(整理)基因重组与基因工程

基因重组与基因工程
一、选择题
1．F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为：A．转化
B．转导
C．转染
D．转座
E．接合
2．通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型，称为：A．转化
B．转导
C．转染
D．转座
E．接合
3．溶原菌是指：
A．整合了噬菌体基因组的细菌
B．整合了质粒基因组的细菌
C．含有独立噬菌体基因组的细菌
D．含有独立质粒基因组的细菌
E．含有独立噬菌体和质粒基因组的细菌
4．由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为：
A．转化
B．转导
C．转染
D．转座
E．接合
5．由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称为：A．位点特异的重组
B．同源重组
C．基本重组
D．随机重组
E．人工重组
6．发生在同源序列间的重组称为：
A．位点特异的重组
B．非位点特异的重组
C．基本重组
D．随机重组
E．人工重组
7．限制性核酸内切酶切割DNA后产生：
A．5'磷酸基和3'羟基基团的末端
B．3'磷酸基和5'羟基基团的末端
C．5'磷酸基和3'磷酸基团韵末端
D．5'羟基和3'羟基基团的末端
E．以上都不是
8．可识别并切割特异DNA序列的称：
A．限制性核酸外切酶
B．限制性核酸内切酶
C．非限制性核酸外切酶
D．非限制性核酸内切酶
E．DNA酶
9．限制酶的识别顺序通常是：
A．聚腺苷酸
B．聚胞苷酸
C．RNA聚合酶附着点
D．回文对称序列
E．甲基化“帽”结构
10．限制酶：
A．从噬菌体中提取而得
B．可将单链DNA任意切开
C．可将双链DNA任意切开
D．可将双链DNA特异切开
E．不受DNA甲基化影响．
11．限制酶的作用特性不包括：
A．在对称序列处切开DNA
B．同时切开双链DNA
C．DNA两链的切点常在同一位点
D．酶切后的DNA片段多具有粘性互补末端 E．酶辨认的碱基一般为4—6个
12．限制酶的特点不包括：
A．只识别一种核苷酸序列
B．其识别不受DNA来源的限制
C．不同生物的DNA经相同限制酶切割后产生相同末端
D．对双链和单链DNA同样切割
E．同一限制酶在一DNA分子上可有数个切点
13．关于限制酶的叙述错误的是：
A．能识别DNA特定的碱基顺序并在特定的位点切开DNA B．切割点附近的碱基顺序一般呈回文结构
C．它能专一降解经甲基化修饰的DNA
D．是重组DNA的主要工具酶
E．主要从细菌中获得
14．在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA的：A．聚合酶
B．解链酶
C．连接酶
D．拓扑酶
E．内切酶
15．在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指： A．建立单克隆抗体
B．建立多克隆抗体
C．构建重组DNA分子
D．无性繁殖DNA-
E．有性繁殖DNA
16．无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是：
A．青霉素抗性
B．卡那霉素抗性
C．自我复制能力
D．自我转录能力
E．自我表达能力
17．重组DNA技术领域常用的质粒DNA是：
A．细菌染色体DNA的一部分
B．细菌染色体外的独立遗传单位
C．病毒基因组DNA的一部分
D．真核细胞染色体DNA的一部分
E．真核细胞染色体外的独立遗传单位
18．pBR322是：
A．天然的酵母质粒
B．经人工改造的酵母质粒
C．天然的大肠杆菌质粒
D．经人工改造的大肠杆菌质粒
E．经人工改造的噬菌体
19．基因工程的操作程序可简单地概括为：
A．载体和目的基因的分离、提纯与鉴定
B．分、切、接、转、筛
C．将重组体导人宿主细胞，筛出含目的基因的阳性株 D．将载体和目的基因接合成重组体
E．限制酶的应用
20．基因工程的基本过程不包括：
A．载体和目的基因的分离
B．限制酶的切割
C．DNA重组体的形成及转化
D．重组体的筛选与鉴定
E．重组体的序列分析
21．理想的基因工程载体应：
A．分子尽可能大
B．有适宜的限制酶切割位点
C．含有多个耐药性基因
D．不易在宿主细胞间转移
E．能整合于宿主细胞DNA，并随其复制
22．下列哪一种物质不能作为基因（克隆）载体：
A．质粒
B．λ噬菌体
C．M13噬菌体
D．病毒RNA
E．逆转录病毒DNA
23．用于转化哺乳类动物细胞的常用载体是：
A．质粒
B．λ噬菌体
C．M13噬菌体
D．逆转录病毒DNA
E．大肠杆菌基因组
24．关于建立cDNA文库的叙述，错误的是：
A．从特定组织中提出mRNA
B．将特定细胞的DNA用限制酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中
C．用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNA
D．用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNA
E．加SAM，以使新生的DNA双链甲基化
25．cDNA文库包括该种生物：
A．某些蛋白质的结构基因
B．所有蛋白质的结构基因
C．所有结构基因
D．结构基因与不表达的调控区
E．内含子和调控区
26．某限制性内切核酸酶切割5'…GGGGGG …3'序列后产生：A．5'突出末端
