752紫外可见分光光度计使用方法解析

752紫外可见分光光度计

一、仪器的工作原理

分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。

τ=I/Io

log I/Io=KCL

A= KCL

从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。

二、仪器的安装、使用、安装

1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。

2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。

使用：仪器使用前需开机预热30min。

本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F

1SD

2 ▽／0％

3∆／100％

4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。

A——吸光度（Absorbance）

T——透射比（Trans）

C——浓度（conc）

F——斜率（Factor）

(2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置）

5SD键：该键具有2个功能

a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。

b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。

6 ▽／0％键：该键具有2个功能

a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。

b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。而按键开始自动减1。

7 ∆／100％键；该键具有2个功能

a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。

b）上升键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动加1，如果按住本键不放，自动加1会加快速度，如果F值为1999后，再按键它会自动变为0，再往键开始自动加l。

例如：设置斜率为1500。

方法一

T）按A／τ／C／F键切换到F状态。

b）如果当前F值为1000，则按∆／100%键，直到F值为1500。

C）再按SD键，表示当前的F值为1500，然后自动回到C状态，假如所测的A值为0．234，则此时显示C值为0351。

方法二

a）按A／τ／C／F键切换到F状态。

b）如果当前的F值为1000，则按∆／100%键，直到F值为1500、再按A／τ／C／F键切换到C状态，假如所测的A值为0.224，则此时显示C值为0351。

722型分光光度计

一、测量原理

分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A 与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc

（a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，比例系数用ε表示，则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L•mol-1•cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。

T(透光率)=I/I0 A(吸光度)= -lgT 或A=K•C•L(比色皿的厚度)

测定时，入射光I,

吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，即“K”为常数。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。

二、722型分光光度计的使用

1、将灵敏度旋钮调至“1”档（信号放大倍率最小）。

2、开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至到测试用波长。仪器预热20分钟。

3、打开试样室（光门自动关闭），调节透光率零点旋钮，使数字显示为000.0。（调节100%T 旋钮），盖上试样室盖，将比色皿

架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0，则可适当增加微电流放大的倍数。（增加灵敏度

的档数同时应重复（3）调节仪器透光率的“0”位）但尽量使倍率置于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。

4、预热后，按（3）连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位置，待稳定后仪器可进行测定工作。

三、吸光度“A”的测量

将选择开关置于A 。调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为零，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。

四、浓度c的测量

将选择开关由“A”旋至“C”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓度值。

注意事项：

1、测量完毕，速将暗盒盖打开，关闭电源开关，将灵敏度旋钮调至最低档，取出比色皿，将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内，关上盖子，将比色皿中的溶液倒入烧杯中，用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。

2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。

使用方法

（1）预热仪器将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。

（2）选定波长根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。

（3）固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下，尽可能采用灵敏度较低