 ml蒸馏水(4)玫瑰红钠培养基批号********称取 31.5 g,加入 1000 ml蒸馏水(5)胆盐乳糖培养基批号********称取 38.5 g,加入 1000 ml蒸馏水五、菌数、霉菌数、酵母菌数计数方法学验证1、菌液制备:(1)取经30~35℃培养18~24小时,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养琼脂培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50~100cfu的菌悬液,做活菌计数备用。
(2)取经23~28℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁琼脂培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50~100cfu的菌悬液,做活菌计数备用。
(3)取经23~28℃培养1周的黑曲霉菌斜面培养物,加3~5ml盐水洗下霉菌孢子,吸出孢子悬液,(用管口带有薄的无菌棉花能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50~100cfu的菌悬液,做活菌计数备用。
无菌检查微生物限度检查方法学验证实例
供试液制备:取样品10瓶分别加0.1%蛋
白胨溶液30 ml溶解后,过滤。
7.活菌计数
活菌计数结果见表1。
10-4稀释
10-5稀释
10-7稀释
试验次数
1
2
1
21Βιβλιοθήκη 2金黄色葡萄球菌56
60
枯草芽孢杆菌
77
79
白色念珠菌
86
70
黑曲霉菌
80
76
铜绿假单胞菌
47
50
方法验证
直接接种法:取样品12支,分别接种8支硫乙醇酸盐和4支霉菌液体培养基2ml/支后,再按要求加入相应的阳性菌液(30-100个/ml),置规定温度培养3-5天,逐日观察结果。
仪器和滤器:HTY-2000A集菌仪,全封闭无菌试验过滤培养器(批号20050105)北京牛牛基因有限公司。
01
方法:中国药典2005年版无菌检查的验证实验
02
操作方法 菌液制备: 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, 32.5±2.5℃培养18~24小时;
培养:硫乙醇酸盐流体培养基桶30-35℃培养;真菌培养基桶23-28℃培养。观察结果。
结果 细菌和真菌数计数结果分别见表1和表2。
表1 细菌数计数 表2 真菌数计数结果
*
菌 种
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
铜绿假单胞菌
生孢梭菌
计数(CFU)
22
26
36
39
62
66
58
54
45、 23
128、108
微生物限度方法学验证方案
微生物限度方法学验证方案1.实验目的:本实验的目的是确定产品中大肠杆菌的数量,以评估其微生物污染程度,并验证产品是否符合相关规定的微生物限度标准。
2.实验材料和仪器:-试样:待测试的产品样品(如药品、食品等)-培养基:亚洲太平洋社会协调委员会(APHA)液体培养基或平板培养基-培养器具和耗材:试管、平板、无菌纱布、无菌拔火棉、无菌吸管、无菌移液器、无菌塑料培养瓶等-仪器设备:恒温箱、培养箱、显微镜等3.实验步骤:3.1样品制备:将待测试产品样品均匀涂布于无菌培养基平板上,根据需要,将不同稀释度的样品分别涂布于多个平板上。
3.2培养:将涂布好样品的平板放入恒温箱或培养箱中,在适当的温度(通常为37°C)下培养一定时间(通常为24小时)。
在培养的过程中注意保持无菌环境。
3.3平板计数:在培养完成后,检查每个平板上的菌落形成情况。
根据实验需要,可以选择不同的方法进行菌落计数。
常见的方法有手工计数和自动计数仪器。
例如,使用显微镜进行手工计数,或使用自动计数仪器进行电子计数。
3.4数据处理:根据菌落计数结果计算大肠杆菌的数量,并将结果与相关的微生物限度标准进行比较。
如果实验结果符合标准,则产品可被视为合格;如果结果不符合标准,需要采取相应的控制措施,如重新调整产品配方、改变生产工艺等。
4.实验注意事项:-所有试验操作都必须在无菌环境中进行,以避免结果被外源性微生物污染。
-使用符合相关质量标准的试剂和培养基。
-实验前应进行适当的预试验,以确定最佳的稀释度和培养条件。
-大肠杆菌计数要根据不同的产品、数量和国家的相关标准来确定。
-实验结果的准确性和可靠性需要重复试验和验证。
通过以上实验步骤和注意事项,可以进行微生物限度方法学验证,确定产品中大肠杆菌的数量,并评估其微生物污染情况。
这个验证方案可以用于药品、食品和其他产品的质量控制和安全评估。
微生物限度检查方法学验证报告模板
微生物限度检查法验证试验报告品名奥氮平盐酸氟西汀胶囊规格12mg/25mg批号20140807,20140808,20140809 来源试验日期2014年8月24日~2014年9月20日依据《中国药典》2010版二部1、样品:奥氮平盐酸氟西汀胶囊(批号20140807,20140808,20140809),规格:12mg/25mg2、试液与稀释液:pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号:)、0.9%无菌氯化钠(批号:)、1%红四氮唑(批号:)、含1%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号:)。
3、主要的设备及器具:净化工作台(型号)、培养箱(型号)、电子天平(型号)、恒温摇床(型号)、生物安全柜(型号)、无菌培养皿、菌落计数器、接种环、、酒精棉球、酒精灯、刻度吸管(1ml,10ml)、锥形瓶、试管及试管塞、吸耳球、显微镜等。
4、验证试验用菌种:大肠埃希菌CMCC(B)44 102、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63 501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003、白色念珠菌CMCC(F)98 001、黑曲菌CMCC(F)98 003,均由中国药品生物制品鉴定所提供。
5、对照培养基:4-甲基伞形酮葡萄苷酸(MUG)培养基(批号),胆盐乳糖发酵培养基(批号),胆盐乳糖培养基(批号);玫瑰红钠琼脂(批号);营养琼脂(批号),营养肉汤培养基(批号),均由中国食品药品检定研究院提供。
