羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

合集下载

小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA Kit实验说明书

小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA Kit实验说明书
小鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫试剂盒 使用说明书
【产品编号】CSB-E08839m
【预期应用】ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、组织裂解液中 Hyp 含量。
【产品性能指标】
1、 检测范围:7.8 ng/ml-500 ng/ml
2、 灵敏度:1.95 ng/ml
3、 精密度:批内差 CV%<8%,批间差 CV%<10%
3、 生物素标记抗体工作液 生物素标记抗体液按 1:100倍用生物素标记抗体稀释液进行稀释。如 10μl生物素标记抗体加
990μl生物素标记抗体稀释液,轻轻混匀,在临用前10分钟内配妥。
4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液 辣根过氧化物酶标记亲和素 按 1:100 倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。 如
溶液后每隔一段时间观察一下显色情况以控制反应时间(比如每隔 10 分钟)。当肉眼可
见标准品前 3-4 孔有明显梯度蓝色,后 3-4 孔显色不明显时,即可加入终止液终止反应,
此时蓝色立刻变为黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
7、 底物溶液应为浅蓝色或无色,如果颜色严重变深则必须弃用。底物溶液易受污染,请避
辣根过氧化物酶标记亲和素
生物素标记抗体稀释液
有效期内2-8℃条件下最多可保存一个月。
辣根过氧化物酶标记亲和素
稀释液
样本稀释液
浓洗涤液
底物溶液
终止液
【所需试剂和器材】
标准规格酶标仪;高速离心机;电热恒温培养箱;干净的试管和离心管;容量瓶;
系列可调节移液器及吸头;多通道移液器;蒸馏水 等
【样本采集及保存】
如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4、 温育:为防止样本蒸发或污染,温育过程中酶标板必须覆上板贴,实验过程中酶标板应

人羟脯氨酸Hyp酶联免疫分析

人羟脯氨酸Hyp酶联免疫分析

人羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:96T2μg/L -48μg/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中羟脯氨酸(Hyp)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人羟脯氨酸(Hyp)水平。

用纯化的人羟脯氨酸(Hyp)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入羟脯氨酸(Hyp),再与HRP标记的羟脯氨酸(Hyp)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的羟脯氨酸(Hyp)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人羟脯氨酸(Hyp)浓度。

标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

脯氨酸含量检测试剂盒说明书

脯氨酸含量检测试剂盒说明书

脯氨酸(Pro )含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

货号:BC0290规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体45 mL×1瓶(自备)4℃保存试剂二液体45 mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制:1.试剂一:自备冰乙酸。

2.标准品:脯氨酸10 mg ,临用前加入1 mL 蒸馏水,配成10 mg/mL 标准品。

产品说明:脯氨酸(Pro )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro 含量显著增加。

Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸(SA )提取Pro ,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色,在520nm 测定吸光度。

技术指标:最低检出限:0.1791 μg/mL 线性范围:0.5-40 μg/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器及用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、细胞、细菌或组织样本的制备:细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min ;10000g ,常温离心10min ,取上清,冷却后待测。

组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法

羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法

羟自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1320规格:50T/48S 产品内容:提取液:液体55mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体0.16mL×1瓶,4℃避光保存。

临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀,也可按比例现用现配,配好的试剂4℃保存一周。

产品说明:羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。

它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化,遭受氧化性损伤和破坏,导致细胞坏死或突变。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基,将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+,导致536nm 的吸光度下降,样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品:可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤:一、样品的制备(1)组织样品的制备:称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液进行冰浴匀浆;10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

(2)血清、果汁等液体样品可直接测定。

(3)提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5mg/mL。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上,调节波长至536nm,蒸馏水调零。

2、操作表:在1.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一(mL)0.150.150.15试剂二(mL)0.30.30.3试剂三(mL)0.30.30.3充分混匀,防止颜色不均一。

