高中生物实验方法及试剂总汇

高中生物实验方法及试剂汇总

1．实验方法

实验方法是整个实验设计的精髓，是做好实验设计的关键所在。现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：

(1)化学物质的检测方法：

①淀粉——碘液

②还原糖——斐林试剂、班氏试剂

③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂

④乳酸——pH试纸

⑤O2——余烬复燃

⑥无O2——火焰熄灭

⑦蛋白质——双缩脲试剂

⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液

⑨DNA——二苯胺试剂

⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液

(2)实验结果的显示方法：

①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量

②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量

③原子途径——放射性同位素示踪法

④细胞液浓度大小——质壁分离

⑤细胞是否死亡——质壁分离

⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等

⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化)

⑧胰岛素作用——动物活动状态

⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度

⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基

(3)实验条件的控制方法：

①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物

②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水

③除去容器中CO2——NaOH溶液

④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境

⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热

⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光

⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光

⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠

⑨线粒体提取——细胞匀浆离心

⑩骨的脱钙——盐酸溶液

⑩灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。

(4)实验中控制温度的方法：

①还原糖鉴定：水浴煮沸加热

②酶促反应：水浴保温

③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热

④DNA的鉴定：水浴煮沸加热

⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养

2．斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸

这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在，在医学上用来检验糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略有不同：

斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。分为斐林试剂A和斐林试剂B，A为CuSO4溶液，B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液，使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂。

班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液，又叫本尼迪克特(Benedict)试剂，它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的，只是比斐林试剂更稳定，所以在临床化验中更常使用。

尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸，呈白色,带蓝色斑点，用于糖尿病患者的尿糖测试。每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫克，氢氧化钠235毫克。尿糖试纸法快速、方便，试纸的正确使用方法为：将试纸条放在尿液中浸湿，一秒钟后取出，在一分钟内观察试纸的颜色，并与标准色板对照，根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度。

3．斐林试剂和双缩脲试剂的比较

相同点：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；

②斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为0．1g/mLNaOH溶液。

不同点：①CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为0．05g/mLCuSO4溶液，双缩脲试剂B为0．01g/mLCuSO4溶液。

②配制比例不一样。

③使用方法不一样：斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使用，双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后，再加入试剂B。

④鉴定的对象不一样：斐林试剂鉴定的是还原糖，双缩脲试剂鉴定的是蛋白质。

⑤反应本质及颜色反应不一样。

4．苏丹Ⅲ染液与苏丹Ⅳ染液的比较

都是用来鉴定脂肪。苏丹Ⅳ染液更易溶于脂肪，所以染色更深，同时要求染色时间更短。

生物学中常用的试剂：

1、斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。

2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。

3、双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。

4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。

鉴定DNA的试剂——二苯胺试剂

A液：1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。B液：乙醛的体积分数为0.2。

配制：将0.1mLB液加到10mLA液中，现配现用。

6、甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。）

7、苔黑酚——乙醇溶液（用于RNA的鉴定）

溶解6克苔黑酚于是100毫升95%乙醇中，（可在冰箱中保存1个月）

8、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。

9、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变性。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。

10、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。

11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。

（也可以用醋酸洋红染色：冰醋酸45ML＋55ML蒸馏水＋0.5克洋红先将洋红溶于蒸馏水中，再加入冰醋酸充分摇匀后，加热煮沸10分钟，待冷却后，即可使用。）

12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的三氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）

13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

14、碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。

15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素。

16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油）可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。