6、试验用培养基:营养琼脂培养基(批号);玫瑰红钠琼脂培养基(批号);营养肉汤培养基(批号);改良马丁培养基(批号),胆盐乳糖培养基(批号);4-甲基伞形酮葡萄苷酸(MUG)培养基(批号),由******公司提供(配制)。
7、试验方案按《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法规定,本品微生物限度标准应为:1g供试品中,细菌数不得过1000cfu,霉菌和酵母菌数不得过100cfu,大肠埃希菌不得检出。
微生物限度检查法验证方案模板
文件编号:SVP YF-0-01-00验证文件******微生物限度 检查法验证方案********有限责任公司目录1 适用范围 2 目的 3 概述 4 验证所需要的仪器设备及文件 5 可接受的限度范围标准 6 测试方法 7 异常情况处理 8 测试结果 9 结论 10 再验证周期 11 附表1 适用范围 本验证方案适用于******微生物限度检查法的验证。
2 目的 建立该产品的微生物限度检查方法,并对其有效性进行评价,确保试验方法的完整性,保证检验结果的可靠性。
3 概述 3.1******处方中含有盐酸氨基葡萄糖以及常用辅料等成分,文献报道盐酸氨基葡 萄糖有抑菌活性。
根据以上特点,按《中国药典》2010 年版附录Ⅺ J《微生物限度 检查法方法》的“供试品的制备”项下需用特殊方法制备供试液中(6)制备供试 液。
“细菌,霉菌,酵母菌计数”项下检查法 2 薄膜过滤法进行细菌,霉菌及酵母 菌的计数方法验证,控制菌检查项下控制菌的检查法验证。
3.2 验证时间:************批平行三次试验。
4 验证所需要的仪器设备及文件 4.1 验证需用仪器设备器具名称规格型号检定日期检定单位有效期电热恒温培养箱 HG101-3多用生化培养箱 SP-80 蒸汽灭菌器 ZDX-35B4.2 验证所需要的文件及存放地方 资料名称《HG101-3 电热恒温培养箱操作维护保养 SOP》 《SP-80 型生化培养箱操作维护保养 SOP》 《ZDX-35B 蒸汽灭菌器操作维护保养 SOP》 《微生物限度检查法 SOP》 5 可接受的限度范围标准 5.1******微生物限度检查质量标准存放地点项目标准规定细菌总数≤1000 个/g霉菌、酵母菌≤100 个/g大肠埃希菌不得检出5.2 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果判断在 3 次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率应不低于 70%。
若试验组的菌回收率均不低于 70%,照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌;若任一次试验中实验组的菌回收率低于 70%,应采用其他方法消除供试品的抑菌活性,并重新进行方法验证。
微生物限度方法学验证方案
微生物限度检测方法学验证方案文件编号:P-批准签字页目录1.目的 (4)2.范围 (4)3.责任者及职责 (4)4.验证简介 (4)5.验证过程 (7)6.结果判断 (8)7.结论和建议 (8)8.异常情况报告 (8)9.再验证 (8)10.附件 (8)附件1:培养基的灵敏度复核 (9)附件2:稀释液的无菌性检查 (10)附件3:方法验证 (11)1. 目的按照中国药典2010版(第三部),采用薄膜过滤法进行微生物限度检查,本方案对新修订的方法进行验证。
2. 范围本公司要求进行微生物限度检查的原辅料和制剂,中间制品以及消毒剂。
3. 责任者及职责4. 验证简介4.1 定义●CFU:菌落数●供试品对照组取规定量供试液,按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
●试验组当采取薄膜过滤法时,取规定量供试液,过滤,冲洗,试验菌加在最后一次冲洗液中,过滤后,取出滤膜接入对应培养基中。
●菌液组测定所加的试验菌数。
●稀释剂对照组用相应的稀释液替代供试品,按试验组规定的方法进行菌落计数。
4.2 菌悬液4.2.1菌种及来源检查人:复核人:检查日期:4.2.2菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上,30~35℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上,20~25℃培养24~48h。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50~100CFU的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,23~28℃培养5~7天,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。
然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100CFU的孢子溶液。
4.3 培养基及稀释液4.3.1培养基和稀释液的名称培养基:营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基稀释液:pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液、灭菌纯化水4.3.2培养基灵敏度复核培养基灵敏度复核,参见《培养基的灵敏度检查操作规程》QC2524.3.3稀释液的无菌性检查对稀释液进行无菌检查,14天规定温度培养后应无菌。
最新微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案六、验证内容1.供试液的制备1.1.取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,充分振摇使混匀,作为1:10的供试液。
1.2.取1:10供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,充分振摇使混匀,作为1:100的供试液。
1.3.取1:100供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,充分振摇使混匀,作为1:1000的供试液。
备注:供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1小时。