样品(mL)--0.15试剂四(mL)-0.150.15HO(mL)0.750.600.452混匀后37℃孵育60min。

HYP 测定法

HYP 测定法

HYP 测定法1.原理试样在6M的盐酸溶液中水解,释放出羟脯氨酸。

经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。

用高氯酸破坏过量的氯胺T。

羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。

2.试剂配制(1).醋酸/柠檬酸缓冲液(pH6)醋酸钠57g柠檬酸钠37.5g柠檬酸 5.5g异丙醇385ml 定容至1L称取醋酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸,溶解于蒸馏水中,再加入异丙醇,混合均匀,用精密pH计调pH=6.0,定容至1L(2).氯胺T溶液7% 50ml(3).Ehriche 试剂P-二甲胺-笨甲醛100g60%高氯酸150ml称取对二甲氨基苯甲醛,将其溶解于高氯酸中,贮存于棕色瓶中(4). A液:氯胺T 7% 1mlbuffer 4mlB液:Ehriche试剂 6ml异丙醇 26ml3.样品处理以1:5的比例将鱼鳞胶原(浓度约3-4mg/ml)用6M HCl稀释,混合均匀后,用针筒取3ml稀释液于安剖瓶中,将安剖瓶用酒精喷灯封口,在110℃下处理24h左右。

待水解完全后,将水解液全部转移到旋转蒸发瓶中,用旋转蒸发器抽真空蒸馏,水浴温度设为60℃。

蒸发后瓶内固体完全转移到25ml容量瓶中,用缓冲液(pH=6.0)定容,待用。

4.操作步骤取试样液300μl,加入600μl异丙醇,搅拌均匀后加入300μl A液,搅拌均匀静置4min,然后加入4ml B液,搅拌均匀。

在60℃水浴中显色25min,冷却2min,用紫外可见分光光度计在558nm处测吸光度。

5.数据处理分别测定吸光度并按标准曲线方程计算羟脯氨酸质量浓度,乘以稀释倍数和体积后得到样品中的羟脯氨酸含量,最后再乘以胶原与羟脯氨酸之间的换算系数(依据氨基酸分析结果),得到样品中的胶原含量。

6.羟脯氨酸标准曲线。

绵羊羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

绵羊羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

绵羊羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆、组织等样本中羟脯氨酸(Hyp)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊羟脯氨酸(Hyp)水平。

用纯化的绵羊羟脯氨酸(Hyp)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入绵羊羟脯氨酸(Hyp),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的绵羊羟脯氨酸(Hyp)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中绵羊羟脯氨酸(Hyp)含量。

试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。

加入一定量的PBS,PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

羟基脯氨酸说明书

羟基脯氨酸说明书

羟基脯氨酸说明书一、产品概述羟基脯氨酸是一种重要的氨基酸补充剂,能够帮助促进身体的蛋白质合成和细胞再生,提高肌肉恢复和生长能力。

本说明书将详细介绍羟基脯氨酸的成分、用途、剂型、剂量和注意事项,以帮助用户正确使用本产品。

二、产品成分羟基脯氨酸主要成分包括羟基脯氨酸粉末、辅料(如胶囊、溶剂等),其中羟基脯氨酸粉末含量符合产品标签上所示。

三、产品用途羟基脯氨酸是一种重要的营养补充品,适用于以下情况:1. 体育锻炼者:可促进肌肉恢复,提高训练效果;2. 肌肉疲劳者:可缓解肌肉酸痛和疲劳感;3. 需要增加蛋白质摄入量的人群:可帮助补充蛋白质,促进身体健康;4. 需要维持肌肉质量的老年人:可减少肌肉流失,提高肌肉功能。

四、产品剂型及规格羟基脯氨酸目前主要有片剂、胶囊和粉剂等剂型。

不同剂型的羟基脯氨酸含量、包装规格和用法用量各有差异,请用户按照产品标签和说明书上的指导服用。

五、产品剂量羟基脯氨酸的剂量应根据个人情况而定,建议在医师或专业营养师的指导下使用。

一般情况下,推荐的剂量为每天1-3次,每次剂量为500-2000毫克。

具体剂量应根据个体身体状况、饮食习惯和运动强度等因素进行调整。

六、产品禁忌1. 对羟基脯氨酸过敏者禁用本产品;2. 未满18周岁的儿童禁用本产品;3. 孕妇、哺乳期妇女和正在怀孕计划的女性慎用;4. 有严重肾脏疾病的患者慎用或遵医嘱使用。

