基因工程和基因重组

第十四章基因重组与基因工程

内容提要：

细菌的基因转移包括接合作用、转化作用、转导作用等。当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞转移至另一个细胞，这种类型的DNA转移称为接合作用。通过自动获取或人为的供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转化作用。由病毒携带将宿主DNA片段从一个细胞转移至另一细胞的现象或机制，称为转导作用。在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接即为重组。

重组DNA技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。为研究基因的结构与功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括：1．分，即目的基因的获取及基因载体的选择。目的基因指科学家感兴趣的外源基因，其来源有几种途径：化学合成、PCR技术、基因组文库或cDNA文库中获得。载体是目的基因的携带者，常用的载体有质粒、噬菌体等。2．切，即限制性核酸内切酶的应用。限制性内切酶是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，是实现重组DNA技术的重要的工具酶。3．接，即将目的基因与载体连接形成重组体（或重组DNA）。4．转，即将重组体导入宿主菌（或细胞），根据采用的载体性质不同，将重组体导入宿主菌的方法有转化、转染及感染。5．筛，即重组体的筛选与鉴定，将重组体导入宿主菌后，通过适当形式的培养板生长即可获得一定的抗药菌落。利用原位杂交，和Southern印迹或免疫学方法对抗药菌落进行筛选，获得含目的基因的转化子菌落，再经扩增、分离重组DNA获得基因克隆。重组DNA 技术在疾病基因的发现，表达有药用价值的蛋白质，DNA诊断及疾病的预防等方面具有广泛应用价值，并促进了当代分子医学的诞生和发展。

一、选择题

【A型题】

1．下列DNA序列属于回文结构的是（）

A．ATGCCG

TACGGC

B．GAA TTC

CTTAAG

C．GGCCGG

CCGGCC

D．TCTGAC

AGACTG

E．CTAGGG

GA TCCC

2．DNA经限制性内切核酸酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。这是因为存在着（）

A．钝性末端B．平端C．粘性末端D．5’端E．3’端

3．限制性内切核酸酶的通常识别序列是（）

A．粘性末端B．聚腺苷酸

C．回文对称序列D．RNA聚合酶附着点E．甲基化“帽”结构

4．pBR322是（）

A．经人工改造的大肠杆菌质粒B．天然的大肠杆菌质粒

C．天然的酵母质粒D．经人工改造的大肠杆菌噬菌体

E．经人工改造的酵母质粒

5．免疫球蛋白的生成是通过以下哪个过程（）

A．转化B．转导C．转染D．转位E．溶原

6．常用载体-质粒的特点（）

A．是线形双链DNA

B．插入片断的容纳量比λ噬菌体DNA大

C．含有抗药性基因

D．含有同一限制性内切核酸酶的多个切口

E．不随细菌繁殖而进行自我复制

7．基因工程的操作程序可概括为（）

A．切、转、接、筛、分B．转、接、筛、分、切

C．接、筛、分、切、转D．筛、分、切、转、接E．分、切、接、转、筛8．cDNA文库指（）

A．一个生物组织和细胞的全部基因信息B．一个生物组织和细胞的全部mRNA信息C．一个生物组织和细胞所表达的mRNA信息D．一个物种的全部mRNA信息

E．一个物种的全部基因信息

9．限制性内切核酸酶（）

A．可将单链DNA任意切断B．由噬菌体提取而得

C．可将双链DNA序列特异地切开D．可将两个DNA分子连接起来

E．不受DNA甲基化影响

10．在重组DNA技术中，不常用的酶是（）

A．限制性内切核酸酶B．DNA聚合酶

C．DNA连接酶D．反转录酶E．DNA解链酶

11．可作为重组DNA的目的基因的是（）

A．mRNA B．tRNA C．rRNA D．基因组DNA E．mRNA和基因组DNA 12．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称（）

A．转化B．转染C．感染D．转导E．转移

13．最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（）

A．营养互补筛选B．抗药性筛选

C．免疫学方法D．PCR筛选E．分子杂交筛选

14．α-互补筛选法属于（）

A．抗药性标志筛选B．酶免检测分析

C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫学方法

15．F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为（）

A．转化B．转导C．转染D．转座E．接合

16．由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为（）

A．转化B．转导C．转染D．转座E．接合

17．发生在同源序列间的重组称为（）

A．位点特异的重组B．非位点特异的重组

C．基本重组D．随机重组E．人工重组

18．在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA（）

A．聚合酶B．解链酶C．连接酶D．拓扑酶E．内切酶

19．在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指（）

A．建立单克隆抗体B．建立多克隆抗体

C．构建重组DNA分子D．无性繁殖DNA E．有性繁殖DNA

20．无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是（）

A．青霉素抗性B．卡那霉素抗性

C．自我复制能力D．自我转录能力E．自我表达能力

21．在已知序列的情况下获得目的DNA最常见的是（）

A．化学合成法B．筛选基因组文库

C．筛选cDNA文库D．聚合酶链式反应E．DNA合成仪合成

22．重组DNA技术领域常用的质粒DNA是（）

A．细菌染色体DNA的一部分B．细菌染色体外的独立遗传单位

C．病毒基因组DNA的一部分D．真核细胞染色体DNA的一部分

E．真核细胞染色体外的独立遗传单位

23．直接针对目的DNA进行筛选的方法是（）

A．青霉素抗药性B．氨苄青霉素抗药性C．分子杂交D．分子筛E．电泳24．“克隆”某一目的DNA的过程不包括（）

A．基因载体的选择与构建

B．外源基因与载体的拼接

C．重组DNA分子导入受体细胞

D．筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞

E．表达目的基因编码的蛋白质

25．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是（）

A．E．coli表达体系B．原核表达体系

C．酵母表达体系D．昆虫表达体系E．哺乳类细胞表达体系26．不能用作克隆载体的DNA是（）

A．质粒DNA B．噬菌体DNA

C．细菌基因组DNA D．腺病毒DNA E．逆转录病毒DNA

27．关于重组体的叙述，下列哪项是错误的（）

A．包括外源性的目的基因B．包括载体

C．重组体有独立繁殖的能力D．重组体要回到细胞水平表达

E．目的基因和载体通过连接酶连接

28．基因组代表一个细胞或生物体的（）

A.部分遗传信息B．整套遗传信息C．可转录基因D．非转录基因E．可表达基因29．下列常用于原核表达体系的是（）

A．酵母细胞B．昆虫细胞C．哺乳类细胞D．真菌E．大肠杆菌30．构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（）

A.染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 31．构建cDNA文库时，首先需分离细胞的

A.染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 【X型题】

1．限制性内切核酸酶作用特性是（）

A．在对称序列处切开DNA

B．DNA两链的切点常不在同一位点

C．酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端

D．DNA两链的切点常在同一位点

E．限制酶通常识别4へ6碱基对，有些识别8个或8个以上碱基对

2．一般来说限制性内切核酸酶（）

A．只识别一种核苷酸序列