金黄色葡萄球菌的检测方法的ppt课件
合集下载
金黄色葡萄球菌的检验PPT课件
金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素 和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α 、β 、γ 、δ ，能损伤血小板， 破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2010 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%， 加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此 类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：
√存放温度，在37℃内，温度越高，产 毒时间越短；
√存放地点，通风不良氧分压低易形成 肠毒素；
√食物种类，含蛋白质丰富，水分多， 同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
• 7月2日，大阪府公共卫生研究所证实，从患 者饮用剩余的雪印牛奶中检查出了金黄色葡 萄球菌，这种葡萄球菌导致A型肠毒素滋生， 该毒素可造成饮用者腹泻、呕吐及全身不适。
• 牛奶被污染原因何在？
金黄色葡萄球菌检测方法ppt课件
如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固
体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
-
19
有无致病性的重 要指标
2）血浆凝固酶试验： 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培 养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进 行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性 1、形态与染色：(staphylococcus aureus)
G+，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下 排列成葡萄串状。
萄球菌的显微照片 色葡萄球菌的染色照片 色葡萄球菌的扫描电镜照片
附：
金黄色葡 金黄
金黄
金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
-
4
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长 良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛需氧或兼性厌氧，最 适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～15%NaCl肉 汤中生长。
-
5
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
-
6
2.2 葡萄球菌属（Staphylococcus）
生物学特性 1、形态与染色特性
G+，无芽孢、无鞭毛、无荚膜、不运动 2、培养特性： ① ② ③ ④ ⑤ 3、生化特性：MR阳性，V－P弱阳性，靛基质阴性…… 4、抵抗力
具有较强的抵抗力，80 ℃ 30min 5、抗原结构
蛋白抗原——表面抗原，无特异性。 多糖抗原——半抗原，有型特异性
-
3
实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
4
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
优选金黄色葡萄球菌ppt(共13张PPT)
证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。
•
b.试管凝集法。是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。如肥达氏反应就是诊断伤
寒、付伤寒的试管凝集试验。因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小时观察，血清最高稀释
而双向扩• 散多１用于、定血性试清验。学分型：
应常在用低 于温协• 和助通诊风断良某好些金的传条染葡件病下及水贮进藏行解食流，物行，病获以学防调得肠查毒。两素形种成抗； 原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 一一般般说 说，，• 金金黄黄色色葡葡萄萄蛋球球菌菌白可可通通抗过过原以以下下是途途径径凝污污集染染食食抗品品：：原，无特异性。
•
２、沉淀反应
•
可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为
沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。
•
１）环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗
做定量实验时，应稀释抗体。
•
１）直接凝集反应
•
颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。
•
a.玻片凝集法。是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即阳性反应，
微生物检测技术金黄色葡萄球菌检测(共35张PPT)
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起 的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
++++金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由
金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也 非常多。
4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
❖ 丙酮酸钠
10.0 g
❖ 甘氨酸
12.0 g
❖ 氯化锂 ❖ 琼脂
5.0 g
20.0 g
❖ 蒸馏水
950 mL
❖ 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL
检测步骤---分离
❖ BP平板：
❖ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元 素
❖ 丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂
❖ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌
检验前准备工作
采集与送检 预处理
菌落总数
大肠菌群
致病菌
前增菌
分离培养
纯化 多项鉴定及检测实验
分析、报告
食品微生物检验的一般程序
检测步骤---增菌
❖ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤
蛋白胨
牛肉膏 氯化钠
蒸馏水ห้องสมุดไป่ตู้
10.0 g
5.0 g 75 g
1 000 mL
型症状为呕吐和腹泻。 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
2．以下属于金黄色葡萄球菌的特点有——————
++++金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由
金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也 非常多。
4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
❖ 丙酮酸钠
10.0 g
❖ 甘氨酸
12.0 g
❖ 氯化锂 ❖ 琼脂
5.0 g
20.0 g
❖ 蒸馏水
950 mL
❖ 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL
检测步骤---分离
❖ BP平板：
❖ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元 素
❖ 丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂
❖ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌
检验前准备工作
采集与送检 预处理
菌落总数
大肠菌群
致病菌
前增菌
分离培养
纯化 多项鉴定及检测实验
分析、报告
食品微生物检验的一般程序
检测步骤---增菌
❖ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤
蛋白胨
牛肉膏 氯化钠
蒸馏水ห้องสมุดไป่ตู้