七、产品储存1. 请将羟基脯氨酸产品放置于阴凉干燥处,避免阳光直射;2. 请保持原包装完好,避免受潮;3. 请将产品放置于儿童难以触及的地方。

八、产品注意事项1. 请严格按照产品标签和说明书上的剂量和使用方法使用本产品;2. 请咨询专业医生或营养师的指导以了解个人适宜的剂量和使用频率;3. 本产品不能替代正常饮食,不可过量使用或长期使用;4. 使用过程中如有不适,请及时停用并就医;5. 请勿将本产品与其他保健品或药物混合使用,以免产生不良反应。

九、产品效果及副作用羟基脯氨酸作为氨基酸补充剂,能够帮助促进身体的蛋白质合成,提高肌肉恢复和生长能力,但效果因个人差异而异。

羟脯氨酸

羟脯氨酸

一种新型优化的肝组织羟脯氨酸含量测定方法的建立修贺明郭争荣徐铮【摘要】目的:建立一种可信度、敏感度高,适合于微量组织羟脯氨酸含量的测定方法―胃酶酸解法。

方法:在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛(PDAB)一定的条件下,对胃酶法和传统盐酸水解法进行了比较。

结果:在相同条件下,传统方法测得HYP含量为0.045ug/ml-1.547ug/ml,平均0.7789ug/ml;胃酶酸解法测得羟脯氨酸含量为2.955ug/ml-4.500ug/ml,平均为3.921ug/ml,两者比较有显著性差异(P<0.01)。

结论:胃酶酸解法的可信度、敏感度均优于传统方法,其更适合于微量组织羟脯氨酸的测定。

关键词:羟脯氨酸胃酶酸解法【abstract】objective:羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)是一种非必需氨基酸,是机体胶原蛋白的主要成份之一,几乎所有的HYP都存在于胶原中,被认为是胶原中的特征性氨基酸。

因此,HYP含量的测定已成为衡量机体胶原含量的一个重要指标,寻求一种合理、优化的HYP含量的测定方法已成为众多学者关注的焦点。

目前,人们对传统的HYP含量的测定方法-盐酸水解法已达成了共识,但是传统方法对组织要求量比较大,水解不够彻底等缺点限制了其广泛应用。

近年来大批的学者对HYP的测定条件进行了多方面、多层次、多途径的研究,同时也深入的探讨了不同测定方法,虽然在时间、试剂用量、所需器材等方面有了很大的改进,但对其测定方法的研究欠少,仍未能找到一种方便、快捷、可靠性高的测定方法。

笔者对HYP含量测定方法进行了仔细的研究,针对传统方法的缺点对传统方法进行了改进,在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛(PDAB)一定的条件下,对两种方法进行了比较,探索出一条更为先进、更为稳定可靠的HYP 检测方法。

现报道如下:一,材料及其方法1,主要实验材料1.1 羟脯氨酸标准品北京鼎国生物技术发展中心1.2 酶标仪美国VERSAmax1.3 微量电子天平瑞士METTLer AE2601.4 对二氨基苯甲醛天津市博迪化工有限公司1.5 氯胺-T 天津市精细化工研究所2,试剂配制2.1 标准HYP储存液(1mg/ml):称取100mgHYP标准品,用0.1mol/l盐酸溶解并定容至100ml,置棕色瓶于4℃保存。

分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量

分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量
李庆春等[6]利用有机溶剂提取芒果的香味成分, 利 用 GC- MS 分 析 后 仅 检 测 到 异 松 油 烯 、γ- 羟 基 辛 酸 内 酯、3, 7- 二甲基- 1, 3, 6- 辛三烯、石竹烯等十几种香味 成分, 其原因可能是直接用溶剂提取的效率较低, 而本 文利用的同时蒸馏萃取仪对植物中的挥发性成分的提 取 效 果 较 好[7]。
Abstr act: Hydroxyproline( Hyp) content in fish skins was determined by the spectrophotometric method. Spec- trophotometric method has high veracity and precision. The Hyp contents of squid skin and chum salmon skin were 0.823 % and 2.247 %, respectively. The average recovery rates and the CV of Hyp from squid skin and chum salmon skin were 98.47 % and 98.39 %, and 1.65 % and 0.64 %, respectively. This method can be used as a reliable quantitative method of the collagen in fish skins. Key wor ds: fish skin; hydroxyproline; spectrophotometric method
作者简介: 郭恒斌( 1981- ) , 男( 汉) , 硕士, 研究方向: 水产品加工及贮藏工程。

