二乙烯亚胺对水貂肠炎细小病毒灭活效果的研究
水貂肠炎型细小病毒病的诊断与防控
水貂细小病毒病是由细小病毒引起的高接触性传染病，有出血性肠炎和非化脓性心肌炎2种表现型，出血性肠炎以发热、呕吐、排稀血便为特征，非化脓性心肌炎以突然死亡为特征，该病一年四季均可发病，但以季节更替，昼夜温差变化大时多发。
某水貂养殖户所养的1200只水貂突然发病，半个月后死亡近300只，经过询问畜主水貂的发病症状，结合剖检、抗原检测、细菌培养、免疫接种等情况，笔者确诊该群水貂所患疾病为细小病毒性肠炎。
一、临床症状该水貂养殖户表示，貂群发病前5～7天天气骤变，连续降雨，气温下降15℃左右，貂舍阴冷潮湿。
随即貂群发病，发病初期貂群采食量下降，部分貂只体温高达40℃以上，目光无神、行动迟缓，呕吐物含有白色泡沫的未消化饲料，粪便为稀糊状或半成形状，有一定的腥臭味；中期貂只体温降至38℃左右，鼻镜干燥，口色发绀，显现出脱水症状，水貂厌食且呕吐加剧，呕吐物变为黄绿色黏液，且大量排出咖啡色水状的血便，腥臭气味加重；后期貂只体温继续下降至37℃以下，身体极度消瘦，卧地不起，眼球下陷，眼结膜、口腔黏膜苍白，病貂脱水严重，皮肤失去弹性，被毛无光，腹部卷缩，肛门松弛，肛门周围附有血样腥臭的稀便，最后病貂衰竭死亡。
二、剖检变化经对养殖户所带来5只水貂进行剖检可见：水貂肺充血水肿，局部有斑块状出血；胃黏膜出血，胃内容物呈煤焦油色，幽门周围坏死严重，出现溃疡灶；胆囊充盈；肝脾均肿大，水貂肠炎型细小病毒病的诊断与防控文│刘志伟 彭亮（河北省黄骅市农业农村局）表面弥漫出血点，个别有瘀血斑；心脏肥大松软，颜色变浅，心肌和心内膜有非化脓性的坏死灶，心肌纤维损伤严重，可见有出血斑点。
肠道病变明显，整个肠道外观呈暗红色、黑红色甚至黑褐色，外周淋巴结和肠系膜淋巴结均肿胀充血，小肠黏膜呈纤维性、坏死性、出血性炎症，严重的可见肠黏膜坏死脱落，肠管明显变粗、变薄，接近透明，肠腔内充有气体及混有血液的稀薄内容物，尤其以空肠、回肠更为严重。
大肠黏膜出血较多可见条状出血，肠内容物恶臭，含大量暗红色或酱油色稀软的纤维素性物质。
浅论水貂病毒性肠炎治疗
●
病毒性肠炎传染性 很高 ，对水貂生命安全有严重威胁 。 水貂感染后最 明显 的特征是严重的腹泻 ， 在 水貂 的粪便 中含
有一定量 的粘液 ， 甚 至还有灰 白色 的肠粘膜 。 该病无季节性 ， 全年 均可发生 。探究水貂病毒性肠炎的治疗具 有重要 意义。 １ 发病情 况 某水貂养殖场一共养殖 了 ３ ０ ０ ０多只水貂 ，其 中有十几
次， ｄ ， 连用 ５ ｄ 。
患病水貂精 神状 态不佳 ，瞳孔扩散呈现 出无神状态 ， 水
貂皮毛粗乱并且 失去了原有的光泽 ， 水貂皮肤也逐渐失去弹 性 。水貂进食 量逐渐减少 ， 甚 至完全拒绝进食 。出现呕 吐情
况， 饮水需求量增多 ， 水貂体温升高至 ４ ０ ％以上 。 水貂 的鼻孔
参 考 文 献
［ １ ］孙东梅． 水貂病毒性肠炎的诊断与防治叨． 今 日畜牧兽 医． ２ ｏ １ ２ （ ０ ５ ） ． ［ ２ ］李景平． 一起水貂病毒 陛肠炎的诊治报告叨养殖技术顾 问． ２ ０ １ ２ （ ０ ７ ）
［ ３ 】 李渤南， 等． 水貂病 毒性肠 炎的诊治 ｆ Ｊ １ ． 中国兽医杂志． ２ ０ １ ２ （ ０ ７ ） ．
只 ２月龄左右的幼貂突然发病 。 患病水貂表现为精神 非常低 靡， 会在笼子 中的某处卧着 ， 不愿意在笼 中行动 。 水貂 进食 量
减少明显 ， 饮水渴求度较高 。 水貂体温在 ４ ０ ￣ Ｃ以上 ， 伴有严重 的腹泻 。 水貂 的排便先软后稀 ， 内含较多的黏液 ， 粪便颜色为 灰 白色 ， 还有一些患病水貂 的粪便含有血液 。 水貂 呕吐严重 ， 为 了对病情进行抑制 ， 水貂养殖场工作人员 给患病水貂服用 了庆大霉素 ， 注射了青链霉素 ， 但 未见 效。 患病第 ２天上午有 ２只患病水貂死亡 ， 下午发病水貂数量急剧上涨 ， 同时还有 ５
水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究