B．3'突出末端
C．5'及3'突出末端
D．5'或3'突出末端
E．平头末端
27．目的基因与载体连接不涉及：
A．限制酶
B．单链核酸酶
C．末端脱氧核苷酸转移酶
D．DNA连接酶
E．核酸外切酶
28．理想的宿主细胞不应有下列哪种特点：
A．易接纳重组子
B．对载体的复制扩增无严格限制
C．不存在特异的限制酶体系以降解外源DNA
D．不对外源DNA进行修饰
E．含有载体的筛选标记基因
29．基因工程中不需要：
A．限制酶
B．基因载体
C．DNA连接酶
D．末端脱氧核苷酸转移酶
E．核酶
30．重组噬菌体DNA转入宿主细胞的过程属于：
A．转化
B．转导
C．转位
D．转染
E．转录
31．有关重组体转化及表达的叙述，错误的是：
A．宿主细胞经CaCl2处理后对重组体的通透性增加
B．电击法也可增加宿主细胞的通透性
C．噬菌体为载体的重组体必须以体外包装的方式转化宿主细胞 D．真核基因难于在原核细胞中表达
E．转化生殖细胞可采用直接导入的方法
32．连接目的基因与载体不能采用：
A．粘端连接
B．平端连接
C．尾接法
D．人工连接器
E．非共价键连接
33．直接针对目的DNA进行筛选的方法是：A．青霉素抗药性
B．氨卞青霉素抗药性
C．分子杂交
D．分子筛
E．电泳
34．“克隆”某一目的DNA的过程不包括： A．基因载体的选择与构建
B．外源基因与载体的拼接
C．重组DNA分子导入受体细胞
D．筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞 E．表达目的基因编码的蛋白质
35．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A．E．coli表达体系
B．原核表达体系
C．酵母表达体系
D．昆虫表达体系
E．哺乳类细胞表达体系
36．不能用作克隆载体的DNA是：
A．质粒DNA
B．噬菌体DNA
C．细菌基因组DNA
D．腺病毒DNA
E．逆转录病毒DNA
37．克隆的真核黄素基因组DNA可在多种系统表达，例外的是：A．E．coli表达体系
B．酵母表达体系
C．昆虫表达体系
D．COS细胞表达体系
E．CHO细胞表达体系
38．原核生物的粘端连接方式不涉及；
A．质粒
B．限制性核酸内切酶
C．核酸外切酶
D．退火
E．DNA连接酶
二、X型选择题
1．自然界基因转移可能伴发基因重组的有：
A．接合作用
B．转化作用
C．转导作用
D．转座
2．基因组通常是指：
A．一个病毒所含的全套基因
B．几个基因组成的DNA片段
C．体细胞或生殖细胞所含的一整套基因
D．一条染色体上所含的全部基因
3．基因工程的特点：
A．在细胞水平上操作
B．在分子水平上操作
C．在细胞水平上表达
D．在分子水平上表达
4．基因工程过程涉及：
A．载体和目的基因的分离
B．限制酶切割载体和目的基因
C．DNA重组体的转化与表达
D．DNA重组体扩增、筛选与鉴定
5．限制酶：
A．能识别并切开DNA分子中某些碱基序列B．酶辨认的碱基序列具有回文结构
C．酶辨认的碱基序列不具有倒转的重复顺序D．能切断DNA的一条单链
6．限制酶作用于DNA；
A．可将单链DNA特异切开
B．可将双链DNA任意切开
C．酶切后可产生粘性末端
D．酶切后可产生平头末端
7．经限制酶切割的DNA，可产生：
A．粘性末端
B．平头末端
C．带有5' -磷酸基的末端
D．带有3' -羟基的末端
8．目的基因的获得，可以：
A．直接从染色体DNA中分离
B．利用已知序列人工合成
C．提取mRNA，逆转录合成cDNA
D．利用探针自基因文库中“钓”取
9．在分子克隆中，目的DNA的获取途径有：
A．基因组DNA文库
B．真核细胞染色体DNA
C．真核细胞mRNA反转录获得的cDNA
D．聚合酶链式反应
10．从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是： A．基因克隆
B．分子克隆
C．重组DNA技术
D．构建基因组DNA文库
11．可用作克隆基因载体的DNA有：
A．细菌质粒DNA
B．噬菌体DNA
C．病毒DNA
D．酵母人工染色体（YAC）
12．基因工程的载体有：
A．pBR322
B．大肠杆菌
C．M13噬菌体
D．昆虫病毒DNA
13．多拷贝质粒是指：
A．细菌中存在多个同种质粒
B．质粒中存在多个目的基因
C．细菌中存在多种质粒
D．在细菌中可自我复制的质粒
14．具有互补粘性末端的载体与目的基因组连接，需经：A．变性
B．混合
C．退火
D．DNA连接酶催化
15．目的基因与载体连接成的重组体：
A．有独立的繁殖能力
B．无独立的繁殖能力
C．两者用DNA连接酶连接
D．连接键为非共价键
16．“尾接法”的连接方式涉及：
A．polyG
B．po1yC
C．TdT
D．ATP
17．进行基因工程实验时，常用技术有：
A．分子杂交技术
B．DNA探针技术
C．质粒重组技术
D．基因调控技术
18．将重组DNA分子导人受体细菌的方法有： A．接合
B．转座
C．转化
D．转染
19．下述操作可能用于DNA克隆过程的是：A．DNA的制备和酶解
B．不同来源DNA的拼接
C．核酸分子杂交
D．细菌的生长和繁殖
20．关于质粒DNA的叙述正确的是：
A．是基因组DNA的组成部分
B．具有独立复制功能
C．具有编码蛋白质的功能
D．含有感兴趣的目的DNA
三、填空题
1．自然界基因转移伴发重组有几种形式分别为___________、___________、___________及___________。

