大肠杆菌、菌落总数检测步骤讲课稿
菌落总数与大肠菌群数测定 PPT
大肠菌群数测定
实验步骤 2.分离培养 （1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注，15ml （2）选产酸产气的发酵管 （3）接种至伊红美蓝平板 分区划线法 （4）培养： 36℃，48h
分离培养
器材与试剂 初发酵结果（4只发酵管）、酒精灯、接种环、伊红美兰 平板培养基
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰染色法
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
复发酵
器材与试剂 培养24小时后的伊红美兰平板、酒精灯、接种环、 复发酵管
大肠菌群数测定
实验步骤 3.复发酵 （1）选取鉴定为无芽孢G-杆菌的菌落 1-3个 （2）接种至10ml乳糖蛋白胨培养液 （3）培养：37℃，24h （4）观察指标：产酸，产气
别接种若干培养管，根据阳性管数估算MPN值
MPN法原理
MPN法（Most Probable Number Method） 1.细菌进入发酵管的概率近似服从泊松分布:
P(x=k)=e-x ×xk/k! x:细菌浓度，k:进入发酵管的细菌数 2.若在n管发酵中，令接种水样量为Vi，阳性管数为 Pi，阴性管数为Qi，则该检验结果发生的概率为：
计算方法： （2）有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值 菌落数之比<2，取平均值 （3）所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者 （4）所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者 （5）没有任何稀释度在30-300之间 选最接近该范围者
结果单位：CFU/ml（g）
大家应该也有点累了，稍作休息
分区划线法
食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定
食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定摘要：菌落综述和大肠菌群超标是食品产品卫生指标中常见的质量问题，国家绝大多数食品都制订了菌落总数和大肠菌群的指标，并对其数量做了详细的规定。
菌落总数和大肠菌群是食品中的安全性指标，是影响产品质量问题的常见指标，在对食物进行检测的时候菌落总数以及大肠菌两项指标容易出现相应的检测问题{1】，为了熟悉和掌握大肠菌计数和菌落总数的测定的方法和技术，本次实验以未清洗的生菜为实验对象，用MPN计数法对大肠菌群进行计数，用平板倾注的方法培养微生物后观察获得的单菌落来测定菌落总数。
关键词：生菜；大肠菌MPN计数法；菌落总数；平板倾注一、前言：食品中菌落总数是指食品样检经过处理，在一定条件下（如培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等）培养后，所得1mL （或1g）检样中形成菌落的总数。
菌落总数测定通常是用来判定食品被微生物污染的程度及卫生质量，测定结果反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生评价。
大肠菌群是需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胚杆菌。
该菌群主要来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧，不形成芽孢;在35~37℃条件下，48 小时内能发酵乳糖声酸产气，食品中大肠菌群数以每1mL(g)检样内大肠菌群最可能数（the most probable number,MPN）表示。
[2]二、实验材料与方法（一）实验材料1、实验器材高压灭局锅恒温培养箱电子天平2、实验材料及试剂未经清洗的生菜无菌生理盐水3、菌落总数的测定所用培养基及其配方平板计数琼脂（PCA）培养基胰蛋白胨5.0g 酵母浸膏2.5g 葡萄糖1.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000mL PH1.0±0.24、大肠菌群计数所用培养基及其配方越贵基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），磷酸盐缓冲液，无菌生理盐水，无菌1mol/L氢氧化钠溶液，无菌1mol/L盐酸溶液。
简述菌落总数检测程序
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是用来确定食品、水、空气等样品中微生物
总数的一种常见检测方法。
其主要步骤包括样品制备、稀释、接种、培养和计数等。
首先，样品制备阶段包括将样品称取并加入适当的稀释液中进
行均匀搅拌或震荡，以确保样品中的微生物能够充分分散。
接下来是稀释阶段，将样品进行系列稀释，以便于后续的菌落
计数。
通常采用10倍稀释法，即取1ml样品加入9ml稀释液，得到的新溶液再取1ml加入9ml稀释液，以此类推。
然后进行接种阶段，将适量稀释后的样品溶液分别接种到含有
适当培养基的琼脂平板上，并通过灭菌的技术将样品均匀涂布在琼
脂平板表面。
接着是培养阶段，将接种好的琼脂平板置于恒温培养箱中，让
微生物在适宜的温度下进行生长，通常培养时间为24-48小时。
最后是计数阶段，通过肉眼或者计数仪器对琼脂平板上形成的
菌落进行计数，得出菌落总数。
通常，只有直径在1-2mm之间、形态典型的菌落才会被计数。
总的来说，菌落总数检测程序通过样品制备、稀释、接种、培养和计数等步骤，能够对样品中的微生物总数进行评估，为食品、水、空气等领域的卫生安全提供重要的参考依据。
大肠杆菌及菌落总数
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏3.0 g 蛋白胨10.0g NaCl 5.0g 水1000mL pH7.4～7.6 将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。
也可放在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
在上述烧杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。
将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达7.6。
反之，用1mol/LHCL 进行调节。
无菌生理盐水：需用生理盐水浓度是0.9%：称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
2)器材试剂：牛肉膏蛋白胨 NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCL 灭菌水高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙pH试纸（pH5.5-9.0）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸量筒玻璃棒电热炉称量杯灭菌三角瓶灭菌的具塞三角瓶灭菌平皿灭菌吸管灭菌试管高压蒸气灭菌：1.将内层锅去处，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。