水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究罗国良;张洪亮;王振军;冯二凯;易立;郭利;程悦宁;程世鹏;王守富;王宏正【摘要】制备了水貂犬瘟热活疫苗 (以下简称犬瘟活疫苗) 与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗 (以下简称肠炎灭活苗) 各3批, 通过半成品及成品检验结果显示, 生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定.通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗, 实现2种疫苗联合 (简称联合疫苗) 后, 体外接种Vero细胞, 采用专用稀释液稀释的犬瘟活疫苗作对照, 在25℃存放条件下, 5 h内两者的犬瘟热病毒含量无明显差异, 表明该方法对犬瘟热病毒的存活无明显影响.将联合疫苗免疫水貂10只, 犬瘟活疫苗、肠炎灭活苗分别免疫10只水貂作为单苗对照组, 免疫后21 d采血, 测定3组的抗体水平, 联合疫苗组的犬瘟热病毒中和抗体和细小病毒HI抗体分别与对应单苗的抗体水平无明显差异, 表明联合疫苗具有与单苗相当的免疫效力.该研究为进一步研发水貂犬瘟活疫苗与肠炎灭活苗联苗奠定了基础.%The study prepared 3 batches of mink canine distemper live vaccine and mink parvovirus inactivated vaccine respectively. The results of semi-finished products and finished products of vaccine showed that the two vaccines were qualified and the production process was stable. Vero cells were inoculated after the combination of two vaccines by the mink parvovirus enteritis inactivated vaccine to dilute the live vaccine of the canine distemper. The results indicated that the virus contents of live vaccine of the canine distemper which was diluted by the mink parvovirus enteritis inactivated vaccine (trial group) at 25℃, 5 h was not significantly different compared to the canine distemper live vaccine which was diluted by the special diluent (controlgroup). The combined vaccine immunized 10 minks, canine distemper vaccine and enteritis inactivated vaccine were immunized 10 minks as the control group, and the antibody levels of the three groups were determined until 21 days after immunization. The SN against CDV and the HI against MEV of the combined vaccine were not significantly different from that of the corresponding single vaccine, respectively. This study indicated that the combined vaccine has the same immune effect as the single vaccine. This trial establish basis for further studying the combined vaccine of mink canine distemper vaccine and mink parvovirus inactivated vaccine.【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2019(041)001【总页数】4页(P22-25)【关键词】水貂犬瘟热活疫苗;水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗;联合免疫【作者】罗国良;张洪亮;王振军;冯二凯;易立;郭利;程悦宁;程世鹏;王守富;王宏正【作者单位】中国农业科学院特产研究所,长春 130112;长春西诺生物科技有限公司,长春 130012;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;吉林农业大学,长春 130118;长春西诺生物科技有限公司,长春 130012【正文语种】中文【中图分类】S852.4水貂犬瘟热是引起水貂以双相热、白细胞减少、鼻炎和粘膜炎为特征的传染病[1]。