2.菌液制备2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中,30〜35℃培养18~24小时;分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,20〜25℃培养2~3 天;取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,依次稀释至,制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,20〜25℃培养5〜7天,使大量的孢子成熟。
加入3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,将孢子洗脱。
然后,采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至,制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。
2.4.上述菌悬液制备后若在室温下放置,应在2小时之内使用;若保存在2~8℃,可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃,在验证过的贮存有效期内使用。
微生物方法学验证
微⽣物⽅法学验证速效⼼痛滴丸2.微⽣物限度检查参照中国药典2005年版⼀部要求,对微⽣物限度检查作验证试验如下:2.1微⽣物限度检查法验证实验2.1.1.验证⽤菌种:⾦黄⾊葡萄球菌CMCC(B)26 003、枯草杆菌CMCC (B)63 501、⼤肠埃希菌CMCC(B)44 102、⽩⾊念珠菌CMCC(F)98 001、⿊曲霉CMCC(F)98 0032.1.2⽅法:中国药典2005年版附录⼀部XIII C 微⽣物限度检查⽅法验证试验。
2.1.3操作⽅法:(1)菌液制备:a. 取经37℃培养24h⾦黄⾊葡萄球菌、⼤肠埃希菌、枯草杆菌的⾁汤培养物1ml+9ml⽣理盐⽔10倍稀释⾄10-5(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备⽤。
b. 取经25℃培养24h的⽩⾊念珠菌⾁汤培养物1ml+9ml⽣理盐⽔10倍稀释⾄10-5(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备⽤。
c. 取经25℃培养1周的⿊曲霉斜⾯培养物,⽤5ml⽣理盐⽔洗下霉菌孢⼦,吸取菌液,⽤标准⽐浊管⽐浊,然后取1ml+9ml⽣理盐⽔10倍稀释⾄10-4(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备⽤。
(2)供试液制备:称取供试品10g,研细,加pH7.0的⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液⾄100ml,⽤匀浆仪,混匀,作为1:10的供试液,分别⼈⼯污染上述5种代表实验菌株。
(3)回收率测定a. 实验组:取1:10供试液1ml和1ml实验菌液同时加⼊平⽫中,⽴即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72⼩时,观察计数。
b. 活菌组:照上述⽅法测定每1菌株的实验菌数。
c. 供试液对照:测定供试品本底菌数。
d. 稀释剂对照组,取稀释液同法操作,测定,应⽆菌⽣长。
4.结果:菌落计数结果,回收率实验结果,见表2、表3:表2 菌落计数(cfu/ml)从表3可知,⽟屏风泡腾颗粒样品处理后,按常规法进⾏微⽣物限度检查,供试品对5种菌株的回收率试验均⾼于70%可采⽤此法检验。
微生物限度方法验证报告范文
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无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法,仅能用于工作用菌种的短期保藏。
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琼脂斜面低温保藏法保藏法(厂家常用)
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏, 无菌操作,取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内,轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下,取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液(pH7.0)加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔,注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液,收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟,冷却。 做好标记,放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜,及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录,内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案:购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程(SOP)、建立使用登记册,维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内,每次实验时,对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录;如发现问题应找原因,及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电,应立即停止实验,重新进入无菌室前,至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动,通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 生孢梭菌 [CMCC(B)64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10104] 大肠埃希菌 [CMCC(B)44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC(B)50094] 白色念珠菌 [CMCC(B)98001] 黑曲霉 [CMCC(B)9 003]
