氧化对肌原纤维蛋白加工特性的影响_胡忠良

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度下降等。Saeed 等 总结了油脂氧化对肌肉蛋白 加工特性的影响, 氧化的脂肪酸会增加肌肉蛋白分子 的表面活性, 使蛋白质 发 生 变 性 解 折 叠 ( 氢 键 被 破 坏) , 内部活性基团暴露在分子表面导致分子间疏水
( 左) 肉中的主要蛋白质条带( 考马斯亮蓝染色) ; ( 右) 含有不同羰基 含量的蛋白质免疫印记图谱( DNP 标记) 。泳道 2 和 5 为全肉匀浆 泳道 3 和 6 为水溶性组分, 泳道 4 和 7 为盐溶性组分, 泳道 1 为 组分, 标准蛋白( Marker) 。泳道 2 ~ 4 中的蛋白样品中含有 DNPH。
食品与发酵工业
FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
氧化对肌原纤维蛋白加工特性的影响
1 2 1 1 胡忠良 , 严璐 , 邹玉峰 , 徐幸莲
*
1 ( 南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室 , 210095 ) 江苏 南京, 2 ( 南京农业大学食品科技学院生物工程专业 , 210095 ) 江苏 南京, 摘 要 文中综述了氧化对肌原纤维蛋白加工特性影响的最新研究进展 , 包括肌肉蛋白质的具体氧化情况和氧
系中, 随着亚油酸浓度增加, 只有半胱氨酸和甲硫氨 MetMb / H2 O2 浓度增加, 酸显著下降; MOS 体系中, 则 丙氨酸、 半胱氨酸、 甘氨酸、 组氨酸、 亮氨酸、 赖氨酸都 减少, 而氨基酸总量也减少。 由此推测, 肉糜加工时 肌原纤维蛋白氧化主要是通过过渡金属离子和高铁 肌红蛋白激活实现的。 蛋白质的凝胶、 乳化等加工特性, 是通过溶解状 态的蛋白质分子间形成不同模式的交联实现的 。 不 同的氧化路径对蛋白质分子间交联模式的影响可能 存在很大差异, 因此对加工特性也会产生不同的影 响。Xiong 等 研究了 3 种氧化体系对猪肉肌原纤 维蛋白分子结构和化学键的影响。 IOS 和 MOS 氧化
2011 年第 37 卷第 10 期(总第 286 期)

研究认为氧化的油脂能够与蛋白质形成蛋白 油脂结 合产物, 引起氨基酸破坏、 肽链降解、 蛋白聚合、 溶解
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食品与发酵工业
FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES 大多数文献表明, 氧化不利于肌原纤维蛋白形成 [14 ] 良好质构及保水性的凝胶。 Decker 等 研究了氧 盐 化( IOS) 对火鸡肉白肌肌原纤维蛋白的羰基含量、 蛋白质交联, 以及热凝胶形成后的凝 溶性( 溶解度) 、 胶质构和保水性的影响。结果显示, 氧化过程中羰基 含量持续增加, 蛋白质溶解度 / 被提取率显著下降, 凝 胶强度、 凝胶保水性也显著下降。 变性电泳结果表 明, 氧化后盐溶性组分中的肌球蛋白和肌动蛋白大量 损失, 伴随着很多不溶解的蛋白聚合体的形成 。 但是也有研究发现, 氧化并不一定降低肌原纤维 Snider 等 研究发 蛋白的加工特性。 早在 1972 年, 现温和氧化有利于蛋清蛋白的聚集, 提高其凝胶特 性。他们 据 此 认 为, 氧 化 有 利 于 蛋 白 的 加 工 特 性。 [16 ] Wan 等 研究发现, 肉糜加入抗氧化剂( 0. 02% 没食 0. 2% 抗坏血酸钠和 0. 2 % 三聚磷酸钠 ) , 子酸丙酯、 可有效抑制冷藏期间的肌原纤维蛋白氧化 , 但是盐溶 — —冷藏 5 ~ 8 d 时对照组 性蛋白含量下降速度加快— 的可溶性蛋白含量为 36% 左右, 而加入抗氧化剂组
A 和图 1C 为刚屠宰的肉样 ( 几乎没有发生氧化 ) , B 图 1图 1D 为贮藏后的肉样( 发生了氧化) 。图 2 中标示的蛋白分 和图 1原肌球蛋白 ( TM) 、 肌动蛋白 ( A) 。 别为肌球蛋白重链 ( MHC) 、
图2
盐溶性蛋白组分的双向电泳结果 ( A,B) 和羰基 免疫印记结果( C,D)
[8 ]