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4466

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4466

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4466规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶(自备)常温保存试剂一液体15mL×1瓶4℃保存试剂二液体15mL×1瓶4℃保存标准液液体1mL×1支4℃保存溶液的配制:1.提取液:自备6mol/L盐酸。

6mol/L盐酸的配制:浓盐酸(37%)和H2O的体积比是1:1。

2.标准液:0.5mg/mL羟脯氨酸标准液。

产品说明:HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样本经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。

通过测定样本水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。

技术指标:最低检出限:0.051μg/mL线性范围:0.117-7.5μg/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:天平、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、组织:称取约0.2g样本于玻璃管,将组织尽量剪碎以便消化,盖子稍松不密闭。

加入2mL的提取液,煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块,冷却后用10mol/L NaOH(约1mL)调节pH值至6-8范围内(不可过酸或过碱),再蒸馏水定容至4mL。

最后16000rpm,25℃,离心20min(若离心后仍有杂质,可通过过滤去除),取上清待测。

(过程中可能有黑色物质生成,若长时间不能消化,可能为碳化的物质,不影响实验)2.细胞:取500万个细胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至透明状,冷却后用10mol/L NaOH(约0.5mL)调节pH值至6-8范围内(不可过酸或过碱),蒸馏水定容至2mL,16000rpm,25℃,离心20min,取上清待测。

羟脯氨酸测定原理

羟脯氨酸测定原理

羟脯氨酸测定原理羟脯氨酸(Hydroxyproline)是一种非常重要的氨基酸,在胶原蛋白中占有重要地位。

羟脯氨酸的含量可以作为评估胶原蛋白合成和降解的指标,因此,羟脯氨酸的测定具有重要的临床意义。

本文将介绍羟脯氨酸测定的原理及其应用。

羟脯氨酸的测定原理主要基于其与酚类物质反应生成紫色化合物的特性。

一般情况下,羟脯氨酸的测定方法主要有两种:色素法和高效液相色谱法。

色素法是羟脯氨酸测定的常用方法之一。

其原理是在碱性条件下,羟脯氨酸与酚类试剂发生缩合反应,生成有色产物。

这种反应是一种氧化还原反应,需要存在氧化剂的存在,常用的氧化剂有次氯酸钠和过氧化氢。

在碱性条件下,羟脯氨酸与酚类试剂发生缩合反应,生成的产物可以通过分光光度计测定其吸光度,从而计算出羟脯氨酸的含量。

高效液相色谱法是羟脯氨酸测定的另一种常用方法。

该方法利用高效液相色谱仪对样品进行分析。

在该方法中,首先将样品中的羟脯氨酸与特定的试剂进行反应,生成具有荧光的产物。

然后,将反应产物注入高效液相色谱仪中进行分离和检测。

通过测定峰面积或峰高的方式,可以计算出羟脯氨酸的含量。

羟脯氨酸的测定方法在临床和科研领域有着广泛的应用。

在临床上,羟脯氨酸的测定可以用于评估胶原蛋白合成的情况,对于一些与胶原蛋白代谢相关的疾病的诊断和治疗具有重要意义。

此外,羟脯氨酸的测定方法还可以用于评估食物中胶原蛋白的含量,对于食品安全和质量控制也有一定的应用价值。

在科研领域,羟脯氨酸的测定方法可以用于胶原蛋白的合成和降解研究。

通过测定羟脯氨酸的含量,可以评估胶原蛋白的合成速率和降解速率,进而研究胶原蛋白的代谢机制。

此外,羟脯氨酸的测定方法还可以用于评估某些药物对胶原蛋白合成和降解的影响,为新药的研发提供参考依据。

总结起来,羟脯氨酸是一种重要的氨基酸,在胶原蛋白代谢中起着关键作用。

羟脯氨酸的测定可以通过色素法和高效液相色谱法等方法进行。

这些方法不仅在临床上有着重要的应用价值,还在科研领域中发挥着关键作用。

尿羟脯氨酸(HYP)

