大肠杆菌培养ppt课件

细菌分类
革兰氏阳性菌 对青霉素更为敏感。
细菌
金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌、链球菌等
革兰氏阴性菌 大肠杆菌（兼性厌氧型）
二、无菌技术
1.无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污 染的方法。
2.消毒与灭菌的区别 消毒：利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生 物的过程。
灭菌：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细 菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。
碳源
Baidu Nhomakorabea
凡能为微 生物提供 所需碳元 素的营养 物质
概念
来源
无机氮源：N2、 氨、铵盐、硝 酸盐等 有机氮源：尿 素、牛肉膏、 蛋白栋、氨基 酸等
最常用来源 作用
主要用于 合成蛋白 质、核酸 及含氮的 代谢产物
氮源
凡能为微 生物提供 所需氮元 素的营养 物质
铵盐、
硝酸盐
此外，还需要无机盐、水分和生长因子（如维生素等）
4、分离：划线分离法、涂布分离法
划线分离法（方法简单）：用接种环取振荡培养后的菌液， 只在菌液中蘸一次，在固体培养基平板上划线，由于划线 过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细 菌间距离加大，每个细菌细胞产生一个菌落。
若在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。 涂布分离法（单菌落更易分开，操作复杂）：需将培养的 菌液稀释，玻璃刮刀（灼烧灭菌），有20个以内的单菌落 为合适。
(2)灭菌的方法：
1、灼烧灭菌（接种环） 2、高压蒸汽灭菌： 1Kg/cm2 压力、 121 ℃下维持15min。 （灭菌锅或高压锅、 三角瓶） 3、过滤灭菌 （G6玻璃砂漏斗） 4、紫外线灭菌
1、培养基配制 灭菌：高压蒸汽灭菌：1Kg/cm2 压力、121 ℃下维持 15min 细菌培养基：蛋白胨和酵母提取物来配制，还有加入一 定量的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH:中性偏碱。 霉菌：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁，PH:中性 偏酸。 尿素（加热会分解）：用G6玻璃砂漏斗过滤，121 ℃下 用纸包灭菌
5.为什么在操作的第一步以及每次划线之前
6.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进 行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。 7.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么 总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要 少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌 的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终 能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
2.不同的微生物往往采用不同的培养基配方， 基本营养要素：水、碳源、和氮源、 无机盐营养物质， 还要考虑的因素？ PH、渗透压等
1、培养基的划分： 按照培养基的用途划分
种类 制备方法 用途 从众多微生 物中分离所 需的微生物 例子 加入青霉素分 离得到酵母菌 和霉菌
培养基中加 选择培养基 入某种化学 物质
将培养皿倒置，防止培养基水分散失，空气中杂菌沉降。
370C恒温培养箱中培养12~24h，观察菌落；
5、菌种的保存：在无菌下将单个菌落用接种环取出，再
用划线法接种在斜面上，370C培养24h，置于40C冰箱中保存
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用 来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶 的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
鉴别培养基
培养基中加入 鉴别不同种 伊红－美蓝培 某种指示剂或 类的微生物 养基可鉴别大 肠杆菌 化学药品
2.微生物需要的五大类营养（主要是碳源和氮源）
概念 来源
无机碳源： CO2NaHCO3等 有机碳源： 糖类脂肪酸、 花生粉饼、 石油等
最常用来 源
糖类、 尤其是 葡萄糖
作用
1、主要用于 构成微生物 的细胞物质 和一些代谢 产物 2、异养微生 物的营养物质
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种 环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数 目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧 接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避 免细菌污染环境和感染操作者。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养 基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗？为什么？
培养基分装到各三角瓶、试管和培养皿等不能沾到培养 基，否则容易发生污染
实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸 水后容易引起污染
2、倒平板
将灭菌后冷却到600C的LB固体培养基，在酒精灯 火焰旁倒入灭菌过的培养皿中，制备培养基平板 3、微生物接种 将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中在酒精 灯火焰旁操作，接种前先冷却。在370C，每分钟 200转的摇床中振荡培养12h 接种环：灼烧灭菌
大肠杆菌培养
实验1大肠杆菌的培养和分离
锁定：（1）培养基的配比与制作 （2）无菌技术 （3）接种之平板划线操作 （4）菌落观察

一、基础知识：
（二）培养基 1.培养基的类型和用途
（1）按物理状态分： 固体培养基、液体培养基、半固体培养基。 其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、 活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的运动， 液体培养基常用于发酵工业。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。