交联等进一步的反应, 引起蛋白结构和功能的破坏。 氧化油脂中的羰基基团, 会参与共价交联, 形成稳定 的蛋白 - 脂肪聚集体。Schaich 等 交联存在 2 个基本路径:
[9 ]
认为油脂蛋白
图1
PAGE 电泳结果和含有 肌肉蛋白质 SDS羰基的蛋白质条带的免疫印记结果
Stagsted 等[6]采用免疫标记和蛋白组学技术研究 了鸡肉中蛋白的氧化修饰情况, 发现水溶性蛋白中, α烯醇酶是主要的羰基活性蛋白, 其他如肌动蛋白, 热休 克蛋白, 肌酸激酶, 也很容易被氧化修饰。但是, 羰基 含量远低于盐溶性蛋白中的肌球蛋白等组分。 生肉中不同蛋白的氧化程度并不相同 , 说明氧化 存在蛋白特异性, 而最容易被氧化的就是以肌球蛋白 为主的肌原纤维蛋白。 1. 2 肉糜中蛋白质的氧化路径 肉糜中很多介质都可以引起蛋白质氧化。 之前 的研究( 上世纪 80 年代和 90 年代 ) 一般认为, 肉糜 中的油脂尤其是不饱和脂肪酸非常容易发生氧化 , 油 脂氧化是引起蛋白质氧化的主要途径。 Smith
[1 ]
制品中关于这方面的研究主要为 : 肉中容易氧化的蛋 白质种类及氧化路径。 1. 1 凝胶 & 乳化类肉制品中的蛋白质氧化 肌肉中蛋白质占 18% ~ 20% , 肌肉蛋白分为很
。研
多种, 每一种蛋白质的氨基酸序列和高级结构差异较 大, 对凝胶或乳化的贡献也不同。研究氧化对蛋白质 加工特性的影响就需要了解具体蛋白质的氧化情况 , 以便确定氧化的蛋白在肌纤维结构中的具体定位 , 以 以阐明氧化对肉糜体系中肌肉蛋 及氧化的具体类型, 白凝胶、 保水、 乳化特性的影响机制。 Astruc 等[3]采用荧光显微镜对牛肉 ( 腹直肌 ) 肌 细胞中的蛋白氧化进行了原位检测。 同时对肌原纤 维蛋白和膜蛋白的氧化情况进行对比 。结果表明: 随 贮藏时间延长, 荧光含量显著增 着氧化剂浓度升高、 — —细胞外围的羰基含 加, 而且羰基分布非常不均匀— 量高, 细胞内部含量少。烹饪只引起细胞外围的荧光 增加。胶原蛋白的染色结果表明, 胶原蛋白没有荧光 细胞外围的蛋白氧化, 应该是膜蛋 发出。据此推测, 白的氧化, 而不是结缔组织氧化。细胞内主要是肌原 纤维蛋白发生了氧化, 而且肌纤维结构破坏后 ( 模拟 绞碎、 滚揉、 斩拌等加工工序 ) , 肌原纤维蛋白的氧化 程度远高于膜蛋白。 Kjrsgrd 等人[4]采用分馏以及双向电泳的方法 检测生肉在贮藏过程中的蛋白氧化情况。 肌肉蛋白 分别检测羰基, 再进行电泳并结合免疫印 被分馏后, PAGE 或 2DGE 分离。 羰基检测的研究 迹, 以 SDS对象为全肉匀浆液、 盐溶性组分 ( 主要是肌原纤维蛋 白) 、 水溶性组分 ( 主要是肌浆蛋白 ) , 结果见图 1 和 图 2 。在整个贮藏阶段, 不管是盐溶性还是水溶性的 蛋白组分, 羰基含量都呈增加趋势。但是盐溶性蛋白 组分的羰基含量远高于水溶性蛋白组分 , 说明贮藏过
究表明, 蛋白质氧化是导致肉类食品品质下降的重要 尤其是经过绞碎、 滚揉或斩拌工序的产品, 如肉 原因, 糜类、 碎肉类和重组类肉制品。 从加工原理的角度, 称这类容易发生蛋白质氧化的产品为凝胶 & 乳化类 肉制品。 与油脂氧化不同, 食物中的蛋白质氧化并不完全 对身体健康有害。蛋白质适度氧化后, 更容易被人体 消化器官产生的蛋白酶作用, 有利于人体对小肽和氨 基酸等营养物质的消化吸收
[17 ] [15 ]
的氧原子与氨基酸的活性氮原子或硫原子也可以通 过氢键作用形成蛋白氢过氧化物 , 引起蛋白自由基的 导致其他蛋白质等生物分子进一步氧化 。 链式反应, 但是最近 10 年的研究发现, 肉糜中蛋白质的氧 化并非完全是由油脂氧化引起的。 Park 等 模 拟了肉糜中主要存在的 3 种氧化体系: 铁激活 / 羟自 由基氧化 体 系 ( IOS: 10 mmol / L FeCl3 ,0. 1 mmol / L 0. 05 ~ 5. 0 mmol / L H2 O2 ) ; 亚油酸氧化体 抗坏血酸, 3 750 U / mL 的脂 系( LOS: 0. 05 ~ 5. 0 mmo / L 亚油酸, 肪氧合酶 ) ; 高 铁 肌 红 蛋 白 氧 化 体 系 ( MOS: 0. 05 ~ 0. 5 mmol / L 高铁肌红蛋白 / H2 O2 ) 并进行了系统研 究, 希望阐明引起肉糜肌原纤维蛋白氧化的主要路 3 种氧化体系中的 CaATPase 和 K径。研究发现, ATPase 酶活损失相似, 而且都在低浓度氧化剂时损 IOS 失就较大; MOS 组的肌原纤维蛋白羰基含量高, ( TBARS ) 、 组的硫代巴比妥酸值 高 热转变温度值变 MHC 条带损失多。 随后该课题组利用反相 化剧烈、 液谱研究了 3 种氧化体系条件下猪肉肌原纤维蛋白