 尿羟脯氨酸(HYP)

尿羟脯氨酸(HYP)尿羟脯氨酸(HYP)介绍:尿羟脯氨酸既能反映骨吸收,又能反映骨形成,它的排出量受到诸多的激素的影响,如甲状腺激素、生长激素、肾上腺皮质激素、性激素等。

尿羟脯氨酸排出量增加的可见于儿童生长期、骨破坏性疾病(如甲状腺功能亢进、骨转移癌)、骨矿化不良疾病(如软骨病、佝偻病、高转换型骨质疏松症、畸形性骨炎)等。

尿羟脯氨酸随着年龄增加有减少的趋势,但尿羟脯氨酸与肌酐的比值却随着年龄的增长而增加。

羟脯氨酸是人体结缔组织中胶原蛋白质的主要成分,约占胶原蛋白的10%~13%。

尿中的羟脯氨酸50%来自骨组织。

因此,尿羟脯氨酸排出量能基本反映骨代谢的变化,特别是与骨吸收率有显著关系。

尿羟脯氨酸(HYP)正常值:24小时尿羟脯氨酸排出量测定可随年龄的不同而有所差异:1~5岁: 150~496μmol/24h (20~65mg/24h)。

6~10岁: 270~755μmol/24h (35~99mg/24h)。

11~17岁:480~1370μmol/24h (63~180mg/24h)。

18~21岁:150~420μmol/24h (20~55mg/24h)。

>21岁: 114~330μmol/24h (15~43mg/24h)。

HYP/Cr的正常值为:0.06~0.016。

尿羟脯氨酸(HYP)临床意义:异常结果:升高:甲状旁腺功能亢进症、甲状腺功能亢进症、肢端肥大症、Paget综合征(畸形性骨炎)、骨软化症、转移性骨瘤、Marfan综合征、硬皮病、皮肌炎、进行性肌营养不良、重度烧伤、产后(子宫收缩期)、儿童生长期等。

需要检测的人群:甲亢,皮肤炎,营养不良,严重烧伤的人尿羟脯氨酸(HYP)注意事项:检查前:禁止剧烈运动,保持良好的饮食和作息检查时:即先排出一部分尿弃去,以冲掉留在尿道口及前尿道的细菌,然后将中段尿留取送检。

尿羟脯氨酸(HYP)检查过程:临床常用测量方法有24小尿羟脯氨酸与空腹2小时尿羟脯氨酸,以及尿羟脯氨酸与肌酐比值。

羟脯氨酸(HYP)检测

羟脯氨酸(HYP)检测

羟脯氨酸(HYP)检测
羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)是亚氨基酸之一,是一种非必需氨基酸,是胶原组织的主要成分之一,且为胶原中特有的氨基酸。

利用羟脯氨酸在胶原蛋
白中含量最高这一特点,通过血液和尿液对羟脯氨酸的测定,可了解体内胶原
蛋白分解代谢情况,即可作为结缔组织分解情况指标。

此外,测定羟脯氨酸也
是了解骨吸收、骨代谢情况的指标。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法,可高效、精准的检测羟脯氨酸的含量变化。

此外,我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务,以满足您的不同需求。

HPLC和LC-MS测定羟脯氨酸样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期:2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报
告包括:
1. 实验步骤(中英文)
2. 相关质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 羟脯氨酸含量信息
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案,具体可免费咨询技术支持。

