实验七稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化

（ml）
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描述酵母菌菌落特征： 描述霉菌菌落特征
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每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体 积）×稀释倍数
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二、实验原理---土壤中真菌的分离纯化
马丁孟加拉红---链霉素培养基
马丁培养基 孟加拉红 链霉素
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三、实验器材
（一）培养基
1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、马丁孟加拉红---链霉素培养基
（二）其他
1、无菌培养皿 2、无菌吸管 3、无菌水
2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落
数乘以稀释倍数报告；
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四、实验步骤---从土壤里分离真菌
1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样
10g 10-1
90ml
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10-2
10-3
10-4
1可0-5 编辑版
（三）仪器
1、超净工作台 2、玻璃刮铲 3、酒精棉球
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四、实验步骤---稀释平板计数法
1、熔化培养基 2、倒平皿 3、梯度稀释法稀释原菌样品
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四、实验步骤
4、涂平皿： 选取1/106,1/107,1/108三个稀释度计数，每皿取
菌液0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一 个重复。
1）若0.5≤比值≤2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报 告。
2）若2≤比值或比值≤ 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。
（二）所有菌落数均不在30~300间
以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌
落数乘以稀释倍数报告；
实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的 分离纯化
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一、实验目的
掌握活菌计数的基本原理及方法 掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法
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二、实验原理---稀释平皿计数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散 的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落 肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来， 计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌 数。
5、37℃倒置培养2天
6、计数：
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积
（ml）
来自百度文库
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菌落计数规则： （一）选择平均菌落数在30~300间的平板
1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释 度的菌落数的值）：
4、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，
用玻璃刮铲涂布均匀。
5、28℃倒置培养3~7天
6、观察并描述真菌菌落特征
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五、实验结果及分析
稀释平皿计数法：
稀释倍数 106
107
108
菌落数
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积