水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析
ｈ ｍｏ ｏ ｙ ｓ ａ ａｙ ｅ ｔ ｏ ｌ ｇ ｗａ ｎ ｌ ｚ ｄ ｗｉ ＤＮＡＳ ａ ｏ ｔ ｒ ．ａ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉａ ｅ Ｍ Ｐ ｈ ｔｒ ｓ ｆ ｗａｅ ｎｄ ｒ ｓ ｌ ｉ ｄ ｃ ｔｄ Ｓ ｓ Ｖ一 ＶＰ ｅ ｅ ｓ ａ ｅ ｉ ｈ ｒｈ ｍｏ ｏ ｙ ｗｉ ｔ ｅ ｉ １ ２ ｇ ｎ ｈ ｒｄ ｈｇ ｅ ｏ ｌｇ ｔ ｏｈ ｒｓ １ ｈ ｘ ＭＥＶ ｓ ｌｔ ｎ ， ｔ ｅ ｈ ｍｏ ｏ ｙ ｏ ｕ ｌ ｏ ｉ ｅ ａ ｄ ｄ ｕ ｅ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｓ ｗｅ ｅ ９ ２％ － ９ ４ ａ ｄ ９ ． ｉｏ ａｉ ｓ ｈ ｏ ｌ ｇ ｆｎ ｃ ｅ ｔ ｏ ｄ ｎ ｅ ｃ ｄ ａ ｎ ｃｄ ｒ ９． ｄ ９ ． ％ ｎ ８ ６％ － ９ １ ，ｒ ｓ ｅ ｔ ｅ ｙ ａ ｄ ９ ．％ ｅｐ ｃｉ ｌ， ｖ ｎ
细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性， 分别为 ９．％－９ ％和 ９． ９ ． 与猫泛白细胞减少症病毒标准株 ｃ ＿ ９ ２ ９． ４ ８ ％－９１ ６ ％， ｕ４ 株同源性为９ ． ９ ％和 ９． 系统发生树分析表明它们属于同—个分支。 ３ ９１ ％， 本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型
ｔ ｅｂ ｓｓ ｖ ｄ ｎ ｏ ｌｃ ｌ ｒ ｐ ｄ ｍｉ ｌ ｇ ｖ ｓ ｇ ｔ ｎ ａ ｄ ｒ ｓ ａ ｃ ｆ ｅ ｔ ｐ ａ ｃｎ ｓ ｆ ＥＶ． ｈ ａ ｉ ｉ ｅ ｃ ｆ ｒ ｅ ｅ ｍｏ ｅ ｕ ａ ｉ ｅ ｏ ｏ ｙ ｉ ｅ ｔ ａｉ ｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｗ－ ｙ ｅ ｖ ｃ ｉ ｅ ｅ ｎ ｉ ｏ ｎ ｎ ｏ Ｍ
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特 产 研 究
Ｓ ｅ ｉｌ ｉ ｏ ｏ ｃＡｎｍａ ａ ｄ Ｐ ａ ｔ ｓａｃ ｐ ｃａ Ｗ ｌ Ｅｃ ｎ ｍｉ ｉ ｌ ｎ ｌ ｅｒｈ ｄ ｎ Ｒｅ
一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法[发明专利]
![一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/843b28337f1922791788e80e.png)
专利名称：一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：闵庆如,易小萍,范志永,滕小锘,王秀梅,冀海明,宋晓飞,徐龙涛,张连秀,王蕾,禚宝山,鲍海忠
申请号：CN201410052515.6
申请日：20140217
公开号：CN103820398A
公开日：
20140528
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法。
本发明涉及疫苗的生产毒株是重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒CGMCC No.8051，该毒株系采用的表达载体为分泌表达，且含有6个组氨酸标签，易于蛋白检测分析用；用其生产水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗，该疫苗不含病毒基因组，无动物安全危害和潜在散布性；免疫针对性强，能激发免疫动物产生足量的免疫抗体，并产生长久保护力。
按照本发明生产MEV病毒样颗粒，1000L生物反应器中收获的病毒液效价达到血凝价1∶4096～1∶32768，成颗粒蛋白表达量约65mg/L，每升病毒液半成品可以制成标准水貂疫苗3000～8000头份；该重组亚单位疫苗为明显优于现有灭活组织疫苗的新疫苗。
申请人：齐鲁动物保健品有限公司
地址：250100 山东省济南市历城区工业北路243号
国籍：CN
代理机构：北京君智知识产权代理事务所
代理人：郑明
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水貂抗貂细小病毒中和抗体滴度的测定