10.0 g
5.0 g 75 g
1 000 mL
型症状为呕吐和腹泻。 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
2．以下属于金黄色葡萄球菌的特点有——————
金黄色葡萄球菌的致病性及检测技术.pptx
死 • b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 • c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或
凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关
第3页/共15页
• d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄 色葡萄球菌
第11页/共15页
• 显色培养基A计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h，按说明 书判读，可疑菌落做补充实验（血浆凝固酶试验，目标菌落血浆凝固酶试验为阳性）。
• 显色培养基B计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h，按说明 书判读，可疑菌落做补充实验（滴加1 mol/L盐酸，目标菌落有透明圈）。
• e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、 C3、D、E及F八种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状 是呕吐和腹泻。
• 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
第4页/共15页
检测与诊断
萄球菌相鉴别。
第6页/共15页
鉴别实验 一、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用 是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。 血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的 纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产 生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转 化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。 具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关
第3页/共15页
• d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄 色葡萄球菌
第11页/共15页
• 显色培养基A计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h，按说明 书判读，可疑菌落做补充实验（血浆凝固酶试验，目标菌落血浆凝固酶试验为阳性）。
• 显色培养基B计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h，按说明 书判读，可疑菌落做补充实验（滴加1 mol/L盐酸，目标菌落有透明圈）。
• e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、 C3、D、E及F八种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状 是呕吐和腹泻。
• 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
第4页/共15页
检测与诊断
萄球菌相鉴别。
第6页/共15页
鉴别实验 一、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用 是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。 血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的 纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产 生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转 化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。 具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
金黄色葡萄球菌检验方法ppt课件
健康的小白鼠5522方法方法待检样品待检样品25g225ml25g225ml灭菌生理盐水灭菌生理盐水直接计数法直接计数法增菌培养方法增菌培养方法bairdbairdparkerparker琼脂平板琼脂平板75nacl75nacl肉汤培养基肉汤培养基血平板血平板血平板血平板涂片染色镜涂片染色镜溶血观察溶血观察动物接种试验动物接种试验血浆凝固试验血浆凝固试验报告报告6611样品的采集样品的采集称取25g25g火腿肠切碎搅匀用灭菌研钵研磨置于火腿肠切碎搅匀用灭菌研钵研磨置于250ml250ml锥形瓶中加入锥形瓶中加入225ml225ml灭菌生理盐水制成灭菌生理盐水制成11
.
6
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。 4、生化实验
①触酶试验 在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧 化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气 泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验 吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h 的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒 温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。 将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以 已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
.
1
简介
金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含90%的肽聚糖 和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密， 染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴 性菌的细胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以紫 色复合物被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球 菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金 黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现 了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代 表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结 构造成的。
.
6
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。 4、生化实验
①触酶试验 在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧 化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气 泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验 吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h 的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒 温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。 将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以 已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
.