微生物检验方法验证方案
文件类别:验证文件编号:VF-PR-17-A部门:生产部微生物限度检查方法(平皿法)验证方案版次□新订□替代起草人:起草日期:年月日验证小组审阅方案批准人批准日期:年月日验证实施日期年月日复印数份批准人:分发至:质控部目录一、验证方案的制定二、验证方案的起草与审批三、微生物限度检查方法(平皿法)验证方案1.验证目的和原理2.验证方法步骤3.试验实施3.1试验前的准备3.2验证试验操作3.3试验结果4.验证结果评价分析5.附件微生物限度检查方法(平皿法)验证文件一、验证方案的制定二、验证方案的起草与审批1验证方案的起草2.验证方案的审核与批准验证方案审核人:审核日期:年月日验证方案批准人:批准日期:年月日三、微生物限度检查方法(平皿法)验证方案1.验证目的和原理1.1 验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定,特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需要变更时,应报验证委员会批准。
1.2 原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法(平皿法)验证前,所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒,以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验,通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性,试验结果应显示3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%,试验组的回收率也不低于70%。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备:高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱、霉菌培养箱。
微生物限度方法学验证完整版
微生物限度方法学验证 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】微生物限度检查方法学验证一、检验方法依据微生物计数法(中国药典2015年版四部1105);控制菌检查法(中国药典2015年版四部1106);非无菌药品微生物限度标准(中国药典2015年版四部1107);抑菌效力检查法(中国药典2015年版四部1121)检查。
二、菌种、培养基及稀释液表2培养基表3对照用培养基表4试剂稀释液:(1)缓冲液取L磷酸二氢钾溶液250ml,加L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml,摇匀,既得。
(2)%无菌氯化钠溶液取氯化钠,加水溶解使成1000ml,过滤,分装、灭菌。
(3)%(ml/ml)聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液取聚山梨酯80 ,用%无菌氯化钠溶液溶解并稀释至1000ml,滤过,分装,灭菌,备用。
(4)靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛,加入95%乙醇95ml,充分振摇,使完全溶解后,取盐酸20ml徐徐滴入。
三、菌液的制备1细菌、霉菌、酵母菌接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上,培养48小时。
上述培养物用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,培养7天,加入5ml含%(ml/ml)聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,然后吸出孢子悬液(用带有无菌棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管)用%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用,若保存在2~8℃可在24小时内使用。
2控制菌接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养24小时。
用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10~100cfu 的菌悬液。
微生物方法学验证
速效心痛滴丸2.微生物限度检查参照中国药典2005年版一部要求,对微生物限度检查作验证试验如下:2.1微生物限度检查法验证实验2.1.1.验证用菌种:金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003、枯草杆菌CMCC (B)63 501、大肠埃希菌CMCC(B)44 102、白色念珠菌CMCC(F)98 001、黑曲霉CMCC(F)98 0032.1.2方法:中国药典2005年版附录一部XIII C 微生物限度检查方法验证试验。
2.1.3操作方法:(1)菌液制备:a. 取经37℃培养24h金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-5(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备用。
b. 取经25℃培养24h的白色念珠菌肉汤培养物1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-5(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备用。
c. 取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物,用5ml生理盐水洗下霉菌孢子,吸取菌液,用标准比浊管比浊,然后取1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-4(细菌数约为50~100cfu/ml)做活菌计数备用。