细菌总数测定总大肠菌群测定培训课件
细菌总数测定总大肠菌群测定
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倾注培养
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（2）待冷却凝固后，翻转平皿，使底面 向上，置于36±1℃培养箱内培养24h， 进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总 数。
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培养结果
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（3）如果测定水源水
用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样 1mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作同 生活饮用水的检验步骤。
4.由于y(x)为单极值函数，令dy/dx=0,即
n Vi(
Pi
Qi) 0
i1 eVix/V 1
5.解此方程，得x=MPN
6.该方程为超越方程，一般采用数值法求近似解
7.日常实验时采用查表法推算MPN值。
8.表格在教材第260-261页。
细菌总数测定总大肠菌群测定
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细菌总数测定总大肠菌群测定
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八、计算
1、菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察， 必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下 各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平 均菌落数，供下一步计算时应用。
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在求同稀释度的平均数时，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释 度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的 一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀 ，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌 落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
细菌总数测定总大肠菌群测定
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革兰染色法
涂片：接种环，挑取菌落， 生理盐水一滴，涂匀
热固定：通过火焰若干次 初染：结晶紫一滴，1min，水洗 媒染：卢戈碘液一滴，1min，水洗 脱色：95%乙醇，30s或至无色为止 复染：复红一滴，30s
大肠杆菌、菌落总数检测步骤
为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下边是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：1）培育基准备（以乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的 100ML 蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌办理，办理方法详见注一）。
B、用称量天平秤取7g 乳糖。
C、将 A、B 混淆平均，并用 10ml 吸管各取 10ml 混淆液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制A、用量杯量取加热的 100ML 蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌办理，办理方法详见注一）。
B、用称量天平秤取乳糖。
C、将 A、B 混淆平均，并用 10ml 吸管各取 10ml 混淆液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌 10min。
3）将灭菌事后的试管搁置在无菌室，常温保留一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤以下： A、量取灭菌后的蒸馏水 225ml 加温后与 25g 样品混淆平均。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混淆） B、取三个玻璃培育皿，分别标上 -1、-2、-3 标志。
C、取两根新试管取9ml 蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管汲取1ml 样品液体，注入 -1 培育皿中，并盖上盖子。
E、用吸管汲取 1ml 样品液体，注入 a 试管中，记为 -2 培育基液。
F、用吸管汲取1ml a 试管中的液体，注入到 b 试管中，记为 -3 培育基液。
G、用 1ml 吸管取样品液体分别注入 3 根单料试管中，用 10ml 吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用 1ml 吸管取 -2 培育试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到 36℃±1℃的恒温培育箱中 24 小时培育。
J、24 小时培育后，拿出并用肉眼察看试管的颜色及冒气泡状况，如有此中的随意状况，说明有大肠杆菌，需要经过美兰做进一步的检测。
菌落总数、大肠菌群测定方法
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品：1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。
一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。
（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支(18*180规格)试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST（合计90毫升）。
（c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。