水貂抗貂细小病毒中和抗体滴度的测定刁非非;赵永峰;姜常青;韩铠怿;谢之景【摘要】为了解当前水貂病毒性肠炎疫苗及免疫程序的在水貂的免疫效果,该研究在6个水貂养殖场,随机对MEV疫苗免疫接种后55～60d的水貂进行心脏采血,共采集、制备84份血清.采用血清微量中和试验,测定84份水貂血清中抗MEV的中和抗体滴度.结果表明,抗MEV中和抗体滴度大于10的共10份血清,仅占11.9％,其中1份效价为56,1份效价为28,1份效价为21,6份效价为14,1份效价为12,其余74份水貂血清中的抗MEV中和抗体滴度均小于10,达88.1％.当前水貂MEV 疫苗免疫程序的免疫效果很差,是造成在水貂养殖过程中MEV流行的重要因素,因此有必要加强研究制定科学水貂MEV疫苗免疫接种程序.【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2016(037)009【总页数】2页(P1-2)【关键词】水貂;貂细小病毒;中和抗体【作者】刁非非;赵永峰;姜常青;韩铠怿;谢之景【作者单位】山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.2水貂病毒性肠炎(Mink viral enteritis)又称貂泛白细胞减少症(Mink panleucopenia)或貂传染性肠炎(Mink infectious enteritis)是由貂肠炎病毒(Mink enteritis virus，MEV)，又称貂细小病毒(Mink parvovirus)，感染引起的一种急性传染病，主要特征为急性出血性肠炎和白细胞减少[1-5]。
适合于我国使用的水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗
适合于我国使用的水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗
罗国良
【期刊名称】《兽药市场指南》
【年(卷),期】2010(000)006
【摘要】水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗（MEVB株）是由中国农业科学院特产研
究所、吉林特研生物技术有限责任公司共同研究开发的用于预防水貂细小病毒性肠炎的疫苗，该疫苗针对我国水貂细小病毒流行型——“B型”引起的肠炎而研制，相关试验表明，该疫苗能安全、有效地预防水貂细小病毒性肠炎，2009年12月11日被农业部批准为国家三类新兽药，证书编号为（2009）新兽药证字39号。
【总页数】2页(P15-16)
【作者】罗国良
【作者单位】中国农业科学院特产研究所;吉林特研生物技术有限责任公司
【正文语种】中文
【中图分类】S858.292
【相关文献】
1.水貂细小病毒性肠炎的诊治 [J], 王泉水;王志海;邵芹;阎德平
2.水貂阿留申病对犬瘟热及细小病毒性肠炎疫苗免疫的影响 [J], 李富金;李金波;王乐;尚宁
3.水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗保存期试验 [J], 柴秀丽;闫喜军;吴威;罗国良;赵传
芳
4.水貂细小病毒性肠炎的诊治 [J], 王应玉;王亮;李宁
5.水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究[J], 罗国良;张洪亮;王振军;冯二凯;易立;郭利;程悦宁;程世鹏;王守富;王宏正
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二乙烯亚胺对水貂肠炎细小病毒灭活效果的研究罗国良;王振军;冯二凯;易立;郭利;叶明;张淼;程悦宁【摘要】为研究二乙烯亚胺(BEI)对水貂肠炎细小病毒的灭活效果,采用BEI终浓度为0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.000 5mol/L,灭活温度为30℃,灭活时间为24h、48h、72h条件下,对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验.通过F81细胞传代观察细胞病变和血凝试验检测灭活效果;用水貂检验BEI灭活水貂肠炎细小病毒所制疫苗的安全性,通过检测接种水貂的血凝抑制抗体,评价BEI灭活细小病毒所制疫苗的免疫效果,同时与甲醛灭活的疫苗进行免疫效果比较.结果表明,BEI终浓度0.002mol/L、30℃24h是灭活水貂肠炎细小病毒的适宜参数,BEI灭活工艺制备的水貂肠炎细小病毒灭活疫苗具有良好的安全性,BEI灭活工艺与甲醛灭活工艺的免疫抗体水平差异不显著(P＞0.05).