(2)供试液制备:称取供试品10g,研细,加pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪,混匀,作为1:10的供试液,分别人工污染上述5种代表实验菌株。
(3)回收率测定a. 实验组:取1:10供试液1ml和1ml实验菌液同时加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72小时,观察计数。
b. 活菌组:照上述方法测定每1菌株的实验菌数。
c. 供试液对照:测定供试品本底菌数。
d. 稀释剂对照组,取稀释液同法操作,测定,应无菌生长。
4.结果:菌落计数结果,回收率实验结果,见表2、表3:表2 菌落计数(cfu/ml)从表3可知,玉屏风泡腾颗粒样品处理后,按常规法进行微生物限度检查,供试品对5种菌株的回收率试验均高于70%可采用此法检验。
微生物方法学验证范本
编码:VP-C01-MM-01 XXXX软膏微生物限度检查方法学验证方案起草人:年月日审核人:年月日年月日年月日批准人:年月日目录1.验证立项表2.验证内容2.1验证目的2.2验证范围2.3验证要求2.4验证方法2.4.1.试验原料、稀释剂和标准微生物2.4.2细菌、霉菌及酵母菌验证内容2.4.3金黄色葡萄球菌验证内容2.4.4铜绿假单胞菌验证内容3.验证报告验证立项表(REC)XXXX软膏微生物限度检查方法学验证方案1.验证目的XXXX软膏配方中含水杨酸、硼酸,该两种物质具有一定的抑菌性。
根据《中国药典》(2005年版)微生物限度检查标准规定,对XXXX软膏进行细菌、霉菌及酵母菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检查方法的验证试验,以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
2.验证范围本公司XXXX软膏的微生物限度检测。
3.判定标准3.1验证小组成员3.2细菌、霉菌及酵母菌在3次平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率(稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率)应均不低于70%,试验组的菌回收率(试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率)均不低于70%;产品的试验组与阳性菌组的菌落数差异不超过30%,假定产品试验组的平均值与阳性菌组的平均值之比为Q,则0.7W Q W1.3。
3.3金黄色葡萄球菌在3次平行试验中,供试品组:结果应为阴性,未检出金黄色葡萄球菌;试验组:结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌;阴性对照组:结果应为阴性,未检出阴性对照菌;阳性对照组:结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌。
3.4铜绿假单胞菌在3次平行试验中,供试品组:结果应为阴性,未检出铜绿假单胞菌;试验组:结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌;阴性对照组:结果应为阴性,未检出阴性对照菌;阳性对照组:结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌。
4.验证方法4.1试验原料、稀释剂和标准微生物4.1.1试验样品:XXXX软膏三批,批号为、、。
方法验证及不确定分析报告模板-微生物
方法验证及不确定度评定
报告
方法名称:
方法依据:
分析项目:
报告编写:日期:
报告审核:日期:
报告批准:日期:
1 方法原理(或适用范围)
2 主要人员、仪器设备及试剂耗材
样品处理,方法适用性等等,复现整个验证过程
4 验证报告结果
4.1精密度
描述精密度试验过程(同一个样品重复测量或同一产品多个样品平行测量)
表4 重复测量检测结果
4.2结果质量控制(阴性,阳性,环境监控)
5不确定度分析
从方法步骤可知,不确定度来源主要是由样品中微生物分布的均匀性和重复测量带来。
5.1检测结果:详见表4;
5.2取对数lgX ,得到对数后lgX = ; 5.3求残差lgX-X lg ; 5.4求残差平方和
210
1
)lgX (lg ∑=-
i X
=
5.5求平均值的标准不确定度
)
1(n )
lg lg (U 1
2
lgx --=∑=n X X n
i )
(
5.6求扩展不确定度
若取包含因子k=2,故)
(lgx kU U == 由于lgx 与x 之间属于非线性关系,不能直接求扩展不确定度U 的反对数,因此首先确定lgx 的取值范围:**≤lgx≤**
取反对数得:** ≤x≤ **
则本次测量结果的取值区间为** ≤x≤ **(置信概率95%)
6结论
由上述方法验证实验可知,实验室已满足方法要求的条件(包括人员资历、仪器设备、试剂、精密度等),适合在本实验室开展。
微生物验证模板
AAAA片微生物限度检查方法验证本品为中成药制剂,系口服给药制剂,按中国药典2005年版要求,需做细菌、霉菌及控制菌检查,同时需对检验方法进行验证,以确保检验方法的准确可靠。
一、试验材料及方法1.材料1.1 试验样品:AAAA片(BBBBBBBBBBB有限公司)批号:XXXXX,规格:XXX1.2 实验菌株:金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC (B)44102、枯草杆菌CMCC(B)63501、白色念株菌CMCC(F)98001,购自中国医学细菌保藏中心。
2.方法2.1菌液制备:接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌新鲜培养物至营养肉汤中30~35℃,培养18~24小时;接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中25℃,培养18~25小时,上述培养物用%.9无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100CFU的菌悬液,备用。
2.2 试液制备:取本品制成1:10的供试液备用。
2.3 试验组:取1:10的供试液1ml,置平板中,加入营养琼脂培养基15~20ml,放冷,倒置平板,30~35℃温度培养24~28小时,白色念珠菌用改良马丁培养基,于25℃培养72小时,观察结果。
