不同分类鉴定方法在益生菌菌株研究中的应用
发酵食品中益生菌菌种的筛选和优化方法研究
发酵食品中益生菌菌种的筛选和优化方法研究发酵食品是一种通过微生物发酵作用来制造的食品，它具有多种益处，例如提高营养价值、改善食品口感和延长保质期等。
发酵食品中广泛存在着一种特殊类型的微生物，即益生菌。
这些益生菌，可以在人体内产生有益的生物活性物质，对维护肠道健康、增强免疫力等方面起到重要作用。
因此，对益生菌菌种的筛选和优化方法的研究具有很大的实际意义。
益生菌菌种的筛选是发酵食品中益生菌菌种的最初选择阶段。
要求所筛选出的菌种具有以下特点：1）对人体安全无毒。
2）能够在食品基质中良好地存活和繁殖。
3）对于食品材料具有优良的功能特性。
4）具有良好的抗性能力，能够在发酵过程中抵抗食品基质中的不良微生物的侵入。
目前，益生菌菌种的筛选方法主要有以下几种。
首先是传统的筛选方法。
这类方法主要是通过纸片对菌株的形态、生长特点等进行观察和鉴定。
但是，这种方法只能从表面上观察微生物型态，对于有些菌种来说，传统的方法很难有效区分。
第二种是生理和生化方法。
这类方法主要通过菌株的生理和生化特性来判断和筛选。
如菌株的耐受性能力、酶活性、细胞物质代谢能力等。
通过这些特性的判断，可以初步了解菌株的优异性。
第三种是遗传和分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，逐渐应用到益生菌菌种的筛选中。
通过分析菌株的基因组、基因表达和代谢途径等，可以深入了解益生菌菌株的特点和功能。
特别是PCR技术的发展，可以快速准确地检测和筛选出具有益生菌功能的菌株。
优化方法是指通过改变发酵条件来提高益生菌发酵食品生产的效果。
目的是尽量减少有害微生物的生长，提高益生菌的生长速度和产酸能力，增强其功能特性。
具体优化方法如下：首先是调整发酵条件。
发酵条件包括温度、pH值、发酵时间等因素。
通过调整这些条件，可以改变微生物的生长环境，进而改变微生物的生理代谢过程，提高益生菌的生长速度和产酸能力。
第二种是添加培养基的改良剂。
培养基的改良剂主要是指添加有益菌株生长的微量元素、抗生素等。
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法益生菌的检验是非常重要的，可以通过多种方法进行检测。
以下是50种关于益生菌检验的检测方法，并对每种方法进行详细描述：1. 大肠杆菌计数法：采用琼脂平板法或膜过滤法，通过菌落计数的方法对益生菌进行检测。
该方法主要适用于大肠杆菌等益生菌的检测。
2. PCR法：通过聚合酶链式反应（PCR）检测益生菌的DNA序列，从而确认益生菌的存在和数量。
3. 荧光定量PCR法：利用荧光探针和PCR技术，对益生菌进行快速、准确的检测和定量。
4. 酶联免疫吸附法（ELISA）：利用特异性的抗体和酶标记技术，对益生菌进行免疫学检测。
5. 生物传感器法：利用生物传感器对益生菌的生理特性进行监测和检测。
6. 过氧化氢测定法：通过测定样品中过氧化氢的含量，间接检测益生菌的存在和活性。
7. 气相色谱法：通过气相色谱仪对益生菌代谢产物进行分析，以确定益生菌的种类和数量。
8. 超高效液相色谱法（UPLC）：利用超高效液相色谱技术对益生菌中的活性成分进行定量分析。
9. 电化学方法：利用电化学传感器对益生菌的代谢产物进行检测，实现对益生菌活性的快速监测。
10. 微流控技术：结合微流控芯片和检测设备，对益生菌进行高通量、高灵敏度的检测。
11. 潜热法：通过测定益生菌样品的潜热变化，间接确定其生长和代谢活性。
12. 毛细管电泳法：利用毛细管电泳技术对益生菌进行成分分析和检测。
13. 红外光谱法：通过红外光谱技术对益生菌样品进行特征光谱分析，从而确定其种类和数量。
14. 质谱法：利用质谱仪对益生菌样品进行分子质量分析，确定其成分和结构。
15. 拉曼光谱法：通过拉曼光谱技术对益生菌进行非破坏性的快速检测和鉴定。
16. 磁性生物纳米颗粒法：利用磁性生物纳米颗粒对益生菌进行富集和检测。
17. 液相色谱质谱联用法（LC-MS）：结合液相色谱和质谱技术对益生菌进行成分分析和定量检测。
18. 微波辐射法：利用微波辐射技术对益生菌样品进行快速灭菌和检测。
菌株分类及其应用
菌株分类及其应用随着科学技术的不断发展，人类对于微生物的研究越来越深入，而菌株分类也成为了微生物学研究中的重要一部分。
菌株分类是指将微生物按照共同特征和遗传关系进行分类，帮助我们更好地理解菌类的特性和应用。
在本文中，我们将会探讨菌株分类及其应用。
一、菌株分类的意义菌株分类的主要意义在于帮助人们更好地了解菌类的特性和应用。
通过对菌株进行分类，我们可以更好地理解菌类的遗传关系和基因组特点，推进生物技术的研究和应用。
此外，菌株分类也有助于微生物的监测和管理，对于控制疾病和保护环境都有很大的作用。
二、菌株分类的基本原理菌株分类的分类方法有很多种，其中基于形态学、生理学和生物学等方面的分类较为常见。
而现代生物技术的发展，使得菌株分类的分类方法也变得更加精确和科学化。
下面我们来介绍一些常见的菌株分类基本原理：1. 形态学分类形态学分类主要是通过观察菌体的形态、大小、颜色、芽胞的形成情况和分布方式等特征对菌株进行分类。
这种分类方法主要适用于无法通过其它基因毒标识进行分类的微生物，如细菌。
2. 生理学分类生理学分类主要是通过对菌株的代谢性质等生物学特征进行分类，如酶活性、代谢途径和产物等。
这种分类方法在微生物中应用较广，对于菌株的分类和组成有很大帮助。
3. 生化分类生化分类主要是通过对菌株的含有的化学物质分析，如酶、多糖和脂质等，进行分类。
这种分类方法可以对菌株的物质特征进行详细分析，为其它分类方法提供基础数据。
4. 分子生物学分类分子生物学分类主要是通过菌株的基因组分析，如16S rRNA 序列分析，进行分类。
这种分类方法可以更加精确地了解菌株之间的遗传关系和基因型，为微生物的研究提供很好的基础数据。
三、菌株分类的应用菌株分类是微生物学研究中的重要一环，而分类的结果也有很多实际应用。
下面我们来介绍一些菌株分类的应用场景：1. 工业应用菌株分类的结果对于微生物工业的研究有着非常重要的作用。