本研究为水貂肠炎细小病毒灭活工艺的研究提供了理论依据.【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2018(040)003【总页数】4页(P23-26)【关键词】水貂肠炎细小病毒;二乙烯亚胺;灭活效果【作者】罗国良;王振军;冯二凯;易立;郭利;叶明;张淼;程悦宁【作者单位】中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;吉林特研生物技术有限责任公司,长春 130122;吉林特研生物技术有限责任公司,长春 130122;中国农业科学院特产研究所,长春130112【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5水貂病毒性肠炎又称水貂细小病毒性肠炎，是由水貂肠炎细小病毒（Mink enteritis virus，MEV）引起的以剧烈腹泻为主要临床特征的急性、烈性和高度接触性传染病。
在自然条件下，不同品种和不同年龄的水貂均有感染性，但幼貂的感染性极强。
水貂病毒性肠炎没有特异性的治疗药物，疫苗接种是控制该病流行的有效手段。
目前，用于水貂肠炎细小病毒免疫预防的常规疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗。
灭活疫苗常用的传统灭活剂为甲醛，甲醛灭活工艺虽能取得较好的灭活效果，但甲醛易破坏病毒的免疫原性，且其残留易引起机体应激反应。
二乙烯亚胺是烷化剂的一种，作为另一类良好的病毒灭活剂，仅破坏病毒的核酸，而不影响蛋白成分结构，能最大程度保持病毒的抗原性[1]，近年来已应用于猪细小病毒[2]、猫杯状病毒[3]、伪狂犬病毒[4]、口蹄疫病毒[5]等多种病毒的灭活，并取得良好的免疫效果。
本试验通过使用不同终浓度的二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）对 MEV 进行不同时间的灭活，确定BEI灭活参数，并对BEI灭活和甲醛灭活的水貂肠炎细小病毒灭活疫苗进行了免疫效果对比。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病毒与细胞水貂肠炎细小病毒MEVB株（中国农业科学院特产研究所保存）；F81细胞（中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库提供）。
1.1.2 主要试剂 MEM培养基、0.25%胰酶-EDTA消化液（Corning公司），2-溴乙胺氢溴酸盐（BEA）（Sigma-Aldrich公司），甲醛（国药集团），其它试剂为国产分析纯。
1.1.3 实验动物水貂，购自农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站。
1.2 方法1.2.1 BEI的配制用0.2N NaOH溶液配制0.1mol/L的BEA溶液，在37℃下作用，其间每隔10min～15min振摇1次，作用60min即成0.1mol/L的BEI溶液，然后0.22µm滤器过滤除菌。
1.2.2 MEVB灭活试验随机取MEVB病毒液5瓶，500mL/瓶，4瓶病毒液按终浓度为 0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.000 5mol/L分别加入BEI溶液，另1瓶病毒液按终浓度为0.15%加入甲醛溶液。
以上5瓶病毒液与灭活剂充分混匀，于30℃灭活，分别于24h、48h、72h取样进行灭活检验，用BEI灭活的病毒液于72h取完样后加入 BEI使用量的10%的1mol/L硫代硫酸钠中和BEI。
1.2.3 灭活检验取灭活病毒液，用无血清MEM 1∶5稀释后分别同步接种F81细胞4瓶，每瓶0.5mL，置37℃下培养，24h后换维持液，继续培养3日后再传1代，观察有无细胞病变，收获培养液进行血凝试验，检测其对猪红细胞的血凝价。
1.2.4 灭活疫苗的制备取经灭活检验合格的病毒液（BEI灭活浓度为0.002mol/L、灭活时间24h），按病毒液∶氢氧化铝胶＝9∶1的比例制成水貂肠炎细小病毒灭活疫苗，按现行《中国兽药典》附录进行性状和无菌检验。
1.2.5 灭活疫苗安全试验取制备的疫苗肌肉注射健康易感水貂〔水貂肠炎细小病毒血凝抑制抗体（HI）≤1∶4〕5只，每只水貂 5mL，分4点注射，观察10d，观测精神、食欲、体温、粪便与接种部有无异常反应。
1.2.6 灭活疫苗效力试验用2月龄～10月龄健康易感水貂 5只（水貂肠炎细小病毒 HI抗体效价≤1∶4），分别肌肉接种BEI疫苗1mL；另设甲醛灭活疫苗组水貂5只，肌肉接种1mL/只，作为平行对照，21d后，连同阴性对照水貂5只，分别采血，测定HI抗体效价。