4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。
5、准备8个培养皿，用布包扎好。
6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。
7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。
二、使用灭菌锅灭菌1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。
2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。
3、盖上灭菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。
4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP(兆帕)时，灭菌维持15分钟后(温度和压力不能过高或者过低)，断电自然冷却到接近“0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。
菌落总数和大肠菌群测定方法
菌落总数和大肠菌群测定方法菌落总数和大肠菌群的测定方法如下：一、菌落总数的测定方法菌落总数是指食品样品在一定条件下培养后，得到的1克或1毫升样品中所含的活菌个数。
它反映了食品在生产过程中的卫生状况，是判定食品质量的重要指标之一。
1.样品处理：根据样品是固体或液体，采用不同的处理方法。
对于固体样品，先进行均质化处理，将其粉碎并混匀。
对于液体样品，直接进行摇匀。
2.稀释：根据样品的污染程度，将样品稀释至适当浓度。
通常采用系列稀释的方法，即先将样品稀释10倍，再稀释10倍，直到适合接种。
3.接种：将稀释后的样品接种到培养基上，可以采用倾注法或涂布法。
倾注法是将稀释后的样品倒入培养皿中，摇匀后倾注培养基；涂布法是将稀释后的样品均匀涂布在培养基表面。
4.培养：将接种后的培养皿放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的菌落总数。
二、大肠菌群的测定方法大肠菌群是指一群能在30℃-37℃的伊红美蓝琼脂平板上生长并产生深紫色素的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
它主要来源于肠道，是人类肠道中的主要菌群之一。
大肠菌群的测定对于食品卫生质量的控制具有重要意义。
1.样品处理：与菌落总数测定类似，将固体或液体样品进行均质化处理和稀释。
2.接种：将稀释后的样品接种到伊红美蓝琼脂平板上，可以采用倾注法或涂布法。
3.培养：将接种后的平板放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
在培养过程中，大肠菌群会在伊红美蓝琼脂平板上形成深紫色的菌落。
4.验证试验：为了确保结果的准确性，需要进行验证试验。
可以采用革兰氏染色法对可疑菌落进行染色，以便确认是否为大肠菌群。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的大肠菌群数。
需要注意的是，上述方法仅供参考，具体操作步骤可能会因不同的检测机构或标准而有所差异。
在实际操作中，应根据具体情况进行调整和修改。
另外，为了保证检测结果的准确性和可靠性，需要注意实验室的卫生条件、仪器的校准、试剂的质量以及操作人员的专业素质等方面的因素。
菌落总数、大肠菌群测定方法.docx
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品：1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。
一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。
（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。
（C）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1∙91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。
4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。
5、准备8个培养皿，用布包扎好。
6、准备至少3支5ml和1支IOmI带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。
7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。
二、使用灭菌锅灭菌1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。
2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。
3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。
4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121° ,压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。
大肠杆菌菌落总数检测步骤
大肠杆菌菌落总数检测步骤大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在环境卫生、食品安全等领域中具有重要意义。
因此，对大肠杆菌和细菌总数的检测非常重要，以下是大肠杆菌和菌落总数检测的详细步骤：1.试样采集：首先，需要进行试样采集。
根据实际需要，可以使用不同的方法采集试样，如直接采集水样、食品样品或其他样品，或者通过培养基进行采样。
试样采集应注意保持无菌环境，并避免样品污染。
2.试样预处理：试样采集后，需要进行预处理。
根据试样的不同特点，可以选择不同的预处理方法。
例如，对于食品样品，可以使用加热、超声波或化学处理等方法，以杀灭或抑制其他细菌的生长，保留大肠杆菌。
3.分离培养：预处理后的试样需要进行分离培养。
将试样分离到含有LB（Luria-Bertani）培养基或EC（Escherichia coli）培养基等富含葡萄糖和其他营养物质的培养基中。
将培养基倒入含有试样的培养皿中，并进行搅拌均匀。
然后，将培养皿盖好，使用适当的培养条件，如37℃温度和24小时培养时间，培养大肠杆菌。
4.鉴定大肠杆菌：在培养后，可以使用不同的方法鉴定大肠杆菌。
例如，可以通过形态学特征，如菌落形状、大小、颜色等，进行初步的鉴定。
然后，可以进一步进行生理和生化试验。
比如，可以使用氧化酚红在培养基中进行试验，观察菌落颜色变化，进行鉴定。
此外，还可以使用PCR方法进行分子鉴定，通过特定的引物和扩增反应，鉴定大肠杆菌的DNA序列。
5.菌落总数检测：除了检测大肠杆菌，还需要检测样品中的菌落总数。
菌落总数是指一定体积的试样中所有菌落的数量。
菌落总数可以用于评估样品的卫生状况和细菌污染程度。
检测菌落总数的方法包括传统的平板计数法和现代的膜过滤法。
