细菌典型生理生化鉴定技术

3、结果观察与记录
封油管 发酵型 产酸（黄色）
未封油管 产酸（黄色）
氧化型 不产酸（绿色） 产酸（黄色）
产碱型 不产酸（绿色） 不产酸（绿色）
（三） V-P试验
1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸， 丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后 者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙 酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰 与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P （+）反应。
2、试验方法
（1）奥梅拉（O’Meara）法 （2）贝立脱（Barritt）氏法 （3）快速法
（１）奥梅拉法：
将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨 水培养基，于36±1 ℃培养48h， 每1mL 培养液加奥梅拉O’Meara试剂0.1mL，摇 动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h ， 或在48~50 ℃水浴放置2h后判定结果。
2、试验方法：
用接种针或环移取纯培养物少许，接 种于糖发酵管中，若为半固体培养基， 则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃ 培养1~3天，每天观察结果。
3、结果观察和记录
记录： • 产酸不产气，阳性，以“+”表示 • 产酸产气， 阳性，以“⊕”表示 • 不产酸产气，阴性，以“-”表示
气
泡
气
导
泡
（2）呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-，迄 至发现阴性并培养至第5天仍为阴性， 即可判定结果。
MR+
MR-
（五） 七叶苷水解试验
１、原理：七叶苷被细菌分解后，生成 葡萄糖和七叶素，七叶素与Fe2+结合， 生成黑色化合物，使培养基呈黑色， 以此鉴别细菌。
2、试验方法
将待试纯培养物少许，接种于七叶苷 培养基，于36±1 ℃培养24h,观察结果。
（三）生化试验的方法
1. 在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、 培养后,观察培养基的pH值变化。
2. 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢 产物所生成的颜色反应。
3. 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 4. 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察
细菌的生长情况。
（四）生化试验的注意事项
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，
多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似
菌落分别进行试验。
二、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
3、结果观察与记录
（1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录 为+；
（四）甲基红试验（MR）
1、原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢 的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、 琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基 pH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红色， 为甲基红试验阳性 ；有的细菌使丙酮酸脱羧后形 成酮、醇类中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指 示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
细菌典型生理生化鉴定技术
第一节 细菌的生化试验
一、概述
• （一）、什么是生化试验?
•
指通过利用生物化学的方法来测定微
生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴
别细菌的类别、属种的试验。
（二）检验细菌的生化试验范围
1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验
3、结果观察与记录
（1）培养基变为黑色或棕黑色者，为阳 性，记录为 +
（2）培养基不变色者，为阴性，记录为 -
（六） 甘油品红试验
1、原理： 某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步
脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合 物，呈深紫红色，以此鉴别细菌。
源自文库 2、试验方法
取待检菌的新鲜纯培养物，接种于 甘油品红肉汤培养基中，于36±1 ℃培 养8天,并用未接种的培养基在相同条件 下培养作为阴性对照，观察结果。
（一） 糖醇类发酵试验
原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所 产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇， 有的只能分解1~2种糖醇 ，有的分解糖醇能产 酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这 些特点，可鉴别细菌。
1、常用的糖醇
单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖 双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖 三糖：棉子糖 多糖：菊糖、肝糖、淀粉 醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇
2、试验方法
挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷 酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1 ℃或 30 ℃（以30 ℃较好）培养3~5天，从第48h起， 每日取培养液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴， 立即观察结果。
MR-VP试验原理及照片
V-P
3、结果观察与记录
（1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色 为弱阳性，记MR+；
（3）快速法：
将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产 酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环， 乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40% 氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定 结果。不产酸的培养物不能使用。
3、结果观察与记录
（1）发酵管出现红色者，为阳性， 记 V-P+
（2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴 性，记 V-P-
（2）贝立脱法：
将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培 养基，于36±1℃培养2天，每2mL培养液先加 入6%a-萘酚纯酒精溶液1mL，再加40%氢氧 化钾水溶液0.4mL，摇动2~5min，阳性菌常立 即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或 36±1 ℃培养 4h ，如显现红色为阳性，呈黄 色或有类似铜色者，可判定为阴性。
管
阳性
阳性
阴性
（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验
1、原理： 细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。
氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的 条件下不能分解葡萄糖； 发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖； 不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。
2、方法
• 取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖 半固体培养基上，在其中一管加入一层 （约1cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气， 在37℃培养2~4h天，每天观察结果。