2 结果2.1 不同浓度BEI灭活效果BEI灭活浓度＞0.002mol/L时，灭活24h以后的样品均未出现CPE，传代后未出现CPE，亦没有检测出血凝价。
BEI灭活浓度为0.001mol/L时，灭活24h可检出CPE，传代后亦出现CPE，且均检测出血凝价；灭活48h以上时，样品均未出CPE，传代后未出现CPE，亦没有检测出血凝价。
BEI灭活浓度为0.000 5mol/L 时，灭活时间为24h和48h时均可检出CPE，传代后亦出现CPE，且均检测出血凝价。
为了确保疫苗制备过程的灭活效果，同时提高制备效率，确定水貂肠炎细小病毒的灭活条件为BEI终浓度为0.002mol/L、灭活时间24h、灭活温度30℃，灭活完毕加入BEI使用量10%的1mol/L硫代硫酸钠中和BEI。
结果见表1。
2.2 疫苗的制备结果制备的疫苗呈粉红色均匀混悬液，静置后，上层为粉红色澄清液体，下层为淡粉红色沉淀，摇匀后呈均匀混悬液。
经无菌检验，符合规定。
表1 BEI灭活MEVB试验灭活检验结果Table 1 The inactivation effect of binary ethylenimine on mink enteritis virus组别Group灭活剂Inactivator浓度Concentration代次Generation检测项目Test item灭活作用时间（h）Inactivation time 24 48 72 1 2 3 BEI 0.003mol/L 0.002mol/L 0.001mol/L 1 2 1 2 1 2 CPE―――HA 0 0 0 CPE―――HA 0 0 0 CPE―――HA 0 0 0 CPE―――HA 0 0 0 CPE+――HA 1∶8 0 0 CPE+――HA 1∶32 0 0 4 0.000 5mol/L 1 2 CPE ++ + ―HA 1∶64 1:8 0 CPE +++ + ―HA 1∶128 1:16 0 1 CPE―――HA 0 0 0 5甲醛Formaldehyde 0.15%2 CPE―――HA 0 0 02.3 疫苗安全试验结果制备的疫苗接种水貂，观察10d，水貂5/5均健活，未发现任何体温、精神、食欲与粪便异常，亦未发现局部异常反应。
2.4 疫苗效力试验结果表2 BEI与甲醛灭活MEVB制备疫苗免疫效果对比Table 2 Comparison of immune efficacy of BEI-inactivated and formaldehyde-inactivated MEV vaccine注：同行肩标相同的或不标字母的表示差异不显著（P＞0.05）。
Note：With no letter or same letter superscripts mean no significant difference(P＞ 0.05).?从疫苗效力试验结果来看，BEI灭活疫苗和甲醛灭活疫苗均达到效苗保护抗体（HI=1∶32）水平之上，BEI灭活疫苗较甲醛灭活疫苗免疫后平均抗体水平高，但经统计比较，差异不显著（P＞0.05)。
3 讨论甲醛作为疫苗灭活剂目前仍被广泛应用，主要通过对病毒蛋白羧基端发生作用，从而使病毒失活，虽有灭活病毒快速、彻底等优点，但它属于致癌物，可能会给动物造成潜在的应激风险。
甲醛的灭活过程会使部分病毒蛋白结构破坏，从而可能会降低疫苗的免疫原性。
BEI属氮丙啶（Aziridine）类化合物，是由2-溴乙胺氢溴酸盐（2-Aminoethyl bromide hydrobromide，BEA）在碱性环境下环化而成。
BEI作为核酸灭活剂，通过干扰核酸代谢，破坏病毒核酸达到灭活病毒的目的，而不影响其蛋白质成分。
本试验采用BEI对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验，旨在找到一种安全、有效的替代甲醛的灭活水貂肠炎细小病毒的灭活剂。
试验结果表明，BEI在一定浓度下，能有效灭活水貂肠炎细小病毒，随着BEI的浓度升高，灭活能力越强，所需的灭活时间越短；BEI终浓度为0.002mol/L、灭活时间24h是水貂肠炎细小病毒适宜的灭活参数；使用该参数制备的疫苗进行了安全和免疫效力试验，安全试验结果表明，BEI灭活的疫苗对水貂安全；从效力试验的结果可以看出，BEI灭活的疫苗较甲醛灭活疫苗HI抗体水平略高，这可能与BEI灭活时不影响蛋白成分，最大程度保留了病毒的免疫原性有关。
本试验的结果证明，BEI灭活制备的水貂肠炎细小病毒疫苗对水貂安全，免疫效果良好，其诱导产生抗体的能力优于传统的甲醛灭活疫苗。
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