1
简介
金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含90%的肽聚糖 和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密， 染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴 性菌的细胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以紫 色复合物被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球 菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金 黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现 了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代 表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结 构造成的。
金黄色葡萄球菌的检测方法的ppt课件
-
12
免疫学方法包括下面两个部分 （1）抗原抗体技术
（2）免疫学方法技术
-
13
（1）抗原抗体技术分析：
抗原抗体技术是免疫技术中的核心部 分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免 疫筛选抗体是很困难的事情，现在目 前市场有的大多都是对金黄色葡萄球 菌毒素类进行免疫得到的抗体
-
14
（2）免疫学方法技术分析：
上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层 析技术。
酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多 个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。
（酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法）
-15-源自16三 分子生物学方法
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶
金黄色葡萄球菌的检测方法
-
1
简介
一·生物学特性 （1）典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄 色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革 兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高， 在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧， 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板 上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
-
2
-
3
（2）血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有 高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、 麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反 应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐， 液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药 物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
1212金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗在免疫检测中可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特在免疫检测中可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原异抗原也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体两也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体两种方法均能判断机体的感染状况
金黄色葡萄球菌的检验(共27张PPT)
金黄色葡萄球菌的定性检验
检样
增菌〔7.5％氯化钠肉汤或 10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤〕
BP平板，血平板
涂片染色
观察溶血
报告
BHI肉汤和营养琼脂 血浆凝固酶实验
金黄色葡萄球菌的检验
1、样品制备
按无菌操作取检样25 g〔mL〕， 参加225 mL灭菌生理盐水，固体样 品研磨或置均质器中制成1:10样品
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和 乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数 量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。
人摄食该菌污染的食物2～3h后 可引起中毒病症，它引起的食
物中毒病症是呕吐和腹泻。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养
要求不高，在普通培养基 上生长良好，加少量葡萄
糖或血液生长更旺盛。需 氧或兼性厌氧，最适生长 温度37℃，最适生长pH 7.4
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、 蔗糖，产酸不产气。甲基红反响阳 性，VP反响弱阳性。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类 多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭 、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也 有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2021 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
细胞；
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时， 该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体外 表或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄
金黄色葡萄球菌的检验ppt课件
• 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌
株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，
在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球
菌的重要指标。
广东科贸职业学院
14
• 肠毒素形成条件：
• 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短； • 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； • 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉
• 致病性葡萄球菌血浆凝固酶为阳性
广东科贸职业学院
27
注意事项
• 样品中金黄色葡萄球菌计数进行10倍稀释时要注 意，每个稀释度要更换吸管
• 实验中操作者须注意生物安全防护
，实验结束后要消毒环境，把实验
室材料高压灭菌后方可清洗或弃之
。
广东科贸职业学院
28
思考题
• 金黄色葡萄球菌引起食物中毒的机理是什么？ • 为什么要采用血浆凝固酶实验来决定葡萄球菌的Leabharlann 广东科贸职业学院6
致病性
• 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死；
b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 ；
广东科贸职业学院
7
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该 酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或 凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成 的感染易局部化与此酶有关
实验六 金黄色葡萄球菌的 检验
Contents
生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群；
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做 到让客户满意！
.
22
致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、 PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各 类模板等方方面面，打造全网一站式需求
.
23
感谢您的观看和下载
The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field
.
10
二.免疫学方法 ※ 免疫学方法的基本原理都是抗原抗
体反应。
※抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合 反应。
.ห้องสมุดไป่ตู้
11
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗 体。
在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特 异抗原
也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两 种方法均能判断机体的感染状况。
金黄色葡萄球菌的检测方法
.
1
简介
一·生物学特性 （1）典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄 色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革 兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高， 在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧， 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上 菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析 技术。
酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个 样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。
（酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法）
.
15
.
16
三 分子生物学方法
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶
接种时间时细菌繁殖造成的污染。
.
8
Title
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas. Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas.
.
9
技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。
技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petri film 为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题： Petri film测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会 出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petri film测试片面积 较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中 含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致 计数偏低。
分子生物学方法的技术主要分为：聚合酶链式反应PCR技术 和实时荧光定量PCR（rtPCR）技术、生物芯片技术、测序技 术。
.
17
分子生物学检测技术由于检测方法复杂，需要仪器设备及专 业人员操作，对实验室环境有要求，检测成本高等因素，目 前该技术没有广泛应用。
通过不断的研究和总结金黄色葡萄球菌快速增殖的环境和条 件，在增菌液中进行扩增，使菌数达到胶体金的检测下限， 用胶体金方法检测，操作简单，不用任何实验室仪器设备， 检测试剂盒价格低廉，比较适合金黄色葡萄球菌检测初筛。
.
12
免疫学方法包括下面两个部分 （1）抗原抗体技术
（2）免疫学方法技术
.