通过对菌株进行精准分类，可以更好地了解菌株的基因组特点和代谢途径，从而帮助研发新的微生物发酵工艺和高效工业菌株的筛选。
益生菌的精准筛选与应用
益生菌的精准筛选与应用目录一、益生菌概述 (2)1.1 益生菌的定义 (2)1.2 益生菌的生理功能 (3)1.3 益生菌的研究意义 (4)二、益生菌的筛选方法 (5)2.1 传统筛选方法 (6)2.1.1 纯培养法 (7)2.1.2 分离筛选法 (9)2.2 高通量筛选技术 (10)2.2.1 基因芯片技术 (11)2.2.2 质谱技术 (12)2.3 代谢组学筛选方法 (13)三、益生菌的应用领域 (15)3.1 食品工业 (16)3.1.1 酸奶及乳制品 (17)3.1.2 功能性食品 (18)3.2 医药领域 (20)3.2.1 抗生素替代品 (21)3.2.2 微生物制剂 (22)3.3 农业领域 (24)3.3.1 生物肥料 (25)3.3.2 生物农药 (26)四、益生菌的精准筛选与个性化应用 (27)4.1 个体化营养支持 (29)4.2 疾病预防与治疗 (29)4.3 药物协同作用研究 (30)五、益生菌研究与发展趋势 (31)5.1 新型菌种的发现与培育 (33)5.2 功能性评价方法的优化 (34)5.3 终端产品的创新与开发 (36)一、益生菌概述益生菌是一类对人体有益的活性微生物，它们主要存在于肠道、生殖系统以及口腔等部位。
这些微生物与人体之间存在着一种共生关系，通过相互促进、相互制约等方式来维持人体的健康状态。
益生菌的主要功能包括：增强免疫功能、维护肠道屏障、保护肠道黏膜、调节肠道菌群平衡、促进营养物质的吸收、抑制有害菌的生长等。
益生菌在预防和治疗一些疾病方面具有重要的应用价值。
随着科学技术的不断发展，人们对益生菌的认识不断深入，已经研发出多种益生菌制剂，如益生菌胶囊、益生菌粉、乳酸菌饮料等。
这些产品在临床实践中得到了广泛应用，对于改善肠道健康、提高人体免疫力等方面取得了显著的效果。
目前市场上益生菌产品的质量参差不齐，消费者在选择时需要注意产品的来源、生产工艺、有效成分及含量等信息。
微生物学研究中的菌株分类与鉴定
微生物学研究中的菌株分类与鉴定微生物学是一门非常重要的学科，它涵盖着人类健康、环境保护、食品与药物研发等多个领域。
而微生物的分类与鉴定是微生物学中最为基础、重要的内容之一。
本文将从微生物的分类与鉴定方法、菌株分类的意义以及菌株分类的局限性等方面进行探讨。
一、微生物的分类与鉴定方法微生物分类与鉴定的方法可以分为经典和现代两大类。
经典方法主要包括形态学、生理生化和生态学方法。
其中，形态学方法主要基于微生物的细胞形态、大小、结构等特征进行分类。
生理生化方法主要基于微生物的代谢特征进行分类。
而生态学方法则是结合微生物的生存环境等特征进行分类。
这些方法在微生物学的早期发挥了非常重要的作用，但随着科技的进步，这些方法的局限性越来越明显。
现代方法则主要包括分子生物学、生物芯片技术和基于计算机的分类与鉴定方法等。
其中，分子生物学方法是最为常用的现代方法之一。
这种方法主要基于微生物的基因序列进行分类与鉴定。
利用PCR技术、测序技术等手段可以获得微生物基因序列，再利用生物信息技术对序列进行分析和比对，从而确定微生物的分类与鉴定。
这种方法准确性高、速度快、灵敏度高，被广泛应用于微生物学的研究与应用当中。
除此之外，还有一些新兴的技术如微生物核酸扩增技术、质谱技术等正在逐步应用到微生物分类与鉴定当中。
二、菌株分类的意义菌株分类是微生物分类鉴定中的一个重要环节。
菌株是指从不同的生物体中分离出来的微生物，是微生物分类、研究和应用中最基本的单元。
正确地鉴定与分类菌株具有极其重要的意义。
首先，菌株分类可以建立微生物物种的分类体系，为微生物间的相关研究提供基础。
其次，菌株分类是微生物资源的管理与保护的基础。
对于有用微生物资源，如产酶、产生抗生素等微生物菌株，通过正确的鉴定与分类来就能够更好地保护和应用这些资源。
最后，菌株分类也是微生物学研究中重要的品质控制要素。
不同的菌株具有不同的生物特性，样品或制剂中不同的菌株掺杂或混杂可能会导致质量不稳定，甚至损害人体健康。
生物信息学在益生菌筛选中的应用评估
生物信息学在益生菌筛选中的应用评估随着人们对保健意识的提高和对肠道健康的认识逐渐加深，益生菌的应用也越来越广泛。
益生菌被认为可以调节肠道菌群，改善免疫系统功能，降低肠道炎症等多种作用。
因此，如何筛选出高效的益生菌，成为了当前研究的热点。
生物信息学技术的出现，为益生菌筛选提供了一种新的思路和方法。
生物信息学是将计算机科学和生物学相结合的交叉学科，涉及到大量的数据挖掘、信息管理、模式识别、生物网络分析等领域。
在益生菌筛选中，生物信息学技术主要通过分子生物学、基因工程、微生物学等学科的知识和理论，对益生菌的遗传、代谢、生态等多个方面进行研究。
生物信息学技术在益生菌筛选中的应用，主要表现在以下三个方面：1. 借助基因工程技术对益生菌进行优化改良基因工程技术可以实现对益生菌菌株的基因组，包括DNA序列、RNA序列、蛋白质序列等方面，进行系统分析和优化改良。
通过生物信息学技术对益生菌菌株的基因组信息进行大规模深度分析和全局比对，可以找出与特定功能相关的基因，识别目标基因的启动子、转录因子结合位点、转录因子等关键元素，进而改造、调控或拟合这些元素，提升益生菌的产酸、抗菌或降脂等功能。
举例来说，在榨菜生产过程中，由于榨菜切割时的不洁，容易引起微生物污染，产生腐败。
因此，研究人员构建了一株工程益生菌，它能够产生一种寡糖，能够识别和粘附在榨菜表面的细菌上，从而使榨菜保持清洁和新鲜。
2. 应用元基因组学分析益生菌的生态系统益生菌的生态系统主要包括肠道适应性、菌株遗传变异、代谢能力、生长速度、抗菌能力等要素。
元基因组学分析可以帮助研究者更好地理解益生菌的生态系统，尤其是对益生菌与宿主肠道的共生关系的解析。
通过分析不同益生菌在人体肠道内的定殖情况和生态分布模式，也可以筛选出更符合人体肠道状况的益生菌。
比如，研究人员对克劳伯卡菌属的30个不同种类的菌株进行了元基因组分析，发现它们不仅能够下调机体炎症反应基因，还能够增加人体肠道内的有益菌量，提高整体健康水平。
功能性菌株的筛选与应用