6.平板计数法：平板计数法是最常用的菌落总数检测方法之一、方法是将试样平均分布在含有琼脂的培养皿中，然后在恰当的条件下培养细菌。
培养后，可以使用计数板或显微镜对菌落进行计数。
最后，根据计数结果和稀释倍数，计算出菌落总数。
菌落的测定和大肠杆菌总数ppt
三、实验步骤
1、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样包装打开，称取25g 豆豉， 放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玱璃三 角瓶内（瓶内预先置适当数量的玱璃珠），经充 分振摇做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁 徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸 管尖端丌要触及管内稀释液，下同），振摇试管 混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍 递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支 1ml灭菌吸管。
二、实验试剂不仪器
• 试剂：0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨 5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、 蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2 • 仪器：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三 角瓶、培养皿、普通试管、试管架、酒精灯、灭 菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玱璃蜡笔，灭菌枪 头。
四、实验结果不记录
10-1 10-2 10-3 报告数
1 2
稀释液对 照皿 空白皿
五、分析结果不存在的问题
豆豉中大肠菌群的计数
检测程序
一、实验原理
• 一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产 气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该 菌群主要来源于人畜粪便, 作为粪便污染指标评价 食品的卫生状况, 推断食品中肠道致病菌污染的可 能。食品中大肠菌群数系以没1 mL（g）检验内 大肠杆菌最可能数（the most probable number ，MP ①取10-4、10-5、10-6倍数稀释液，每个稀释度接种三 管单料月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管 接种1mL；同时每个稀释度接两管双料月桂基硫酸 盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种10mL。 36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产 生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底 逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h 和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌 群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。 注意：以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此 时为最终结果。
细菌总数与大肠菌群的测定.ppt
10-3无法计数
菌落计数的报告:
菌落数
报告结果
1、 30~300 之间
平均菌落数 X 稀释倍数
2、 (若有两个稀释度) 在30~300之间
求比值 > 2 取较小稀释倍数 < 2 取平均数
3、 > 300 最高稀释度平均菌落数 X 最高稀释倍数
4、 < 30 最低稀释菌度平均落数 X 最低稀释倍数
5、 > 300 < 30
稀释度选择及细菌总数报告方法
平均 菌落
稀释
数 倍数
例次
稀释液及菌落数 两稀释度 细菌总数(个/g或个/ml)
报告方式 (个/g或个/ml)
1
1,365 164
20 — 16，400 16，000或1.6×104
2
2,760
295 46
1.6 37，750 38，000或3.8 ×104
4. 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数 乘以稀释倍数报告之（见表例5）。
5. 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一 部分大于300或小 于30时，则以最接近30或300的平均菌 落数乘以稀释倍数报告之 （见表例6）。
6. 若所有稀释度的菌落数均不可计数，则以最高稀释倍数无法计数 报告之 （见表例7）。
实验八
细菌总数与大肠菌群的测定
一、细菌总数测定法 （操作，2人/组）
二、大肠菌群的检测 示教
1、细菌总数测定法 （操作，2人/组）
1.原理：
用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单位重量或体 积（g或ml）内所含有的活细菌数量，以判明被检物被 细菌污染的程度。
细菌学检验程序
细菌总数
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大肠杆菌及菌落总数检测方法
为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：
1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）
双料试管配制
A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制
A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）
B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。
C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml吸管取样品液体分别注入双料试管中
H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
二、菌落总数的测定
1、取平板计数琼脂23.5g与100ml灭菌后的蒸馏水混合均匀。
2、分别取15ml平板琼脂液到-1、-2、-3培养皿中，待培养皿液体凝固后将培养皿放入36℃±1℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、取出培养皿，用肉眼计数菌落总数。
实验基本完成。
注一：蒸馏水在高温灭菌121℃情况下进行30min灭菌。