根据药典要求药品微生物学检查方法验证主要用规定的已知菌数的试验菌加入到已制备处理好的样品溶液中,测定其数据,同时测定样品本底菌数,并设置稀释对照组。
根据已加入的菌数及测得菌数,计算回收率,规定要求:试验组及稀释组的菌回收率均不得低于7%,否则需重新选择样品处理方法,再进行回收率直到所采取的方法回收率试验达7%以上方可认为验证试验符合要求。
2.4 菌液组按中国药典2005年版微生物限度菌落计数方法测定每1ml中菌数。
2.5 供试品对照组:取规定量的供试液,按中国药典2005年版微生物限度菌落计数方法测定本品的本底数。
2.6 稀释剂对照组取ph7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml,余下同试验组。
2.7 验证试验至少应进行二次独立的平行试验,并分别计算各次试验的菌回收率。
微生物验证
微生物验证微生物验证3篇微生物验证篇一:微生物验证方案1.适用范围本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。
2.目的通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度的测定。
3.职责项目责任人:负责验证方案的起草及具体实施。
验证管理员:负责验证工作的组织、协调及管理。
QA现场监控员:负责验证实施过程中的监督检查,取样,确保结果的可靠性。
QC负责人:负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行,负责组织实施。
QC检验员:负责验证方案的起草与参与实施,并对所测数据准确性负责。
质量部经理:负责验证方案及报告的审核和批准。
4.内容4.1.概述通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定;确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件,按制定的方法进行试验,根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合,按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查;若不符合,重新建立制订检验方法和检验条件,再进行验证,直至验证结果符合设立的验证标准。
4.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查时,应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证,以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。
.验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。
4.2.1.验证用菌株及菌种要求大肠埃希菌【CMCC(B)44102】、金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】、黑曲霉【CMCC(F)98003】、白色念珠菌【CMCC (F)98001】。
大肠埃希菌为革兰氏阴性菌,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌,枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌,前述菌株作为细菌计数验证用菌株;黑曲霉为霉菌,白色念珠菌为酵母菌,作为霉菌及酵母菌计数验证用菌株。
验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0代),并采用适宜的菌种保藏技术,以保证试验菌株的生物学特性。
微生物方法学(模板)
5.5微生物限度依据《中国药典》2010年版一部附录XIII C微生物限度检查法,依法对三批中试产品进行检查,结果见表15-6。
表15-6 金刚藤分散片微生物限度检查结果批号031219 031221 031223细菌总数霉菌总数大肠杆菌活螨80<10未检出未检出60<10未检出未检出100<10未检出未检出结论:本品三批中试产品微生物限度检查均符合规定。
2010年版药典对微生物限度检查提出了新的要求,因此,在对准备送检的三批样品检验时,参照《中国药典》2010年版一部附录XIII C进行,试验如下:5.1.1细菌、霉菌及酵母菌的检查菌种金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003]、大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC (F)44 102]菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中,35℃培养24小时。
用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,25℃培养48小时。
用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,28℃培养7天,加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,用管口带有薄的无菌纱布的无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管中,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
计数方法验证供试液的制备:取050815批样品10g,加pH7.0的无菌氯化钠-蛋白栋缓冲液至100ml,振摇,使溶解,作为1:10的供试液。
微生物限度检查方法适用性验证方案样本
微生物限度检查办法合用性实验方案验证方案组织与实行微生物限度检查办法合用性实验工作应由质量管理部门负责组织,质量管理部门关于人员构成验证小组,参加实行。
方案起草方案审核方案批准目录一、概述二、验证目和风险评估三、验证内容四、办法鉴定五、再验证周期六、参照文献七、成果评价及结论1、概述:微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染限度办法。
检查项目涉及需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。