[2 ]
。 而近几年关于肌肉
蛋白加工特性的研究也发现, 并不是所有的蛋白质氧 化都会降低蛋白质的加工特性, 合适条件下的氧化可 以改善或提高其加工特性, 文中即对此进行了综述。
1
肌原纤维蛋白容易发生氧化
肉本身含有很多氧化介质, 如不饱和脂肪酸、 亚
铁血红素铁、 过渡金属离子等, 在粉碎、 滚揉或斩拌 时, 容易受分子氧和催化介质的作用, 引起氧化。 之 前的研究多侧重脂肪氧化, 因其会引起风味的劣变。 随着研究的深入, 人们发现蛋白质也容易被氧化, 而 且对产品品质的危害更严重, 目前在凝胶 & 乳化肉
Email: xlxu@ 第一作者: 硕士研究生 ( 徐幸莲教授为通信作者, njau. edu. cn ) 。 * 国家自然科学基金资助项目 ( No. 31171707 ) 收稿日期: 2011 - 06 - 13 , 改回日期: 2011 - 09 - 14
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2011 Vol. 37 No. 10 ( Tota l 286 )
[7 ]
PH 为蛋白质, LOOH 为油脂氢 其中 LH 为油脂, RO·为过氧自由基。油脂氧化产物 ( 油脂 过氧化物, 氢过氧化物、 挥发性的二级产物 ) 或其降解 自由基、 ( , 产物 丙醛 氨基基团等) 容易与蛋白质结合, 形成蛋 , 白质 氧化油脂复合体 随后发生自由基的转移。 自 由基主要通过 2 种方式转移 ( 以油脂氢过氧化物为 例) : 第 1 种, 油脂氢过氧化物脱氢 ( 生成 LOO · 和 LO·) , LOO· 夺取蛋白质活性氨基酸的氢原子, 发 生自由基的转移( 得到产物 ( a ) ) ; 第 2 种, 油脂氢过 氧化物在活性氨基酸附近发生歧化 ( 生成 LO · 和 · OH) , LO·夺取蛋白质活性氨基酸的氢原子, 发生自 。此外, 得到产物( b) ] 油脂氢过氧化物 由基的转移[
[12 ] IOS 体系中, 的氨基酸氧化情况 , 随 H2 O2 浓度增 高, 半胱氨酸、 蛋氨酸、 酪氨酸含量显著下降; LOS 体 [10 - 11 ]
可溶 性 蛋 白 含 量 仅 为 30% ( 图 3 ) 。 Srinivasan 等 发现抗氧化剂 ( 0. 02% 没食子酸丙酯或 0. 2% 的
综述与专题评论
程中主要是盐溶性组分的蛋白发生了氧化 。 虽然肉 中的蛋白质种类有很多, 但是图 2 的结果表明只有较 少数目的几种蛋白发生了氧化 ( 盐溶性组分里主要 不同种 有 6 种蛋白发生氧化 ) 。 而且在氧化过程中, 类蛋白质氧化程度的差异也非常大。 氧化信号最强 的是 200 ku 的条带, 经分析为肌球蛋白重链; 其次是 37 ~ 57 ku 的条带, 经分析为原肌球蛋白和肌动蛋白 。 Morzel 等[2]对氧化后的猪肉肌原纤维蛋白进行电泳 后发现, 肌球蛋白重链是猪肉肌原纤维蛋白中最容易 氧化的蛋白, 除此之外, 图 1 ( 右 ) 中泳道 2 和泳道 4 的 97 ~ 200 ku 之间的羰基印迹, 推测可能是肌球蛋 [5 ] 白重链的降解片段。 因为之前已有研究 表明, 鸡 胸肉肌球蛋白重链氧化后会发生降解 , 降解的碎片分 子质量大小即在 97 ~ 200 ku 范围。
以及氧化对肌原纤维蛋白热凝胶的质构 、 保水和乳化特性的作用 , 并从分子构象、 分子间化学作用力 ( 交 化路径, 联类型和交联程度) 、 肌纤维结构的变化推测矛盾作用产生的原因 。 关键词 肌原纤维蛋白, 氧化, 凝胶, 乳化, 保水性
随着健康意识的增强, 人们对食品食用品质和 安全性的要求越来越高。 肉类食品是人体所需优质 蛋白质的主要来源, 更是人们日常生活中不可缺少的 流通和贮藏过程中, 不可避免地受 食品。肉在加工、 光、 射线、 氧、 水分和催化剂等外界环境的影 到温度、 响, 导致脂肪和蛋白质等营养成分发生氧化
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