功能性菌株的筛选与应用随着科技的进步，人们对微生物的认识也越来越深入。
除了我们熟知的病原菌和益生菌外，还有一类被人们称之为“功能性菌株”的微生物。
这些微生物不具有致病性，却有一定的生物活性，可以为人类带来许多的好处。
本文将介绍功能性菌株的筛选和应用。
一、功能性菌株的筛选功能性菌株是指那些可以产生对人体有益生理效应的微生物。
这些菌株可以来自于不同的生物体，如人类肠道内的菌群、发酵食品中的菌群等。
筛选出优秀的功能性菌株是非常重要的，因为只有具有较高生物活性的菌株才能为人们的健康带来益处。
1.1 筛选方法目前，功能性菌株的筛选方法主要有以下几种：（1）体外筛选法体外筛选法是指利用体外实验对菌株进行生物活性测定，然后挑选出优秀的菌株。
这种方法常用的实验包括抗氧化能力、免疫调节能力和抗菌活性等。
在这些实验中，可以通过比较菌株之间的差异来确定具有优秀生物活性的菌株。
（2）体内筛选法体内筛选法是指将菌株直接应用于动物模型中，并检测生物活性。
这种方法具有更强的现实意义，因为在动物体内测试可以更好地模拟人体内环境。
但是，体内筛选法的缺点是成本较高，需要复杂的操作和严格的伦理审核。
（3）分子筛选法分子筛选法是指通过检测菌株的遗传信息来鉴定具有生物活性的菌株。
这种方法适用于那些已知的具有生物活性的基因型，可以在大量菌株中进行高效筛选。
1.2 筛选指标对于功能性菌株的筛选，也需要遵循一些指标。
这些指标的主要目的是评估菌株的生物效应。
常见的指标包括：（1）产生细菌素产细菌素是指菌株本身能够分泌出具有细菌抑制作用的物质。
这种细菌素可以抑制某些有害菌的生长，同时不会对有益菌造成影响。
因此，功能性菌株应具有一定的产细菌素能力。
（2）产生胆固醇酯酶胆固醇酯酶是一种可以加速胆固醇分解的酶。
因为胆固醇是导致动脉硬化和心血管疾病的主要因素之一，因此具有产生胆固醇酯酶能力的功能性菌株尤为重要。
（3）免疫调节作用免疫调节作用是指菌株可以调节人体免疫系统的功能。
食品中益生菌的筛选与鉴定
食品中益生菌的筛选与鉴定随着人们对健康的关注不断增加，益生菌在食品行业中的应用越来越受到重视。
益生菌是一类有益于宿主健康的微生物，可以通过改善肠道菌群平衡，增强免疫力，促进食物消化吸收等方式对人体产生积极的作用。
食品中益生菌的筛选与鉴定，对于开发出高质量的益生菌产品具有重要意义。
首先，在食品中筛选出适合的益生菌菌株是关键。
一般来说，益生菌菌株在筛选过程中需要具备以下特点：首先，耐酸耐胆盐能力强，因为要经过胃酸和胆盐的作用才能到达肠道，具备良好的存活性才能发挥益生菌的作用；其次，具有较强的附着能力，能够粘附在肠道粘膜上，因为只有附着在肠道上才能产生作用；再次，对益生菌菌株不会引起人体过敏或不良反应，安全性是非常重要的。
通常通过体外实验，如对益生菌菌株的胃酸和胆盐耐受性的测试，以及对细胞附着能力和粘附相关基因的表达研究等方式进行筛选。
其次，对益生菌的鉴定是继筛选之后的重要步骤。
益生菌的鉴定是通过分子生物学技术来完成的。
其中，常用的方法包括16S rRNA基因测序、多重PCR、荧光原位杂交等。
16S rRNA基因测序是最常用的方法，可以通过测序分析得到菌株的种属、亚种信息，比较菌株之间的差异；多重PCR技术可以对菌株的代谢基因进行检测，进一步证明其真实性和功能特点；荧光原位杂交是通过标记的DNA探针与目标DNA序列结合来确定益生菌的存在与丰度。
这些鉴定方法可以准确地确定益生菌的种属和属下分类，从而对其功能和特性进行研究。
除了筛选和鉴定，益生菌在食品中的应用也需要注意其他因素。
首先，益生菌的保活性是一个关键问题。
在食品中，益生菌菌株需要具备较长的保质期，在食品加工、储存和运输过程中能够维持较高的存活率。
对于一些较为脆弱的菌株，可以采用微胶囊保护和冷冻保存等方式来增强其稳定性。
其次，在食品中的适宜数量也是需要考虑的。
益生菌的数量不能过少，以免无法发挥其益生作用；同时也不能过多，避免对人体产生不良反应。
最后，对于食品中的益生菌产品，需要进行一定的质量监控。
菌株的鉴定与分类方法的研究
菌株的鉴定与分类方法的研究随着科技的发展，微生物的研究在生物学中占据越来越重要的地位。
微生物有着重要的生物学意义，对环境污染、人类健康、农业生产等方面都产生着重要影响。
在微生物资源开发、应用技术、生态保护等方面，微生物的鉴定分类显得尤为重要。
菌株的鉴定是微生物系统学中最基本最重要的研究内容，是解决微生物命名、分类、应用和研究各个方面的基础。
微生物的鉴定分类方法通常是基于形态学、生理生化特征，分子生物学技术以及基因组学等方面的研究。
下面将重点介绍这些分类方法以及在微生物资源开发、应用以及研究中的具体应用。
形态学鉴定形态学鉴定是微生物学中普遍采用的一种鉴定方法。
通过形态学鉴定可以获取微生物在形态、大小、颜色、结构等方面的特征，从而进行分类鉴定。
这种方法对于一些外部特征明显的微生物，如真菌、细菌等具有一定的可操作性。
但是，形态学鉴定的局限也很明显，虽然外部特征透露出了微生物的表面特征，但并不能准确描述其内部特征及细胞功能，同时有些微生物的形态、大小、结构等特征也并不明显或者生物伪装而难以进行鉴定。
生理生化特征鉴定生理生化特征鉴定是指通过测定微生物生息环境中的生理生化指标（如代谢产物、异化与发酵特性等）来进行鉴定分类的一种方法。
这种鉴定方法对于那些形态相似但代谢能力或异化机理等不同的微生物，具有一定的准确性。
基于生理生化特征鉴定的研究可以大大减少鉴定分类的时间与达到准确度的提升。
在微生物资源开发、应用研究以及食品加工等方面都具有着广泛的应用。
分子生物学技术在一些难以用传统鉴定方法进行鉴定的微生物中，分子生物学技术被广泛应用。
分子生物学技术是指将微生物分子基因组、RNA等个体特征作为鉴定依据的方法。
其中最常用的鉴定方法是在不同的微生物基因组中，通过特定蛋白、RNA和DNA序列来鉴别不同菌株的种属及其与已知物种的相似性。
分子技术的优点在于其较高的快速性、准确性以及大规模处理能力，这为微生物资源的鉴定与分类研究做出了巨大贡献。
肠道益生菌分离鉴定及应用研究
肠道益生菌分离鉴定及应用研究一、引言肠道微生物群落对人体健康的重要性日益受到关注，其中益生菌在维持肠道平衡、促进营养吸收和增强免疫功能等方面发挥着关键作用。
