试验八巴氏小体

两种方法的比较

直接涂片法操作简单，但口腔上皮细胞不易 分散，细胞常重叠，而且标本上涂大量细胞 才能满足计数的需要。 滴片法稍繁琐，离心收集细胞较难，但细胞 分散均匀，细胞经低渗后核膜膨胀，巴氏小 体增大，利于辨认。

细胞的理想状态：
⑴核质是网状或细颗粒状分布。
⑵核膜清晰，核无缺损。
⑶染色适度。 ⑷周围无杂菌。
巴氏小体的辨认标准：
选定的细胞，在高倍镜或油镜下进一步观察。 巴氏小体的形态表现为一结构致密浓染小体，轮 廓清楚，常附着于核膜边缘或靠近内侧。
七、作业：
1.分别观察50个男、女性可数的细胞，计算各 自的巴氏小体细胞所占的百分比。 2.在观察中画出 2～ 3个典型细胞，标明巴氏小体 的部位。
思考题：
二、实验原理
性别分化
XX染色体
胚胎发育早期未分化的性腺是中性的。
外部皮质 性 腺 内部髓质
XY染色体
发育为雌性生 殖腺（卵巢） 发育为雄性生 殖腺（睾丸）
XXY型染色体，皮质、髓质同时发育。
哺乳动物的雌性细胞有两条X染色体，其中一条 来自母方，另一条来自父方，在胚胎发育的早期（ 16 天），这两条X染色体中的一条随机浓缩形成巴氏小体， （袋鼠例外：总是来自父方的x染色体失活）。
巴氏小体的研究历史
1949年 加拿大学者Barr在雌猫神经原细胞核 中发现。 1955年Barr在女性口腔细胞中发现Barr body。 1959年人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏 小体的研究联系起来。 1971年Barr body被命名为x染色质。

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最新研究进展
食管癌病人巴氏小体出现率低于10％； 正常人细胞出现率为20－45％。
主要内容
一 二 三 四 五 六 七

实验目的 实验原理 （掌握） 实验材料 实验仪器及用具 药品和试剂 实验步骤 （理解） 作业
一、 实验目的
1 通过实验学会巴氏小体检查方法，掌握观察与 鉴别X染色质的简易方法； 2 了解人类男女性别性染色体的功能差异；并为 了解人体染色体的畸变与疾病提供参考条件 .
体细胞间期Barr是小体的检查
巴氏小体的临床意义有哪些？
临床意义在于： 1 胎儿性别鉴定：从胎儿羊水中取得脱落的细 胞检查，如有巴氏小体，胎儿为女性，如果 细胞中无巴氏小体，胎儿为男性。 2 成人性别鉴定：变性男运动员参加女子项目，可通 过检查其白细胞中有无巴氏小体而确定其性别。 3 性别畸形的判断：是否缺失或者多出巴氏小体。
三、实验材料
男、女性口腔颊部粘膜细胞。
四、实验仪器及用具
显微镜、载玻片、盖玻片、牙签，离心管
五、药品和试剂
Giemsa染液，固定液， 5 mol/L HCl，低渗液
六、实验步骤
（一）直接涂片法： （每组2-3张女生口腔细胞涂片,1张男生口腔细胞涂片。） 1 涂片：受检者用自来水漱口，用牙签轻轻刮取口腔上皮细胞（腮 帮子处），将刮取物均匀涂布于载玻片上，晾干。
实验九 人类巴氏小体的观察
什么是巴氏小体？
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指 雌性哺乳动物体细胞间期，一块染色很深的染 色质。巴氏小体实际上是浓缩了的X染色体，其 上的基因基本不转录。
巴氏小体位于细胞中的什么位置？
在细胞内的位置：核膜边缘或靠近内侧 形状：半圆形、三角形、卵形、短棒 形及双球形 大小：直径约为1微米

Lyon假说【重点】
1) 2) 3) 4)
雌性动物体细胞X染色体只有一条是有活性个的，那 么雌雄个体X染色体上的基因效果相当 X染色体的失活是随机的，即雌性动物的染色体角度 看是嵌合体 失活发生在胚胎发育的早期，已失活细胞分裂产生 的细胞群遗传结构相同。 雌性动物伴性基因的作用产生嵌合体
性 染 色 体 模 式 【 了 解 】
红色字体为注意事项！！！
2 固定：将涂片放入95％的乙醇中固定30 min，取出晾干。
3 水解：将涂片放入5 mol HCl中室温下水解10min，自来水缓缓冲 洗。
4 染色：用Gimsa染液染色8-10分钟，勿干燥，用水冲洗后晾干镜检。 5 镜检：从低倍镜到高倍镜依次观察。
漱 口
取 样 步 骤
刮取 涂布 晾干 固定
一个巴氏小体 一条能转录的X染色体
雌性哺乳动 物的体细胞
雄性哺乳动 物的体细胞
一条能转录的X染色体 一条能转录的Y染色体
雌性体细胞中1条X染色体为何失 活而凝缩成巴氏小体？

从X、Y染色体自身的特点来考虑……
理论解释
基因的剂量补偿效应【重点】

雌性xx两条染色体上基因 剂量有2份，失活1份，使x连 锁性状的表现在雌雄个体间无 差异。 在失活的x染色体上x染色 质并不缺失，其上的某些基因 如xg血型基因、类固醇硫酸酯 基因并不失活。
（二）滴片法： 1取材：受检者用自来水漱口，用牙签轻轻刮取口腔上 皮细胞，将刮取物涮于装有1ml生理盐水的离心 管中。 2离心：离心10分钟（5000转/分），弃上清液。 3低渗：加1ml低渗液混匀，37度低渗6分钟，离心10分 钟，弃上清液。 4固定：加固定液95％的乙醇1ml，室温固定10分钟，离心， 弃上清。 5滴片：加200ul固定液与沉淀物混成细胞悬液，用滴管 吸取细胞悬液，滴于洁净载玻片上，晾干。 6水解：5mol HCl水解10分钟。自来水冲洗。 7染色：Giemsa染色8分钟，冲去染液，干后镜检。
1 男性没有巴氏小体的理论基础。 2 男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？ 3 性别畸形的染色体模式可能有几种？
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课程目录

实验一 植物种子萌发和根尖取材固定 实验二 植物染色体制片及有丝分裂的观察 实验三 减数分裂制片技术及蝗虫精巢细胞显微观察 实验四 果蝇培养、麻醉及雌雄鉴别 实验五 果蝇唾腺染色体制备 实验六 果蝇单因子杂交/伴性遗传 实验七 染色体组型分析 实验八 果蝇基因组DNA提取 实验九 人类巴氏小体的观察 实验十 果蝇单因子杂交/伴性遗传数据分析 实验十一 Hardy-Weinberg遗传平衡定律的检验 实验十二 人类性状特征的遗传分析