13
（1）抗原抗体技术分析：
抗原抗体技术是免疫技术中的核心部 分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免 疫筛选抗体是很困难的事情，现在目 前市场有的大多都是对金黄色葡萄球 菌毒素类进行免疫得到的抗体
.
14
（2）免疫学方法技术分析：
.
24
.
4
.
5
检测方法 1.纸片法 2.免疫学方法 3.分子生物学方法 4.直接平板计数法
.
6
一.纸片法
目前广泛应用的一种方法
用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显 色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、 显色来测定食品中微生物。
.
7
采用快速测试片检测具有显著的优点：a.可测定少量检品，不 需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速 b. 易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；c.除纸片外 无其他任何废液废物，大大减少了工作量；d.可以在取样时 同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长
.
18
检测方法：将待检测食品取10g食物样品在10%NaCl溶液中涮 洗5次，加入增菌液增菌（配合37℃手持小仪器使用可缩短 增菌时间），加入菌裂解液摇匀，取3滴点板。结果判断如
下图示：
.
19
.
20
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
.
21
主要经营：网络软件设计、图文设计制作、 发布广告等
.
2
.
3
（2）血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高 度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、 麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反 应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐， 液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药
物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
.
22
致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、 PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各 类模板等方方面面，打造全网一站式需求
.
23
感谢您的观看和下载
The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field
.
10
二.免疫学方法 ※ 免疫学方法的基本原理都是抗原抗
体反应。
※抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合 反应。
.ห้องสมุดไป่ตู้
11
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗 体。
在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特 异抗原
也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两 种方法均能判断机体的感染状况。
金黄色葡萄球菌的检测方法
.
1
简介
一·生物学特性 （1）典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄 色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革 兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高， 在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧， 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上 菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析 技术。
酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个 样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。
（酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法）
.
15
.
16
三 分子生物学方法
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶
接种时间时细菌繁殖造成的污染。
.
8
Title
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas. Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas.
.
9
技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。
技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petri film 为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题： Petri film测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会 出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petri film测试片面积 较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中 含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致 计数偏低。
分子生物学方法的技术主要分为：聚合酶链式反应PCR技术 和实时荧光定量PCR（rtPCR）技术、生物芯片技术、测序技 术。
.
17
分子生物学检测技术由于检测方法复杂，需要仪器设备及专 业人员操作，对实验室环境有要求，检测成本高等因素，目 前该技术没有广泛应用。
通过不断的研究和总结金黄色葡萄球菌快速增殖的环境和条 件，在增菌液中进行扩增，使菌数达到胶体金的检测下限， 用胶体金方法检测，操作简单，不用任何实验室仪器设备， 检测试剂盒价格低廉，比较适合金黄色葡萄球菌检测初筛。
.
12
免疫学方法包括下面两个部分 （1）抗原抗体技术
（2）免疫学方法技术
.
13
（1）抗原抗体技术分析：
抗原抗体技术是免疫技术中的核心部 分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免 疫筛选抗体是很困难的事情，现在目 前市场有的大多都是对金黄色葡萄球 菌毒素类进行免疫得到的抗体
.
14
（2）免疫学方法技术分析：
.
24
.
4
.
5
检测方法 1.纸片法 2.免疫学方法 3.分子生物学方法 4.直接平板计数法
.
6
一.纸片法
目前广泛应用的一种方法
用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显 色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、 显色来测定食品中微生物。
.
7
采用快速测试片检测具有显著的优点：a.可测定少量检品，不 需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速 b. 易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；c.除纸片外 无其他任何废液废物，大大减少了工作量；d.可以在取样时 同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长
.
18
检测方法：将待检测食品取10g食物样品在10%NaCl溶液中涮 洗5次，加入增菌液增菌（配合37℃手持小仪器使用可缩短 增菌时间），加入菌裂解液摇匀，取3滴点板。结果判断如
下图示：
.
19
.
20
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
.
21
主要经营：网络软件设计、图文设计制作、 发布广告等
.
2
.
3
（2）血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高 度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、 麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反 应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐， 液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药
物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。