肠道益生菌的分离鉴定及应用研究成为了当前微生物学和医学领域的热门课题。
二、肠道益生菌的分离方法（一）样本采集要分离肠道益生菌，首先需要从健康个体的粪便样本中获取。
在采集过程中，需要确保样本的新鲜度和无污染，通常使用无菌容器进行收集。
（二）选择性培养利用特定的培养基来培养肠道微生物。
例如，一些益生菌如双歧杆菌和乳酸菌在特定的营养条件和环境下能够生长，而其他杂菌则受到抑制。
（三）稀释涂布法将样本进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在培养基上，以获得单个菌落。
（一）形态学鉴定观察菌落的形态、大小、颜色和边缘特征，以及菌体的形态、大小和排列方式等。
（二）生理生化鉴定检测微生物的代谢产物、酶活性、对不同物质的利用能力等生理生化特性。
（三）分子生物学鉴定通过 PCR 技术扩增特定的基因片段，如 16S rRNA 基因，然后进行测序和比对分析，以确定其种属。
四、常见的肠道益生菌及其功能（一）双歧杆菌能改善肠道微生态平衡，抑制有害菌生长，增强免疫力，还参与维生素的合成和营养物质的吸收。
（二）乳酸菌产生乳酸降低肠道 pH 值，抑制病原菌生长，促进钙、铁等矿物质的吸收。
（三）芽孢杆菌具有较强的抗逆性，能够调节肠道菌群结构，提高机体抗氧化能力。
（一）食品工业广泛应用于酸奶、奶酪、发酵乳等乳制品，以及饮料、保健品等产品中，为消费者提供营养和健康益处。
（二）医药领域用于治疗肠道疾病，如腹泻、便秘、炎症性肠病等。
还可作为辅助治疗手段，增强药物的疗效，减轻药物的副作用。
（三）畜牧业添加到动物饲料中，提高动物的生长性能、免疫力和饲料利用率，减少疾病的发生。
六、肠道益生菌应用的挑战与展望（一）挑战1、益生菌的存活和定植能力在经过胃肠道的复杂环境后，益生菌的存活数量和在肠道内的定植能力是影响其效果的关键因素。
牙鲆肠道益生菌的分离鉴定及其应用研究
牙鲆肠道益生菌的分离鉴定及其应用研究本研究从牙鲆肠道分离益生菌并对其进行鉴定,研究了乳酸菌的粘附和定植,并探讨了益生菌在生产中的应用效果。
各试验的研究结果如下: 在试验一、试验二和试验三中,通过普通培养基和选择性培养基相结合的方法,从健康牙鲆肠道固有菌群中分离益生菌,共得到6株乳酸菌,6株弧菌拮抗菌和24株产蛋白酶菌。
在6株乳酸菌中,其中一株P15经过生化生理和16s rRNA分子鉴定,为鼠李糖乳杆菌;P15对弧菌有很强的抑制作用,在pH6.8和pH7.5生长良好,而在pH8.0和pH8.5时该菌生长不良且无抑菌活性。
在用点种法筛选出的6株弧菌拮抗菌中,G12、G13、G14、G15、G16五株菌的上清液没有表现出抑制弧菌的作用。
在Y1-13和弧菌的混合培养试验中,混和培养中弧菌的数量均明显低于对照组弧菌的数量,表明Y1-13对弧菌具有较强的抑制作用。
利用酪蛋白培养基和脱脂乳培养基筛选出24株产蛋白的益生菌,并利用福林-酚试剂法测定其酶活力。
结果表明,这24株菌均具有产蛋白酶酶活力,其中E14、F1、G7和Y2-2产酶活力特别强。
试验四、五测定了来自牙鲆肠道的鼠李糖乳杆菌P15和干酪乳杆菌的生长和pH的变化,并用同位素(H~3)示踪法和异硫氰酸荧光素(FITC)标记法对其在牙鲆的不同部位粘液的粘附进行了研究,同时还研究了两种乳酸菌对四种致病菌的粘附抑制作用。
结果表明P15在25h-75h期间为指数增长期,75h后进入平台期;干酪乳杆菌在48h前为指数增长期,48h后进入平台期。
两种菌都引起pH的降低,P15的pH 值变化较干酪乳杆菌的变化明显。
两种菌的培养上清液对非01型霍乱弧菌、荧光假单胞菌的抑菌效果较明显,对嗜水气单胞菌和白色念珠菌没有抑菌作用。
两种乳杆菌在牙鲆体表和肠道粘液中均有粘附性,在胃的粘附效果最好。
两种标记方法都是两种菌在胃的粘附最好(荧光标记试验中,P15和干酪乳杆菌对胃粘液的粘附百分率分别为63.0%和48.48%)。
食品中益生菌的筛选和应用
食品中益生菌的筛选和应用食品是人们日常生活中必不可少的一部分，人们对于食品的安全性和品质要求越来越高。
而益生菌作为一类有益于人体健康的微生物，被广泛应用于食品工业中。
本文将探讨食品中益生菌的筛选和应用的相关问题。
一、益生菌的筛选1. 益生菌的定义益生菌是指那些对人体有益的微生物菌种，主要包括乳酸菌、双歧杆菌等。
它们能够在人体内发挥一系列有益的作用，例如抑制有害菌的生长、平衡肠道菌群、提高免疫功能等。
2. 筛选益生菌的方法（1）耐受性测试：通过模拟人体胃肠道环境，筛选出能够在胃酸和胆盐的存在下存活的菌种。
这是益生菌能够发挥功效的重要前提。
（2）黏附能力评估：益生菌在肠道内黏附能力的强弱直接影响其对人体的有益作用。
通过模拟肠道环境，观察菌株在肠道细胞上的黏附情况，筛选出具有较强黏附能力的菌种。
（3）安全性评价：益生菌作为食品的一部分，其安全性至关重要。
筛选过程中需对菌株进行安全性评估，确保其不会引起潜在的不良反应。
二、食品中益生菌的应用1. 营养保健食品益生菌常常作为营养保健食品的一部分添加，帮助调节肠道菌群，促进营养吸收。
此类食品可满足人们对益生菌的需求，增强免疫力，改善肠道健康。
2. 发酵食品益生菌也常被应用于发酵食品中，例如酸奶、酸菜等。
在发酵过程中，益生菌产生的乳酸能够抑制有害菌的生长，延长食品的保质期。
3. 植物类食品除了动物性食品，植物类食品也可以添加益生菌。
例如，将益生菌应用于豆制品中，不仅可以提高豆制品的口感和营养价值，还能够增强肠道健康。
三、益生菌食品的注意事项1. 存储温度和条件益生菌食品在生产和存储过程中需要注意温度和条件。
过高或过低的温度都会影响益生菌菌株的活性和存活能力，从而降低食品的质量。
2. 有效成分含量选择益生菌食品时，需关注其中益生菌的有效成分含量。
只有在菌株数量较高的情况下，才能发挥出其益生作用。
因此，消费者在购买时应留意产品标签，选择含有足够数量益生菌的食品。
3. 适应人群及食用量益生菌食品并非适用于所有人群。
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法益生菌的检验方法通常包括培养法、PCR法、酶联免疫吸附法（ELISA）、质谱法等。
