Heparin层析填料说明书

Heparin Sepharose 6 Fast Flow

原理

肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，将它偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的物理化学稳定性。肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。

*图为含有交互转换的抗坏血酸的肝磷脂多糖的结构（A）和D-葡萄糖残基（B）

分离操作

结合缓冲液：20mM Tris-HCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠, pH7.0

洗脱缓冲液：20mM Tris-HCl, 1~2M NaCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠,1~2M NaCl, pH7.0

1，用10倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。

2，上样。

3，用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结合物质都被冲洗出柱子。紫外吸光A280nm处监测。

4，用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。使用连续的或者阶梯式的梯度洗脱，洗脱缓冲液的浓度从0%-100%。

使用注意

1，通过改变缓冲液的pH值或者离子强度来修饰肝磷脂的选择性。洗脱时使用连续的或者阶梯式的洗脱方式，用NaCl,KCl或者硫酸铵溶液，浓度可以高达1.5~2M。

2，对于凝血因子而言，肝磷脂作为亲和配基，在结合缓冲液中含有一个低浓度的0.1M的NaCl是合适的。

3，如果增加盐离子浓度的梯度产生一个令人不满意的结果，使用肝磷脂（1~5mg/ml）在洗脱缓冲液中作为一个竞争性试剂。

净化

1，用0.5个柱体积的2M的NaCl冲洗10分钟去除离子键结合蛋白。

2，通过用4倍柱体积的0.1M NaOH溶液冲洗柱子1~2小时去除沉淀物或变性蛋白或用2倍的柱体积的6M的盐酸胍冲洗柱子30~60分钟，或者用2倍柱体积的6M的尿素冲洗30~60分钟。

3，用4倍柱体积的0.1%~0.5%的TritonX-100冲洗1~2小时，去除疏水键结合的蛋白质。

0.1M NaOH（1周在+20℃），0.05M醋酸钠，pH4.0，4M NaCl，8M尿素，6M盐酸胍。

储存

用5个柱体积的0.05M醋酸钠并且含有20%的乙醇冲洗介质和柱子，在4℃~8℃条件下储存。