当建立产品微生物限度检查法时,应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数办法合用性实验和控制菌检查办法合用性实验,以确认所采用办法适合于该产品需氧菌、霉菌和酵母菌数测定和控制菌检查。
依照中华人民共和国药典,需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行办法合用性实验。
2、实验目和风险评估:验证目:确认所采用需氧菌、霉菌和酵母菌计数办法及控制菌检查办法适合我公司所生产产品微生物限度检查。
风险评估:3、验证内容:3.1、培养基来源:确认人:确认日期:3.2、检查用培养基配制办法:确认人:确认日期:3.3、使用仪器确认人:确认日期:3.4、验证明验用菌种:确认人:确认日期:3.5实验办法:取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。
需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
3.6菌液制备:3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,加入胰酪大豆胨液体培养基中置30~35℃培养箱中培养18~24h,取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 菌液,依法10倍稀释至10~7,分取各菌悬液1ml注入平皿中,及时倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取不大于100CFU/ml和1000CFU/ml菌液备用。
3.6.2取白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物,加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20~25℃培养箱中培养24~48h,取白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 菌液,依法10倍稀释至10~7,取菌悬液1ml注入平皿中,及时倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取不大于100CFU/ml和1000CFU/ml菌液备用。
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编码:VP-C01-MM-01 XXXX软膏微生物限度检查
方法学验证方案
起草人:年月日
审核人:年月日
年月日
年月日
批准人:年月日
目录
1.验证立项表
2.验证内容
2.1验证目的
2.2验证范围
2.3 验证要求
2.4 验证方法
2.4.1.试验原料、稀释剂和标准微生物
2.4.2细菌、霉菌及酵母菌验证内容
2.4.3 金黄色葡萄球菌验证内容
2.4.4铜绿假单胞菌验证内容
3. 验证报告
验证立项表(REC)
XXXX软膏微生物限度检查方法学验证方案
1.验证目的XXXX软膏配方中含水杨酸、硼酸,该两种物质具有一定的抑菌性。
根据《中国药典》(2005年版)微生物限度检查标准规定,对XXXX软膏进行细菌、霉菌及酵母菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检查方法的验证试验,以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
2.验证范围本公司XXXX软膏的微生物限度检测。
3.判定标准
3.1验证小组成员
3.2细菌、霉菌及酵母菌在3次平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率(稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率)应均不低于70%,试验组的菌回收率(试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率)均不低于70%;产品的试验组与阳性菌组的菌落数差异不超过30%,假定产品试验组的平均值与阳性菌组的平均值之比为Q,则0.7≤Q≤1.3。
3.3金黄色葡萄球菌在3次平行试验中,供试品组:结果应为阴性,未检出金黄色葡萄球菌;试验组:结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌;阴性对照组:结果应为阴性,未检出阴性对照菌;阳性对照组:结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌。
3.4铜绿假单胞菌在3次平行试验中,供试品组:结果应为阴性,未检出铜绿假单胞菌;试验组:结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌;阴性对照组:结果应为阴性,未检出阴性对照菌;阳性对照组:结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌。
4.验证方法
4.1.试验原料、稀释剂和标准微生物
4.1.1试验样品:XXXX软膏三批,批号为、、。
4.1.2稀释剂:PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
配法:照(05版药典附录XIII C)配制;
0.9%无菌氯化钠溶液的配制:取氯化钠9.0g,加1000ml使完全溶解,分装,灭菌。
4.1.3实验仪器:无菌培养皿(直径9.0cm)、净化室、灭菌锅、无菌刻度吸管(10ml、1ml),水浴锅,试管(18×180),具塞三角瓶。
4.1.4验证用培养基营养琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、溴化十六烷基三甲铵培养基、玫瑰红钠培养基。
4.1.5验证用微生物名称及编号
4.1.6菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中培养18~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中,培养24~48小时;上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