以下是关于益生菌检验的50条方法及详细描述：1. 培养法：益生菌可以通过在富含营养物质的琼脂培养基中进行培养，观察生长情况和菌落形态来进行定性和定量分析。
2. PCR法：通过聚合酶链式反应（PCR）对DNA进行扩增，然后使用特定基因序列的引物进行检测，可以快速准确地检测益生菌。
3. 酶联免疫吸附法（ELISA）：利用益生菌表面的特定蛋白质进行ELISA检测，可以快速检测益生菌的存在和浓度。
4. 质谱法：利用质谱仪对益生菌进行分析，可以确定其分子量和结构，也可以用于鉴定益生菌的种属。
5. 荧光定量PCR法：利用特定的引物和荧光探针对益生菌的DNA进行扩增和检测，可以实现对益生菌的高灵敏度和定量测定。
6. 基因芯片技术：使用特定的基因芯片对益生菌进行检测，可以实现对多种益生菌的同时检测和鉴定。
7. 流式细胞术：利用流式细胞仪对益生菌进行流式细胞术分析，可以实现高通量的益生菌检测和鉴定。
8. 微生物电极法：利用微生物电极对益生菌进行电化学检测，可以实现对益生菌的迅速检测和定量分析。
9. 蛋白质质谱法：通过蛋白质质谱技术对益生菌进行蛋白质组学分析，可以揭示益生菌的代谢途径和功能。
10. 生物传感器技术：利用生物传感器对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的实时监测和分析。
11. 纳米生物传感器技术：使用纳米技术和生物传感器对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的高灵敏度和快速检测。
12. 毛细管电泳技术：利用毛细管电泳对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的分离和鉴定。
13. 核磁共振技术：利用核磁共振技术对益生菌进行分析，可以揭示益生菌的结构和代谢情况。
14. 高效液相色谱技术：利用高效液相色谱技术对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的成分和浓度的分析。
15. 荧光显微镜技术：利用荧光显微镜对益生菌进行观察和检测，可以实现对益生菌的生长和形态的分析。
食品中益生菌的筛选与应用研究
食品中益生菌的筛选与应用研究近年来，随着人们对健康生活的日益关注，食品中益生菌的筛选与应用研究成为了一个备受关注的热点话题。
益生菌是指那些对人体有益的微生物，能够通过促进肠道健康、提升免疫力等方式来维护人体健康。
本文将探讨食品中益生菌的筛选方法和应用研究的前景。
一、益生菌的筛选方法在食品中找到适合的益生菌并不容易，因为不同的食品需要不同的益生菌种类和特性。
目前，常见的益生菌筛选方法主要包括传统培养法、分子生物学方法和功能性鉴定三个方面。
传统培养法是一种经典的菌种筛选方法。
通过在不同培养基上培养和筛选不同细菌的特性，可以判断出其是否具有益生菌的潜质。
这种方法的优点在于简单易行，但缺点是筛选时间较长且成本较高。
分子生物学方法是一种现代化的筛选技术，通过提取菌株的DNA进行PCR扩增和测序，从而确定不同菌株的亲缘关系和功能。
这种方法具有高通量、高灵敏度和高效率的特点，但由于技术复杂，需要较高的实验条件和设备，所以在实际应用中还有待完善。
功能性鉴定是一种综合性的筛选方法，通过对不同菌株的生理学特性、生化特性、抗菌活性、耐受性等进行评价，从而确定其是否具有益生菌功能。
这种方法可以综合评估菌株的多种特性，对于筛选出高质量的益生菌具有一定的指导意义。
二、食品中益生菌的应用研究食品中益生菌的应用研究主要分为两个方面，一方面是将益生菌应用于食品加工和保健品制备，另一方面是将益生菌应用于农畜产品的生产和养殖。
在食品加工和保健品制备方面，益生菌可以通过发酵过程生产出具有益生功效和美味口感的食品。
常见的例子包括酸奶、酸奶果汁、乳酸菌饮料等。
这些食品中含有丰富的益生菌，可以改善人体肠道菌群平衡，增强肠道健康，提高免疫力和消化能力。
在农畜产品的生产和养殖方面，益生菌可以作为一种生物饲料添加剂来改善动物的消化吸收能力和生长发育状况。
通过添加适当菌株的益生菌饲料，可以促进动物的免疫力，提高肉品和乳品的品质与产量。
此外，益生菌还可以控制动物肠道中有害菌的生长，从而减少使用化学抗菌剂的依赖，提高产品的安全性。
分子生物学和遗传学方法鉴定菌株微生物多样性
分子生物学和遗传学方法鉴定菌株微生物多样性在生物学领域里，微生物多样性一直是个备受关注的话题。
微生物多样性对于环境保育、健康管理等方面都具有重要意义。
而要真正掌握微生物多样性，就需要用到分子生物学和遗传学方法来鉴定菌株。
本文将为您介绍这些方法的具体过程和应用场景。
一、分子生物学方法1.基因测序基因测序是用于鉴定微生物多样性的一种分子生物学方法。
通过对微生物的基因进行测序分析，可以更精确地确定不同微生物间的基因差异，并通过这些差异来识别不同的菌株。
同时，基因测序还可以用于分析微生物基因变异与突变的模式和机制，为微生物演化提供参考依据。
2.扩增子测序扩增子测序是最常用的鉴定菌株微生物多样性的方法之一。
它基于特定的PCR 扩增子，通过对微生物基因组DNA进行扩增，然后进行高通量测序来分析微生物结构的多样性。
该方法的优点是可以同时研究多种微生物，快速、准确地识别高丰度及低丰度的微生物，有利于探索微生物群落的组成和演变规律。
扩增子测序目前已成为研究社会、生态以及医学微生物领域的重要工具之一。
3.荧光原位杂交（FISH）荧光原位杂交是一种通过碱基互补结合、检测微生物群落DNA序列的技术。
在该技术中，使用荧光探针特异性识别微生物的16S rRNA来标记不同的微生物类型，从而达到高灵敏度、高分辨率、准确无误地检测微生物的目的。
此技术可广泛应用于环境微生物、食品微生物学研究以及临床诊断领域，为分子分类和建立微生物分类学提供了巨大的潜力。
二、遗传学方法1.重复序列多态性（REP-PCR）REP-PCR是一种无需PCR扩增的方法，可用于描述微生物基础级别多样性和微生物群落结构的快速和可重复性技术。
该技术基于特定长度的DNA序列重复系列，通过PCR扩增特异性的DNA序列，然后通过凝胶电泳及图像分析来判断微生物基因与菌株的距离。