2．通过自动获取或人为地供给外源____________，使细胞或培养的受体细胞获得新的____________，这就是转化作用。

3．噬菌体感染宿主菌其核酸进入菌体的过程称为___________，是___________的一种形式。

4．由____________和____________介导的基因移位或重排，称为转座。

5．转座子是可从一个___________位点转移至另一位点的分散的___________序列。

6．基因重组有两种类型，即____________和____________。

7．依赖整合酶，在两个DNA序列的____________发生的整合称____________重组。

8．发生在同源序列间的重组称为____________，又称为____________。

9．一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，____________的选择与改造，____________的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出________________________。

10．限制性核酸内切酶是一类识别____________的____________核酸酶。

11．DNA经限制性内切酶切割后可产生两种切口：___________和___________。

12．科学家感兴趣的外源基因又称____________，有两种类型：___________和___________。

其来源途径有：化学合成，____________，制备的基因组DNA及____________技术。

13．外源DNA离开染色体是不能复制的，将____________与____________连接，构建成重组DNA 分子，外源DNA则可被复制。

14．根据采用的克隆载体性质不同，将重组DNA分子导人细菌的方法有____________、____________及感染。

15．DNA重组体筛选的直接筛选法的特点是：______________________；其又可分为：___________、___________和___________。

四、名词解释
1．基因重组
2．接合作用
3．转化作用
4．转座
5．限制性核酸内切酶
6．DNA克隆（基因工程）
7．cDNA文库
8．基因组DNA文库
五、问答题
1．何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。