4.1.7供试品溶液的制备称取XXXX软膏10g,置灭菌三角瓶中,加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,45℃下使之全部溶化,摇匀,作为1:10的供试品溶液。
4.2细菌、霉菌及酵母菌验证内容
4.2.1试验组:分别取1:10供试品溶液0.2ml注入两个平皿,接种50-100个挑战微生物,每株试验菌平两行制备两个平皿(分别注入以上四种菌悬液),向平皿内倒冷却至45℃的营养琼脂培养基(细菌)或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(白色念珠菌霉)15~20ml:并混合均匀凝固后,置于所需温度下培养。
4.2. 2菌液组:不加供试液,直接将试验菌株接种于2个平皿中,其余操作步骤同样品试验组操作。
4.2.3供试品对照组:取1:10供试品溶液0.2ml分别注入两个平皿,向平皿内倒冷却到45℃的营养琼脂培养基(细菌)或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(白色念珠菌霉)15~20ml,并混合均匀凝固后,置于所需温度下培养。
4.2.4上述操作,应做三次平行试验,分别计算各次试验的菌的回收率。
试验组的菌回收率=[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100%。
4.2.5培养:营养琼脂培养基平皿倒置于30-35℃下培养48h,玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基倒置于23-27℃下培养72h。
4.2.6观察和计数:对每个平皿逐日检查计数,结果以培养终至的计数为准,并将每组试验中接有相同试验菌株的两个平皿计数进行平均,取平均值。
观察微生物的菌落形态并做革兰氏染色,以确认生长菌与接入的微生物相同。
4.2.7验证用微生物的稀释度和接种量
4.2.8试验结果
4.2.8.1品名:批号:
(供试品注入量:每皿注入0.2ml)
验证结果:
复核人:检验人:4.2.8.2品名:批号:
(供试品注入量:每皿注入0.2ml)
验证结果:
复核人:检验人:
4.2.8.3品名:批号:
(供试品注入量:每皿注入0.2ml)
验证结果:
复核人:检验人:
4.3铜绿假单胞菌验证内容
4.3.1供试品组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌胆盐乳糖培养基中,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,培养24小时,按中国药典2005版二部附录XJ微生物限度检查法中控制菌检查项下(铜绿假单胞菌)进行检查,结果应为阴性,未检出铜绿假单胞菌。
4.3.2试验组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌胆盐乳糖培养基中,加入铜绿假单胞菌对照菌液1ml,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,培养24小时,其余同供试品组。
结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌。
4.3.3阴性对照菌组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌胆盐乳糖培养基中,加入大肠埃希菌菌液1ml, 35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,培养24小时,其余同供试品组。
结果应为阴性,未检出大肠埃希菌。
4.3.4阳性对照菌组取铜绿假单胞菌对照菌液1ml加入100ml无菌胆盐乳糖培养基中,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,培养24小时,其余同供试品组。
结果应为阳性,检出铜绿假单胞菌。
4.3.5验证结果
4.3.
5.1品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:
4.3.
5.2品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:
4.3.
5.3品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:
4.4金黄色葡萄球菌验证内容
4.4.1供试品组供试品组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌营养肉汤培养基中,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,培养24~72小时,按中国药典2005版二部附录XJ微生物限度检查法中控制菌检查项下(金黄色葡萄球菌)进行检查,结果应为阴性,未检出金黄色葡萄球菌。
4.4.2试验组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌营养肉汤培养基中,加入金黄色葡萄球菌对照菌液1ml,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,培养24~72小时,其余同供试品组。
结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌。
4.4.3阴性对照组取1:10的供试品液10ml加入100ml无菌营养肉汤培养基中,加入大肠埃希菌对照菌液1ml,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,培养24~72小时,其余同供试品组。
结果应为阴性,未检出大肠埃希菌。
4.4.4阳性对照菌组取金黄色葡萄球菌对照菌液1ml加入100ml无菌营养肉汤培养基中,35-37℃培养24小时后取培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,培养24~72小时,其余同供试品组。
结果应为阳性,检出金黄色葡萄球菌。
4.4.5检验结果
4.4.
5.1品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:
4.4.
5.2品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:4.4.5.3品名:批号:
验证结果:
复核人:检验人:
验证报告(REC)。