REP-PCR具有高通量、可自动化、灵敏度高等特点，可以在短时间内扩增大量基因。
2.随机扩增微卫星DNA（RAPD）RAPD是一种无需确定序列的多态性分析方法，用于检测微生物的变异情况。
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法通常包括以下几种：
1. 培养法：将待检测的样本接种到含有适当培养基的培养皿中，在适宜的温度和条件下培养一段时间，观察是否有益生菌生长。
2. 分子生物学方法：例如 PCR（聚合酶链式反应）、荧光定量 PCR 等技术，可以检测样本中是否存在益生菌的特定基因或核酸序列。
3. 免疫学方法：利用抗体与益生菌表面的特定抗原结合，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光等技术检测样本中是否存在益生菌。
4. 代谢产物分析法：通过检测益生菌代谢产生的特定物质，如短链脂肪酸、乳酸等，来判断是否存在益生菌。
5. 微生物群落分析法：利用高通量测序技术或生物芯片技术，对样本中的微生物群落进行分析，以确定是否存在益生菌。
这些方法各有优缺点，需要根据具体情况选择合适的检测方法。
同时，为了保证检测结果的准确性，需要严格控制实验条件和操作步骤，并进行质量控制和验证。
养殖益生菌检测方法
养殖益生菌检测方法引言随着人们对健康饮食的重视以及益生菌在人体健康中的作用逐渐被确认，益生菌的使用逐渐扩展至养殖业。
益生菌可以帮助改善动物的肠道健康，提高饲料利用率，增强免疫力，减少疾病发生率，提高养殖业的经济效益。
然而，为了确保益生菌产品的质量和功效，养殖业需要进行益生菌的检测。
本文将介绍养殖益生菌检测的方法。
养殖益生菌检测方法1. 细菌培养法细菌培养法是最常用的养殖益生菌检测方法之一。
该方法通过将样品中的细菌进行培养，然后通过观察菌落的形态、颜色、大小以及进行纯化和鉴定，确定是否存在益生菌。
该方法需要一定的培养基和培养条件，以及细菌鉴定的专业知识和仪器设备。
2. PCR法PCR法是一种通过扩增目标序列的核酸技术，可以快速检测出样品中的益生菌。
该方法基于DNA的特异性扩增原理，通过设计引物，使目标序列在PCR反应中被扩增出来。
PCR法具有高度的灵敏度和特异性，可以快速检测出少量的益生菌，适用于大批量样品检测。
3. 实时荧光定量PCR法实时荧光定量PCR法是PCR法的改进版，可以定量检测样品中的益生菌。
该方法通过加入一定浓度的荧光探针，在PCR反应过程中实时监测荧光信号的增加情况来定量分析目标物质的含量。
实时荧光定量PCR法不仅具备PCR法的高度灵敏度和特异性，而且可以准确测量益生菌的数量。
4. 高通量测序法高通量测序法是一种近年来发展起来的新技术，可以同时分析样品中的多个益生菌种类和数量。
该方法通过将样品中的DNA进行测序，然后通过比对已知益生菌的基因组数据库，确定样品中的益生菌种类和数量。
高通量测序法具有高通量、高度灵敏、高精度的特点，但是价格相对较高。
结论养殖益生菌的检测方法多种多样，不同的方法适用于不同的检测需求。
细菌培养法可以对益生菌进行纯化和鉴定，适用于小规模的样品检测。
PCR法和实时荧光定量PCR法具有高度的灵敏度和特异性，适用于大批量样品的快速检测和定量分析。
高通量测序法可以同时分析样品中的多个益生菌种类和数量，适用于大规模的研究和调查。
菌株鉴定和基因编辑技术在生产中的应用
菌株鉴定和基因编辑技术在生产中的应用一、菌株鉴定的重要性菌株是微生物世界中的基本组成单位，不同的菌株具有不同的代谢特性和生长特性。
在微生物发酵生产中，选择适宜的菌株是关键，只有正确鉴定菌株，才能确保生产工艺和产品质量的稳定性。
菌株鉴定可以通过传统的形态学、生理生化、分子生物学等方法进行。
随着分子生物学技术的发展，特别是PCR技术的广泛应用，菌株鉴定的速度和准确性得到了极大提高。
通过16S rRNA序列比对的手段，可以比较准确地确定细菌的分类和亲缘关系。
二、菌株鉴定在微生物发酵工业中的应用微生物发酵是一种重要的工业生产方式，广泛用于食品、医药、饲料、化工等领域。
菌株的选择和鉴定对于发酵生产的安全和有效性至关重要。
1. 在食品工业中的应用食品发酵是食品加工的一种重要方式。
例如，酱油、豆腐、奶酪、酸奶等，都是通过微生物发酵得到的。
在食品工业中，菌株的选择和鉴定对于产品的口感、香味、质感等方面具有重要的影响。
2. 在医药工业中的应用微生物是制备生物制品的重要工具，例如，抗生素、激素、维生素等都是通过微生物发酵得到的。
在医药工业中，菌株的选择和鉴定对于产品的纯度、活性、稳定性等方面具有重要的影响。
3. 在饲料工业中的应用饲料添加微生物可以促进动物的生长和健康。
例如，鸡、鸭、猪等动物的饲料中通常会添加益生菌等微生物。
菌株的选择和鉴定对于饲料添加微生物的功效和稳定性具有重要的影响。
三、基因编辑技术在微生物发酵生产中的应用基因编辑技术是指通过人工干预生物基因组，改变其遗传信息和生物表型。
随着基因编辑技术的逐步成熟，越来越多的研究表明，基因编辑技术在微生物发酵生产中的应用前景广阔。
1. 基因编辑技术在菌株改良中的应用微生物发酵过程中，许多关键酶的活性和表达水平对于产物数量和质量都有着重要的影响。
通过利用基因编辑技术，可以精准地调节这些关键酶的表达水平，从而实现对菌株的改良。
例如，利用基因编辑技术将菌株中关键代谢途径的酶活性提高，可以增加产物的产量和品质。
食品中益生菌菌株的筛选与发酵性能研究
食品中益生菌菌株的筛选与发酵性能研究食品中益生菌的应用越来越受到人们的关注，因为它们被发现对人体健康起着积极的作用。
然而，在庞大的微生物世界中，如何筛选出适合作为益生菌的菌株以及研究它们的发酵性能是一个重要而复杂的课题。
首先，筛选益生菌菌株需要满足一系列的要求。
这些菌株应具有良好的耐受性，能够在草饲或膳食中存活，以便在人体内发挥作用。
此外，它们应具有抗菌特性，能够抑制一些病原微生物的生长，加强人体免疫系统的功能。
最后，这些菌株应该稳定无毒，以确保在食品加工和储存过程中不会产生有害成分。
益生菌菌株的筛选通常基于实验室的培养和检测。
一种常用的方法是通过评估菌株对乳酸发酵的能力来筛选出适合的菌株。