LC-MS氨基酸测定项目样本报告,点击查看>。

羟脯氨酸

羟脯氨酸

目前有一类研究较多的离子液体以咪哇离子为阳离子, 卤素离子或其它无机酸离子为阴离子的离子液体。
常见的四类离子液体
离子液体的优点:
1.离子液体是较为理想的绿色物质,可循环利用且不污染环境; 2.离子液体的溶解能力有很高的选择性,用水做萃取剂只使
用于水溶性好的物质,对于那些水溶性不好的物质就可以 选择离子液体作为萃取剂,可以提供非水环境;
3.离子液体的蒸气压接近于零、热稳定性相当好、粘度又非 常的高具有良好的导电性、高的离子移 动率;
6.离子液体是一种良好的溶剂,还有催化剂的作用。
由于有机溶剂的易挥发并且回收困难限制了其
使用。离子液体由于其优良的性能在有机合成、天 然产物的提取等领域得到了广泛的应用, 采用离子 液体分离富集无污染, 可回收, 分离富集效率高.
微乳液
微乳液是一类具有各向同性、清澈透明或半透明,粒 径在8 ~ 80mm之间,热力学稳定的油—水—乳化剂的分 散体系.
微乳液通常由表面活性剂、助表面活性剂、油、水 等组分在适当条件下自发形成,外观透明,低粘度,为热力 学稳定体系.
微乳液的结构有三种:水包油型(O/W),油包水型(W/O) 和油、水双连续型.
羟脯氨酸的简介
羟脯氨酸(Hydroxyproline, Hyp) 分子式为C5H9NO3,是胶原 蛋白所特有的氨基酸,在正常胶 原蛋白中含量约13.4%,在弹性 蛋白中含量极少,而在其他蛋白 中则不存在。
检测方法
目前羟脯氨酸测定方法有:比色法、高效液相色谱法、 氨基酸分析仪法、电泳法。
主要方法:光度法因其设备简单,操作方便而应用较 广,但传统的光度法不足之处是灵敏度不够高,因此 ,寻找一种高灵敏的光度测定方法很有必要。基于这 点,我们查阅大量光度法增敏测定其他物质的研究论 文,力求寻找到能增敏光度法测羟脯氨酸的体系。

羟脯氨酸含量的测定方法优化

羟脯氨酸含量的测定方法优化

羟脯氨酸含量的测定方法优化
魏东;陈文慧
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2005(014)018
【摘要】羟脯氨酸(hydroxyprolinc,HYP)是胶原蛋白所持有的氨基酸,测定HYP含量可明确胶原总体水平,评定纤维化病变程度。

氯胺T法是传统的经典HYP测定方法,其基本原理是:先把含有HYP多呔的组织或血清、腹水、尿液等水解成游离的HYP,游离的HYP再被氧化,与对-二甲氨基苯甲醛(PDAB)在一定温度下发生反应成红色的吡咯化合物,最后通过分光光度计比色,或其他的方法检测出水解液中HYP的含量。

【总页数】2页(P2479-2480)
【作者】魏东;陈文慧
【作者单位】云南中医学院,云南,昆明,650200;云南中医学院,云南,昆明,650200【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.UPLC-MS/MS法测定乳品中L-羟脯氨酸的含量 [J], 黄蓓蓓
2.柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量[J], 王旭波;徐利丽;郑洁;李楠;沈玉萍;王智;韦波;杨欢
3.市售蔬菜亚硝酸盐含量的测定方法优化和在不同温度储存过程中亚硝酸盐含量的变化 [J], 温睿
4.小鼠肺组织羟脯氨酸含量测定的实验方法优化 [J], 陈以文; 盛春瑞; 刘珊珊; 宗晨钟; 董瑞娟; 葛东宇; 王淑艳; 李丽娜
5.生乳中L-羟脯氨酸含量测定的不确定度评定 [J], 李均;卢琳;魏磊
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

小鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒说明书

小鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒说明书

小鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号:E0621m3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸标本的采集及保存1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

4. 组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20ml PBS中于-20℃放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。