2．目的基因有哪些主要来源（或途径）？
3．常用的限制性内切酶有哪些特点？
4．连接目的基因与载体的方式主要有哪些？
参考答案
1．E 2. A 3. A 4. D 5. A 6. C 7. A 8.
B 9. D 10. D 11.
C 12.
D 13. C 14. C 15.
D 16. C 17. B 18. D 19. B 20.
E 21. B 22.
D 23. D 24. B 25. C 26. C 27.
E 28. E 29.
E 30. D 31. C 32. E 33. C 34. E 35. E 36.
C 37. A 38. C
二、X型选择题
1．ABCD 2. AC 3. BC 4. ABCD 5. AB 6. CD 7. ABCD 8. ABCD
9. ABCD 10. ABC 11. ABCD 12. ACD 13. AD 14. BCD 15. BC 16. ABC 17. ABC 18. CD 19. ABCD 20. BC
三、填空题
1．接合作用，转化作用，转导作用，转座
2．DNA，遗传表型
3．感染，转化
4．插入序列，转座子
5．染色体，重复
6．位点特异的重组，同源重组
7．特异位点间，位点特异的
8．同源重组，基本重组
9．克隆基因载体，目的基因与载体, 含感兴趣基因的重组DNA转化细胞
10．DNA特异序列，内切
11．粘性末端，平头（或钝性）末端
12．目的基因，cDNA，基因组DNA，酶促合成cDNA，PCR
13．外源基因，载体
14．转化，转染
15．直接测定基因或基因表型，抗药性标志选择，标志补救选择，分子杂交法
四、名词解释
1．基因重组指整段DNA在细胞内或细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，并能在新的位置上复制、转录和翻译。

2．接合作用指当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA就可从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌），这种类型的DNA转移称为接合作用。

3．转化作用指通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转化作用。

4．转座指在基因组内由可移动的DNA序列包括插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。

5．限制性核酸内切酶，就是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。

限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。

限制性核酸内切酶分为三类，重组DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为II类酶。

6．DNA克隆（基因工程），就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质：同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA，与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA 分子（即复制子），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又称基因克隆、重组DNA或基因工程。

7．cDNA文库指以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，即cDNA；再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。

不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段，这样生长的全部细菌所携带的cDNA分子或片段就代表了整个组织工细胞表达的各种mRNA信息，即cDNA文库。

8．基因组DNA文库指利用限制性核酸内切酶和克隆载体技术，将人们感兴趣的基因片段转入不同的受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。

这样存在于不同转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。

基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。

五、问答题
1．（1）基因克隆就是指应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质：同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA，与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（即复制子），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即基因克隆，又称DNA克隆、重组DNA或基因工程。

（2）一个完整的DNA克隆过程应包括；目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞（转化子）。

2．目前获取目的基因大致有以下几种途径工来源：（1）人工合成对已知某种基因的核苷酸序列，或根据已知多肽链的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核苷酸序列，再利用DNA 合成仪通过化学合成原理合成目的基因。

（2）从染色体DNA中直接分离主要针对原核生物，由于真核生物染色体DNA庞大繁杂，难以用此法。

（3）cDNA 从mRNA合成，在反转录酶作用下生成mRNA—cDNA杂合分子，用碱降解mRNA，剩下的cDNA在DNA聚合酶催化下合成互补双链DNA，然后用单链核酸酶S1，将双链连接处切开，即得到cDNA。

（4）基因组DNA 用核酸探针将所需目的基因自基因组DNA文库中“钓”取出来。

（5）PCR PCR是一种在体外利用酶促反应获得特异序列的基因组DNA或cDNA的专门技术。

目前，采用聚合酶链反应获取目的DNA十分广泛。

3．限制性核酸内切酶(限制酶)是基因工程中重要的工具酶，是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。

常用限制酶主要有以下特点：（1）均来自于细菌，并以其来源的微生物学名进行命名；（2）其与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA，对自身细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义；（3）识别序列多有回文结构；（4）经其切割后的双链DNA可以有两种切口：平端切口或粘端切口；（5）不同限制性内切核酸酶识别DNA中核苷酸序列长短不一，识别序列有：四、六或八核苷酸序列。

4．与自然界发生的基因重组不同，这种人工DNA重组是靠目的DNA与载体共价连接的。

连接方式主要有：（1）粘性末端连接，其以下方式——同一限制酶切割位点连接及不同限制性内切酶位点连接；（2）平端连接；（3）同聚物加尾连接，是利用同聚物序列，如多聚物A 与多聚T之间的退火作用完成连接；（4）人工接头连接，对平端DNA片段或载体DNA，可在连接前将磷酸化的接头或适当分子连到平末端，使产生新的限制性内切酶位点，再用识别新位点的限制性内切核酸酶切除接头的远端，产生粘性末端。