免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上应用

用已知浓度的标准参考品建立标准曲线，测出待测抗 原的含量。
透射比浊法主要用于生化分析仪。
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透射免疫比浊
免疫复合物直径为35～lOOnm，这一范围要求近紫外光处 入射光发出最大的干扰(最大吸收峰)，选择290～410nm 波长测定最佳。
由于抗原抗体结合后在短时间内(<19s)只能形成小复合 物，无法进行比浊，需要等几分钟到数小时(>19s)形成 可见的复合物，才能进行比浊。
平光线 IC
光 射 散
θ
NEPHELOMETRIC DETECTOR
透射光+散射光
LIGHT SOURCE
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FILTER
REACTION CUVETTE
TURBIDIMETRIC DETECTOR
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透射还是散射
目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食 品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试 剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各 实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很 多不必要的医疗纠纷。
免疫胶乳浊度分析在自动生化分 析仪上的应用
免疫比浊回顾 免疫胶乳浊度分析（immunolatex turbidimetry） 在生化分析仪上进行测定的有关问题
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免疫比浊
免疫检测的基础
抗原抗体间的特异性反应
手工操作 核心—基础 自动化分析
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免疫比浊
免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测 法的基础上建立的。
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免疫比浊
1967年由Richie首次报告，20世纪70年代逐步完善， 80年代初期初步应用临床常规检查。
抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成 抗原抗体复合物，反应液出现浊度。
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免疫比浊
液相中抗原与抗体的反应结果与两者的浓度比例有关。 抗原或抗体显著过量时，都只能生成少量的可溶性免疫 复合物，分子极小，不适于免疫比浊法检测。
个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少。 c) 免疫微球凝聚的程度为被测物浓度的函数，由此可测
出标本中待测物的含量。
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(a)带抗体的胶乳在1个波长之内可透过光线
(b)结合后，则形成光线衰减
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
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免疫比浊
经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的 终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10 ～100mg/L）、不能自动化等缺陷。
根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光 度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫 沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药 品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器 和配套的各种检测项目的专用试剂。
透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。
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——全国临床检验操作规程 第3版
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透射还是散射
散射比浊
专用仪器 专用配套试剂 原装进口试剂昂贵
透射比浊
生化分析仪 开放试剂 （可用国产试剂）
a) 速率法和终点法测定； b) 速率法的灵敏度和特异性优于终点法；终点法
的稳定性较好；
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透射还是散射
目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异 性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要 胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应 用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起 了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。
为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4％聚乙二醇
(MW：6000～8000)，可使复合物形成在3～10min完成。
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
百度文库
比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成 浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物 ，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化 的要求。
免疫比浊技术要求溶液中抗体要保持中等过量，此时免 疫复合物（immunecomplex，IC）仍是可溶性的。
在这种情况下，抗原与抗体的反应遵循质量作用定律（ Ag+Ab＝Ag.Ab），形成IC的量是抗原或抗体的函数。
当抗体固定时，IC的量与抗原的量成正比。
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散射比浊、透射比浊 光路图
免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具
有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反
应动力学特点。
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透射免疫比浊
可溶性抗原与其特异性抗体，在一定缓冲液中形成的 复合物，经一段时间聚合后出现浊度，人射光在渗过 反应液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光减少，可用吸光度A表示。
为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶 乳浊度法（immunolatex turbidimetry）。
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
其基本原理是： a) 将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒
上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。 b) 单个胶乳颗粒在入射光波之内，不阻碍光线透过；两
最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立 的琼脂双向扩散法。
1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单 向（辐射状）免疫扩散技术。
Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的
时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。
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该技术的关键在于两个方面： 首先是选择适用的胶乳，其大小（直径）要稍小于
波长。用500nm波长者，选择100nm颗粒较适合；用 585nm波长者，则选用100～200nm颗粒为好。目前多 用200nm的胶乳颗粒。 其次，胶乳与抗体结合时用化学交联虽好，但失活 也较严重；一般用吸附法即可。
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