细菌鉴定-生化实验

（三）结果观察

葡萄糖/乳糖发酵试验，H2S产生试验直接观察。 VP试验：去塞，加40％KOH 15滴，振荡，再加等 量α－奈酚，振荡，37℃振荡培养30min，观察。 MR试验：加甲基红试剂2－3滴，观察。

吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，
静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴， 观察。
被接菌种3 产气肠杆菌
对照 （管数） 1支/每组不接种
2.糖发酵
3.MR试验 4.VP试验 5.吲哚试验
大肠杆菌
大肠杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
产气肠杆菌
产气肠杆菌 产气肠杆菌 葡萄球菌
1支/每组不接种
1支/每组不接种 1支/每组不接种 1支/每组不接种
五、实验结果及分析
试验名称 大肠杆菌 枯草芽孢 杆菌 产气肠杆 菌 金黄色葡 萄球菌 对照 1.淀粉水解 实验 2.糖发酵 3.MR试验 4.VP试验 5.吲哚试验
六、思考题
1、糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？ 2 、V.P.试验与M.R.试验的最初作用物以及最终产物 有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。 3、吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？
糖发酵试验现象
二、实验原理

M.R.及V.P实验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、
乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基
的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。
二、实验原理

M.R.及V.P实验 VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物 的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此 化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋 白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。
三、实验器材
菌种 1、大肠杆菌 2、枯草芽孢杆菌 3、未知菌

其他 1、试管6组 28个/组（每个试管带一个德汉氏小管） 2、平皿2组 16个/组 3、三角瓶2组 8个/组

四、实验步骤
（一）准备实验器材，配制培养基 （二）接种培养
试验名称 1.淀粉水解 实验
被接菌种1 大肠杆菌
被接菌种2 枯草芽孢杆菌
二、实验原理
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吲哚实验 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶， 分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯 甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
三、实验器材

培养基
1、淀粉培养基 :500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121~126℃灭菌30min） 蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2g 氯化钠 5g 琼脂 15~20g 牛肉膏 5g 水 1000ml pH 7.2 2、糖发酵培养基：300ml（分装于28只试管，包扎，112~115℃灭菌30min） 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 10g 水 1000ml pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml 3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112~115℃灭菌30min） 蛋白胨 5g K2HPO4 5g 葡萄糖 5g 水 1000ml pH 7.2~7.4 4、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121~126℃灭菌30min） 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 水 1000ml pH 7.6
实验八 细菌鉴定中常用的生化实验
一、实验目的

掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R. 及V.P的原理及方法。 掌握以上实验的用途。
二、实验原理

淀粉实验

糖发酵实验 发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范 围pH5.2~6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色） 发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气 泡，产气漂浮）