注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。

实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。

每孔加检测溶液A工作液100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

CellBiolabs羟脯氨酸检测试剂盒分析原理

CellBiolabs羟脯氨酸检测试剂盒分析原理

CellBiolabs羟脯氨酸检测试剂盒分析原理羟脯氨酸是一种由不可逆的翻译后酶合成的氨基酸脯氨酸经脯氨酰羟化酶羟化。

羟脯氨酸几乎只存在于细胞中蛋白质胶原蛋白,位于重复三肽Gly-X-Y的Y位置。

通过允许胶原蛋白螺旋,羟脯氨酸有助于稳定胶原蛋白的结构。

除了胶原蛋白,在转录因子缺氧诱导因子(HIF1)上观察到脯氨酸的羟基化。

在正常氧气条件下,蛋白质EGLN1在脯氨酸564处羟基化HIF-1α,允许von Hippel-Lindau肿瘤抑制因子(pVHL)泛素化并导致靶向性通过蛋白酶体降解HIF-1。

由于羟脯氨酸仅存在于胶原蛋白以外的少数蛋白质中,因此羟脯氨酸已被用作量化胶原蛋白和/或明胶水平的标志物(部分胶原蛋白水解产生蛋白质和肽的混合物)。

据估计羟脯氨酸占胶原蛋白的13.5%。

此外,还使用了羟脯氨酸测量确定某些涉及胶原蛋白分解的疾病。

例如,增加了在佩吉特骨病患者的血清中测定了胶原蛋白。

此外,羟脯氨酸增加该水平与前列腺癌、骨转移、肝纤维化以及前列腺癌相关三聚氰胺和三聚氰酸引起肾毒性。

Cell Biolabs/羟脯氨酸检测试剂盒为检测提供了一种方便的比色方法从组织、血浆、血清或尿液酸水解物中提取总羟脯氨酸。

首先是未知将样品或羟脯氨酸标准加入96孔板中。

然后,加入氯胺T混合物添加以将羟脯氨酸转化为吡咯。

最后,4-(二甲氨基)苯甲醛(DMAB)将混合物(也被称为埃利希试剂)添加到与吡咯反应的孔中,以使其反应产生生色团(下图),并在540-560 nm处读取板的吸光度。

内容通过与预定值进行比较,确定未知样品中羟脯氨酸的含量羟脯氨酸标准曲线。

提供的试剂足以评估96次分析包括标准品和未知样品。

(分析原理)1. STA-670: Homocysteine ELISA Kit2. STA-671: S-Adenosylhomocysteine (SAH) ELISA Kit3. STA-672: S-Adenosylmethionine (SAM) ELISA Kit4. STA-674: Glutamate Assay Kit。

原料中羟脯氨酸含量的测定

原料中羟脯氨酸含量的测定

原料中羟脯氨酸含量的测定1.材料和试剂1.1材料秦宝雪花牛牛蹄筋:陕西秦宝牧业有限责任公司。

秦宝普通育肥牛、雪花牛肺:陕西秦宝牧业有限责任公司。

秦宝雪花牛棒骨:陕西秦宝牧业有限责任公司。

1.2试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或去离子水,或相同浓度的水。

1.2.1硫酸溶液[c(H2SO4)≈3mol/L]量取750mL水于2L的容量瓶中,在搅拌下缓慢加入320mL浓硫酸(ρ20=1.84g/mL)。

冷却至室温后用水定容。

1.2.3缓冲溶液(PH=6.8)包括下列组分:a)26.0g一水柠檬酸(C6H8O7·H2O);b)14.0g氢氧化钠;c)78.0g无水乙酸钠[Na(CH3CO2)]。

用500mL水溶解上述试剂并转入1L的容量瓶中,加入250mL 正丙醇,用水定容。

该溶液于4℃暗处可稳定保存几周。

1.2.4氯胺T溶液称取1.41g三水·N-氯-对甲苯磺酰胺钠盐(氯胺T),用100mL 缓冲溶液溶解。

临用前配制。

1.2.5显色剂称取10.0g对甲氨基苯甲醛,用30mL高氯酸溶液[70%(质量分数)]溶解,缓慢加入65mL异丙醇。

临用前配制。

1.3羟脯氨酸标准溶液1.3.1标准储备液称取50mg4-羟基-α-吡咯甲酸(羟脯氨酸)于100mL容量瓶中,用水溶解,加一滴硫酸溶液(1.2.1),用水定容。

该溶液于4℃下可稳定存放1个月。

1.3.2标准工作液移取5.00mL上述标准储备液至500mL容量瓶中,用水定容。

分别吸取该溶液10.00mL、20.00mL、30.00mL、40.00mL于100mL容量瓶中,用水定容,所得标准工作液浓度一次为0.5µg/mL、1.0µg/mL、1.5µg/mL、2.0µg/mL。