乳酸发酵是一种常见的食品加工技术，菌株通过转化碳水化合物产生乳酸，从而降低食品的pH值，延长其保质期。
在实验室条件下，研究人员可以通过检测菌株在不同条件下的生长速率和乳酸产量来评估其发酵性能。
这些实验还可以帮助确定最佳的培养条件，例如温度和pH值，以提高菌株的生长和产酸能力。
除了发酵性能，益生菌菌株的存活能力也是一个关键指标。
这可以通过模拟人体消化和存活条件下评估菌株存活率的实验来确定。
例如，研究人员可以将菌株暴露在模拟胃酸和胆盐的环境中，然后通过计数存活菌株的数量来确定其耐受性。
这些实验可以帮助确定最佳的保护载体，例如微胶囊化，以增加菌株在消化过程中的存活率。
一旦合适的益生菌菌株被筛选出来，研究人员可以进一步研究其发酵机理和效果。
发酵机理的研究可以通过分析菌株的基因组和代谢产物来揭示。
例如，研究人员可以利用高通量测序技术来鉴定菌株中的相关基因，并通过基因表达分析来确定这些基因与发酵性能的关系。
此外，研究人员还可以通过基因敲除实验来验证特定基因在发酵过程中的功能。
同时，研究人员还可以运用益生菌菌株进行食品发酵的实验。
例如，将益生菌菌株应用于发酵食品如酸奶、豆豉等中，研究其对食品质量和口感的影响。
通过感官评估和化学分析，可以评估益生菌菌株的发酵效果和产酸能力。
不同分类鉴定方法在益生菌菌株研究中的应用
不同分类鉴定方法在益生菌菌株研究中的应用随着食品原料学和营养学的快速发展。
食物的作用不再是简单的为机体生长提供基本原料。
其对人类健康作用的研究内容也在不断地发生变化。
冈此，功能性食品应运而生，且引起了世界科技工作者的极大关注。
由于益生菌产品对人体机能有调节作用，因此成为功能性食品研究的焦点。
1益生菌的定义及生理功能1.1 定义益生菌(Probiotics)是指来源于宿主并对宿主健康有一定促进作用的活性微生物?。
Probiotics一词源于希腊文，意为“共生”，与Antibiotics(抗生素)相对立。
益生菌的概念是从20世纪初俄国著名科学家梅契尼柯夫提出的发酵乳制品有助于健康长寿的理论中发展而来的。
1.2生理功能人类对益生菌的研究大概有100 a左右的时间。
目前，研究最多且被大量报道的益生菌主要是乳酸菌，包括双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)和一些球菌等(Lactococcus．Streptococcus thermophilus)。
益生菌进入人体肠道后，与肠内其他微生物菌群呈现栖生、偏生、竞争或吞噬等复杂关系，并达到促进宿主健康的目的。
益生菌的主要生理功能有：1)排斥有害菌，调节肠道菌群平衡；2)缓鳃乳糖不耐症状；3)促进营养物质的吸收利用；4)调控胆同醇，抗击高血压；5)减轻过敏作用；6)抗衰老，具有美容功效；7)免疫激活，抗肿瘤。
2益生菌分类鉴定方法分类鉴定是微生物学中的一个重要领域。
由于益生菌在食品、生物和医药工业中被作为种质资源长期应用，因此人们能够根据生长性状、代谢和发酵能力、存活率、作用靶位等特征，对其进行分类和鉴定。
根据发展历史和方法的精确度。
益生菌分类鉴定经历了不同的历史发展阶段。
2.1传统方法传统分类鉴定方法包含形态特征、生理生化反应、血清学反应等．这些方法都基于微生物表面受体的特异性，属于表型分类法。
2.1.1形态结构和培养特征试验形态结构观察主要是利用显微镜对被染色的微生物形状、大小、排列方式、细胞结构及染色特性进行镜下直接观察，从而达到区别、鉴定微生物的目的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
不同分类鉴定方法在益生菌菌株研究中的应用
随着食品原料学和营养学的快速发展。
食物的作用不再是简单的为机体生长提供基本原料。
其对人类健康作用的研究内容也在不断地发生变化。
冈此，功能性食品应运而生，且引起了世界科技工作者的极大关注。
由于益生菌产品对人体机能有调节作用，因此成为功能性食品研究的焦点。
1益生菌的定义及生理功能
1.1 定义
益生菌(Probiotics)是指来源于宿主并对宿主健康有一定促进作用的活性微生物?。
Probiotics一词源于希腊文，意为“共生”，与Antibiotics(抗生素)相对立。
益生菌的概念是从20世纪初俄国著名科学家梅契尼柯夫提出的发酵乳制品有助于健康长寿的理论中发展而来的。
1.2生理功能
人类对益生菌的研究大概有100 a左右的时间。
目前，研究最多且被大量报道的益生菌主要是乳酸菌，包括双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)和一些球菌等(Lactococcus．Streptococcus thermophilus)。
益生菌进入人体肠道后，与肠内其他微生物菌群呈现栖生、偏生、竞争或吞噬等复杂关系，并达到促进宿主健康的目的。
益生菌的主要生理功能有：1)排斥有害菌，调节肠道菌群平衡；2)缓鳃乳糖不耐症状；3)促进营养物质的吸收利用；4)调控胆同醇，抗击高血压；5)减轻过敏作用；6)抗衰老，具有美容功效；7)免疫激活，抗肿瘤。
2益生菌分类鉴定方法
分类鉴定是微生物学中的一个重要领域。
由于益生菌在食品、生物和医药工业中被作为种质资源长期应用，因此人们能够根据生长性状、代谢和发酵能力、存活率、作用靶位等特征，对其进行分类和鉴定。
根据发展历史和方法的精确度。
益生菌分类鉴定经历了不同的历史发展阶段。
2.1传统方法
传统分类鉴定方法包含形态特征、生理生化反应、血清学反应等．这些方法都基于微生物表面受体的特异性，属于表型分类法。
2.1.1形态结构和培养特征试验
形态结构观察主要是利用显微镜对被染色的微生物形状、大小、排列方式、细胞结构及染色特性进行镜下直接观察，从而达到区别、鉴定微生物的目的。
不同微生物在特定培养基中生长繁殖后所形成的菌落特征有很大差异。
而在一定条件
下．同一种微生物的培养特征具有一定的稳定性，据此可以对不同微生物加以区别。
2.1.2生理生化试验
微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。
生化反应是指用化学反应测定微生物的代谢产物。
从而鉴别一些在形态和其他方面不易区别的微生物。
细菌生理生化试验包括过氧化氢酶测定、含碳化合物利用、糖或醇类发酵试验、淀粉水解试验等。
GONZLEZ C J等利用形态学和生理学特征从淡水鱼及其生活环境中分离了249株益生菌．并对其进行了鉴定。
其中92％以上的分离株被鉴定到属的水平。
WIJTZES T等利用2种碳源发酵测试体系也未能将14种益生菌分离株鉴定到种的水平。
虽然表型性状鉴定对部分益生菌是非常有用的，但对某些益生菌来说，即使表型性状很相似，也不意味着它们的基因型亲源关系很近。
2.2分子生物学鉴定方法
鉴于表型鉴定的缺陷，经过不断努力，各国科学家逐渐采用分子生物学方法来开展益生菌分类鉴定．在鉴定的准确性和效率方面均取得了长足的进步。
2.2.1 DNA—DNA分子杂交技术
20世纪60年代，DNA—DNA杂交试验被用来分析菌株之间的亲缘关系，现其已成为细菌分类学研究的一个重要指标。
核酸探针是一种经过标记、能与其互补序列杂交的单链核酸分子，其靶位是染色体上特定的序列，所选择的靶序列通常是某一属、种或菌株所特有的核酸序列，因此，只要将菌落裂解，使细胞内DNA暴露，就可以直接采用探针与该菌落进行原位杂交。
对探针采用同位素、酶或荧光素标记后，可以使其容易被检测。
目前．该方法已经被用来制备对双歧杆菌具有菌株或种特异性的核酸探针。
Effie Apostolou等人用荧光原
位杂交的方法来鉴定人体肠道内Lactobacidlus Fhamrto LGG。
Efia Malinen
等利用DNA探针来鉴定L．helveticus的野生型及突变型，并获得了成功。
2.2.2 recA基因序列分析
recA基因负责编码recA蛋白质，后者在DNA重组、DNA修复与SOS应急反应中具有至关重要的作用。
研究表明，recA基因的一个小片段有望成为一种灵敏性高、能用于种间进化发育亲缘研究的分子标记。
Kullen等首先将这种方法引入双歧杆菌属的研究。
这种分子可以通过PCR技术从双歧杆菌典型菌株的肠道分析物中直接获得，引物是针对recA基因内特定区域的寡核苷酸，该区域在细菌内具有通用保守性。
在该方法中形成的片段长度约为300 kb。
这种recA基冈有望成为一种对人体肠道双歧杆菌分离物进行比较性进化发育研究的有力工具。
2.2.3 GC％含量
研究发现．同种生物体内的GC％是固定的，但不同种生物的GC％会有很大的不同。
测定GC％的方法很多．其中最广泛和通用的方法是以化学法水解DNA后．再用电泳或HPLC来分析其中成分。
在双链DNA中，A与T配对、G与c配对，因此，A与T以及G与C的数量应相同。
DNA的GC％含量测定已广泛用于微生物鉴定中。
在国外，Storck首先测定了真菌DNA的GC％。
并将GC％作为真菌分类鉴定参考标准之一。
我国从20世纪70年代开始对细菌、真菌等微生物DNA的GC％进行测定，80年代中期至90年代初又对衣原体、立克次氏体、蚤类等DNA的GC％进行了研究。
2.2.4基于16S或23S rRNA序列的DNA标记技术
在益生菌进化过程中．rRNA分子的功能几乎保持不变，且分子中某些部位的排列顺序变化非常缓慢，因而得以保留古老祖先的一些序列。
16S或23S rRNA序列的DNA标记技术利用PCR的方法。
采用针对16S rRNA基因两端通用保守区的引物直接对所分离到的菌株进行16S rRNA基因扩增，然后测定整个PCR复制子(约1.5 kb)的序列组成，并与rRNA数据库进行比较。
2.2.5变性梯度凝胶电泳
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是指利用一个梯度变性胶来分离DNA片段。
由于不同DNA片段的变眭条件不同，因此可在凝胶上形成不同的泳带㈣。
该技术的突出优点是可以分离具有细微差异的基因组片段，通过测序分析来揭示群落成员系统发育的从属关系，并能够同时检测多个样品，使对不同样品进行比较成为可能。
2.3编码和自动化鉴定系统
编码鉴定方法是指根据鉴定对象采用一定数目的卡。
所得结果以数字方式表达，并与数据库数据对照而得出鉴定结果。
目前，已应用的快速、简便的商品化编码鉴定系统很多．比较著名的有法国一梅埃里(Bio—Meneux)的API系统、Enterotube系统、Spectruml0系统等。
国内也有少量的商品化编码鉴定系列。
近年发展起来的益生菌自动化鉴定系统实现了从
接种、培养、读数到报告的全过程自动化，技术较为成熟的是法国Bio—merieux ViteK Inc生产的微生物鉴定仪(AMS)。
2.4荧光光谱法
荧光光谱法(Fluorescence spectroscopy)又称荧光光谱法或荧光分析法，它利用物质所发射的荧光强度与浓度之间的线性关系进行定量分析，并以荧光光谱的形状和荧光峰对应的波长进行定性分析。
AMMOR S等利用乳酸菌样品内所含物质的3种激发光，即250 nm(氨基酸+核酸)、316 am(NADH)和380nm(NAD)，采用主成分分析法和因子判别式法进行数据分析．分别在种、类、种类水平上对所收集到的乳酸菌样品进行分离鉴定。
2.5其他方法
MARILLEY L等利用基于电子鼻技术的质谱分析系统对乳酸菌的挥发性化合物进行评估，得到的分类鉴定结果与用分子生物学方法得到的结果相同。
这种方法可用于区分样品中的细菌群落，发现新的能够产生气味的菌类；张斌等通过PCR 扩增FtsZ基因的一段800bp核苷酸，构建了干酪乳杆菌一片球菌及相关乳酸菌的FtsZ蛋白系统发育树。
研究表明，FtsZ蛋白序列的分辨率高于16S rDNA，适用于乳酸菌种间的系统分类研究。
3展望
利用包括形态特征法、生理生化反应特征法等传统方法对益生菌进行分类、鉴定时，存在耗时长、操作繁杂、准确度不高等问题。
分子生物学技术尤其是PCR 技术、核酸测序技术和电泳技术的不断改进，以及生物信息学的蓬勃发展．为益生菌的检测和鉴定指明了新方向．打开了益生菌快速而准确鉴定的大门。
虽然分子生物学技术用于益生菌分类鉴定中的研究时间较短，但它具有诸多优点，具有巨大的应用潜力。
随着科学技术的不断发展、实验手段的持续改进、新兴分子生物学技术的出现和对快速检测试剂盒研制进程的加快．益生菌的分类、鉴定工作一定会呈现出更加广阔的应用前景。
《农业科技与装备》2010年7月，第7期邵虎。