临用前配制。

2.仪器和设备3.试样制备用刀将原料在冷冻时(0℃以下)切成小块(约0.5cm3,边长约为8mm)。

将切好的试样装入密封样品盒中,或用耐热塑料袋真空包装,70℃以上保温30min后,冷却。

脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4460

脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4460

脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4460可见分光光度法规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60mL×1瓶4℃保存提取液二液体0.6mL×1支4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制:1、试剂二:临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;2、试剂三:临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;3、试剂四:临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂可分装-20℃保存,避免反复冻融。

4、工作液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液,临用前根据用量按照试剂一(V):试剂二(V):试剂三(V)=1.6(mL):0.2(mL):0.15(mL)的比例充分混匀。

(注意:现配现用,用多少配多少)产品说明:ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。

降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的下降,测定2,6-DCPIP的还原速度,代表ProDH 活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、组织:按照组织质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL 提取液一),进行冰浴匀浆,1500g4℃离心15min,取上清液于一支新的EP管中,加入10μL提取液二,涡旋混匀,冰浴放置30min后,15000g4℃离心20min,取上清置冰上待测。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC0250
规格:50T/48S
产品内容:
O(V/V)=1:1,室温保存。

提取液:6mol/L盐酸,自备。

浓盐酸:H
2
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

标准品:液体1mL×1支,0.5mg/mL羟脯氨酸标准品,4℃保存。

产品说明:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。

通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。

自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。

操作步骤:
一、羟脯氨酸提取
1.组织:称取约0.5g样品于玻璃管,将组织尽量剪碎以便消化,盖子稍松不密闭。

加入5mL的提取液,煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块,16000rpm,25℃,离心20min(若离心后仍有杂质,可通过过滤去除),用10mol/LNaOH(约3mL)调节pH值至6~8范围内。

蒸馏水定容至8mL,取上清待测。

(过程中可能有黑色物质生成,若长时间不能消化,可能为碳化的物质)
2.细胞:取500万个细胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至透明状,16000rpm,
第1页共3页
25℃,离心20min,用10mol/LNaOH(约0.5mL)调节pH值至6~8范围内。

蒸馏水定容至2mL,取上清待测。

二、测定操作:
1.将标准品稀释为15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117µg/mL的标准溶液。

2.分光光度计预热30min以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。

3.按下表进行操作:
空白管测定管标准管样本(μL)200
标准溶液(μL)200
试剂一(μL)200200200
混匀,室温静置20min
试剂二(μL)200200200 O(μL)600400400
H
2
混匀,60℃,20min,取出后室温静置15min,用1mL比色皿,在560nm下分别测定空白管、测定管、标准管的OD值,并记为A空白管、A测定管、A标准管。

三、羟脯氨酸含量计算公式
1.标准曲线的绘制:
以标准溶液的浓度为x轴,∆A标准(∆A=A标准管-A空白管)为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。

将∆A测定(∆A=A测定管-A空白管)带入方程得到x。

2.羟脯氨酸含量的测定:
(1)按样本鲜重计算:
组织羟脯氨酸含量(µg/g鲜重)=x×V样品÷(W×V样品÷V组提)=8x÷W
(2)按样本蛋白浓度计算:
组织羟脯氨酸含量(µg/mg prot)=x×V样品÷(Cpr×V样品)=x÷Cpr
(3)按细菌或细胞数量计算:
细胞羟脯氨酸含量(µg/104cell)=x×V样品÷(细胞数量×V样品÷V胞提)=2x÷细胞数量。

第2页共3页
V样品:加入的样品体积,0.2mL;V组提:组织提取液体积,8mL;V胞提:细胞提取液体积,2mL;W:样本鲜重,g;细胞数量:以104为单位,万个;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。

注意事项:
1、OD值大于1,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。

3、按样本蛋白浓度计算时,需单独提取样本中的蛋白质并测定。

第3页共3页。

相关文档
最新文档